HPLC法同时测定陈香露白露片中的6种成分

高宇明 袁文洪 谢 艳 何 琴 吴秀清

四川省资阳市食品药品检验检测中心，四川 资阳 641300

陈香露白露片处方由甘草、次硝酸铋、陈皮、碳酸镁、川木香、氧化、大黄、碳酸氢钠、石菖蒲等九味药组成，具有健胃和中，理气止痛的功效，临床常用于胃溃疡，糜烂性胃炎，胃酸过多，急性、慢性胃炎，肠胃神经官能症和十二指肠炎等。目前全国有96家药品生产企业取得了陈香露白露片的药品生产批件。其中执行的药品标准以《卫生部药品标准》中药成方制剂第八册(WS3-B-1553-93)为主。另有部分企业增加薄膜衣规格后申报了新的药品标准，但涉及检验部分内容均较原《卫生部药品标准》无实质区别。检验项目为性状、钠盐鉴别、检查(片重、微生物限度、崩解时限)、次硝酸铋含量测定，缺少对药材的含量检测。

目前，有多种方法用于检测处方中各药材的有效成分，如杨秀梅等用高效液相色谱法测定陈皮中的橙皮苷、川陈皮素、桔皮素的含量[1]；刘香南等用高效液相色谱法测定甘草中甘草苷、异甘草苷、甘草次酸、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A的含量[2]。直接测定陈香露白露片中药味功效成分的报道较少，有李应芬等用高效液相色谱法测定陈香露白露片中甘草酸的含量[3]，柳梦婷等用高效液相色谱法检测石菖蒲中α-细辛醚、β-细辛醚的含量[4]。但未见有同时测定陈香露白露片中各药味有效成分的报道，无法对药品的质量进行较好的控制。因此，实验采用HPLC法测定处陈皮、川木香、石菖蒲的主要有效成分，以考察药品质量。陈皮中的主要有效成分为挥发油和黄酮类，其中橙皮苷、新橙皮苷、川陈皮素在陈皮中含量较高，活性也比较强。川木香的主要活性成分为木香烃内酯和去氢木香内酯。石菖蒲主要有效成分为挥发油，包括α-细辛醚、β-细辛醚、甲基丁香酚等，其中α-细辛醚、β-细辛醚含量较高。故本实验选取其中的新橙皮苷、橙皮苷、α-细辛醚、β-细辛醚、川陈皮素、木香烃内酯进行含量测定，较具有代表性和可操作性。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津LC-20AT液相色谱仪(含SPD-20A检测器)；XSE205DU型电子分析天平(梅特勒托利多公司)；SB25-12D型超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 材料 从市场上抽取的陈香露白露片，产自全国6家生产企业的，共计6批次，详见表1。新橙皮苷(批号：111857-201101)、橙皮苷(批号：110721-201617)、α-细辛醚(批号：100298-201203)、β-细辛醚(批号：112018-201601)、木香烃内酯(批号：111524-201710)购自中国食品药品检定研究院，川陈皮素对照品(批号：ST00691020MG，上海诗丹德生物技术有限公司)。

表1 样品信息

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 混合对照品溶液的制备 取对照品新橙皮苷、橙皮苷、α-细辛醚、β-细辛醚、川陈皮素、木香烃内酯适量，精密称定，加50^%乙醇制成浓度分别为,24.778、16.322、5.574、5.226、9.582、6.359 μg/mL的混合对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液制的制备 取研细的陈香露白露片粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加50%乙醇适量，超声(40 KHz，500 W)提取30 min，放冷，加50%乙醇至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，即得供试品溶液

2.2 色谱条件 Luna C18色谱柱(250 mm×4.60 mm，5 μm；流动相甲醇-水，梯度洗脱(0～10 min，55%～55%；10～60 min，55%～95%；60～65 min，95%～95%)；检测波长254 nm；流量1.0 mL/min；进样量40 μL；柱温30℃。色谱图见图1。

2.3 线性关系考察 精密吸取“2.1.1”项下混合对照品溶液适量，加50%乙醇溶液稀释制备成6个浓度的系列混合对照品溶液，按照“2.2”项下的条件进行测定。以对照品的质量浓度为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，结果见表2，表明各成分在各自的范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验 精密吸取“2.1.1”项下混合对照品溶液，在“2.2”项色谱条件下，连续进样6次，测得其RSD分别为1.25%、1.66%、1.39%、1.08%、1.43%、0.95%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 精密称取研细的陈香露白露片粉末(过三号筛)，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。于制备后0、2、4、8、16、32 h在“2.2”项色谱条件下进样，测得其RSD分别为2.08%、1.65%、2.32%、2.20%、2.88%、1.54%。表明供试品溶液在32 h内稳定性良好。

表2 各成分线性关系

2.6 重复性试验 精密称取研细的陈香露白露片粉末(过三号筛)，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液6份，分别在“2.2”项色谱条件下进样，测得其RSD分别为0.99%、1.85%、1.52%、1.78%、2.85%、2.12%，表明该方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验 取6份已知含量的陈香露白露片粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，分别精密加入“2.1.1”项下各单一对照品适量后，按按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.2”项色谱条件下进样，以外标法分别计算各成分的量，计算其加样回收率，结果见表3。

表3 各成分加样回收率试验结果 (n=6)

续表3

表3 各成分加样回收率试验结果

2.8 样品含有量测定 取4批陈香露白露片供试品，按“2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液各2份，在“2.2”项下色谱条件下进样，以外标法计算6中成分的含量，结果见表4。

表4 各成分含量测定结果 (mg/g，n=2)

3 分析与讨论

3.1 目标成分选择 实验最初选择了陈皮、甘草、大黄、川芎、石菖蒲六味药材中的新橙皮苷、橙皮苷、甘草苷、甘草素、α-细辛醚、β-细辛醚、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚、甘草次酸等十五种有效成分进行含量测定。实验过程中，发现部分成分存在与处方组成中其他组分分离度太低、在254 nm下无吸收，或者在200多批次陈香露白露片中基本无检出，没有实际意义。经过反复考察和筛选以后，选取了陈皮、川木香、石菖蒲中的新橙皮苷、橙皮苷、α-细辛醚、β-细辛醚、川陈皮素、木香烃内酯进行含量测定方法建立。

3.2 波长选择 经紫外光谱扫描，6中成分在225、249、254等处均有较强吸收。且254 nm下各成分峰形、分离度较高，检出强度适中，故选择254 nm为检测波长。

3.3 指标成分分析 所检测的6个厂家6批次陈香露白露片中，除橙皮苷外，其余五个成分均有不同程度的未检出。其中细辛的指标成分细辛醚检出率较低，川木香的指标成分木香烃内酯次之。表明不同厂家之间陈香露白露片的质量差异较大。综上所述，所建立的高效液相色谱方法操作简单，重复性好，可在较短时间内实现陈香露白露片中6中成分含量的同时测定。因此，该方法可用于陈香露白露片的质量控制与评价。