老年胃低分化腺癌患者外周血内皮素-1检测及临床意义探讨

张大伟 臧瑞 王洪亮 赵景山 张影 李伟彬 张萌萌 季福建

胃癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，在病理组织学分型中以低分化腺癌最为常见。随着近年来对胃癌生物学特性的研究不断深入，人们发现内皮素（ET）在胃恶性肿瘤患者血液中的表达水平明显高于正常，其中以内皮素-1（ET-1）表达更为突出。本研究应用放射免疫法检测80例老年胃低分化腺癌患者行胃癌根治术治疗前后血清中ET-1的表达，并结合相关临床资料探讨ET-1与胃腺癌恶性程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期的关系，以及对远期预后判断的价值。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2018年10月15日至2019年1月1日收治的老年胃腺癌手术患者共80例作为胃低分化腺癌组，其中长春市人民医院普外科30例，吉林大学中日联谊医院胃肠外科50例，男45例，女35例，年龄70~88（75.0±5.8）岁；均行标准的D2胃癌根治术，胃癌分期以2010年国际抗癌联盟公布的PTNM分期为标准。选取同期吉林大学中日联谊医院胃肠外科胃良性腺瘤患者20例作为良性对照组，其中男10例，女10例，年龄69~85（74.0±5.3）岁；该组患者采取胃良性腺瘤单纯切除术，切缘距瘤组织≥0.5cm，已保证瘤组织完整切除。纳入标准：（1）术前均行胃镜检查，明确病理诊断为胃低分化腺癌或胃良性腺瘤；（2）未接受过放、化疗或靶向治疗；（3）预期生存期＞3 个月；（4）心、肝、肾等主要脏器功能基本正常。排除标准：（1）接受过放、化疗或靶向治疗；（2）骨转移患者、存在严重的骨质疏松；（3）存在严重或不能控制的全身性疾病的证据；（4）无法控制的活动性感染；（5）各类传染病。另选取长春市人民医院经常规体检无重大疾病的健康体检者20例作为健康对照组，其中男 10 例，女 10 例，年龄 70~82（74.0±4.9）岁。3 组受检者性别和年龄比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。所有患者均自愿入组并知情同意，本研究均经两家医院医学伦理委员会批准。

1.2 标本收集 术前1~3d采集患者清晨空腹肘部静脉血3~5ml。采集完成后注入含10%的乙二胺四乙酸二钠和抑肽酶的试管中混匀（上海艾研生物公司，批号：367863，规格：6ml），4℃下 3 000r/min 离心 15~20min。分离出的血清用0.1%TFA 6ml酸化，3 000r/min离心，20min后取其上清液，放置于-80℃冰箱保存待测。术后7~10d再次采集血液标本，制作及保存方法同上。

1.3 血清ET-1测定 采用放射免疫法，实验检测重复3次，取平均值。所选购ET-1试剂盒组为上海钰博生物科技有限公司生产（批号：N113735，规格：96T）。所用仪器：γ计数仪为美国bookman。主要技术参数：ET-1测定范围20~4 680pg/ml，灵敏度10pg/ml，回收率平均95%~100%，批内CV＜5%，批间CV＜10%，正常参考值38.78~71.50pg/ml。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件。计量资料以表示，组内比较采用配对t检验，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组受检者外科治疗前后ET-1表达水平比较胃低分化腺癌组患者ET-1表达水平术前高于良性对照组及健康对照组，胃低分化腺癌组术后表达水平明显降低，但仍高于良性对照组（均P＜0.01），见表1。

2.2 胃低分化腺癌组患者术前ET-1表达水平与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期的关系 胃低分化腺癌组患者ET-1表达水平在不同肿瘤浸润深度中比较差异有统计学意义（P＜0.05）；淋巴结转移阳性者的ET-1表达水平比阴性者高（P＜0.05）；临床分期Ⅲ期者的ET-1表达水平比Ⅰ～Ⅱ期者的高（P＜0.05），见表2。

表1 3组受检者外科治疗前后ET-1水平比较（pg/ml）

表2 胃低分化腺癌组患者术前ET-1表达水平与浸润深度、淋巴结转移、临床分期关系（pg/ml）

3 讨论

ET是1988年由Yanagisawa等[1]首次从培养的猪主动脉内皮细胞上清液中分离并纯化出来的，由21种氨基酸残基组成的血管活性多肽。ET由血管内皮细胞产生，以极低的生理浓度释放，其中以ET-1生理作用最强，在多种恶性肿瘤患者血清中ET-1表达升高，主要作用于周围淋巴结，在肿瘤侵袭中表现出器官特异性[2]。在乳腺癌患者中ET-1水平明显增高，且与肿瘤恶性程度呈正比[3]，浸润性癌中ET-1过度表达并激活水平基因，从而促使其发生骨转移[4]。ET不但能促使癌细胞淋巴管生成[5]，还能促进恶性肿瘤新生血管形成[6]，其作用机制为肿瘤的侵袭转移提供了重要的理论基础。因此通过抑制ET-1的分子靶向治疗将成为抑制胃恶性肿瘤侵袭、转移的新的治疗方法[7]。在新加坡，胃癌已进入分子分型阶段[8]，我国除癌胚抗原等肿瘤标志物外，尚未有特异性标志物。本文意在探讨ET-1在胃低分化腺癌患者手术治疗前后表达水平的变化，为胃癌肿瘤标志物检测提供理论依据。

本研究结果表明，老年胃低分化腺癌患者ET-1表达水平术前高于良性对照组和健康对照组，术前ET-1呈现出明显的高表达状态，这与国内多家单位的研究结果相一致[9-10]。经行标准的胃癌根治术后其表达水平下降明显，说明ET-1是由癌组织本身分泌或释放的一种物质，其在血清中也呈高表达。本研究还揭示ET-1表达水平与肿瘤浸润深度相关，如T4期腺癌浸透全层胃壁其ET-1表达水平更高，且淋巴结转移阳性者的ET-1表达水平比阴性者高，临床Ⅲ期者ET-1的表达水平比Ⅰ～Ⅱ期者的高。进一步证明ET-1可反映出胃低分化腺癌恶性程度的高低。胃低分化腺癌组ET-1表达水平术前升高，术后明显下降，差异具有统计学意义，说明ET-1可作为胃低分化腺癌的肿瘤标志物。虽然经胃镜病理检查是诊断胃癌的金标准，但部分老年患者因种种原因无法实施胃镜检查，且这种检查有一定的风险和创伤，更不适合广泛应用于胃癌筛查。鉴于采静脉血做ET-1检测更方便并利于推广，近10年来诸多学者对此进行了研究和探讨。

本研究结果还发现，胃低分化腺癌组术后ET-1表达水平明显降低，但仍高于健康对照组，故ET-1表达水平可能受某些肿瘤生长基因调控。Piera等[11]发现ET-1可促进肿瘤细胞的侵袭，故手术切除肿瘤意义重大。本研究中胃低分化腺癌组患者均行标准胃癌根治术，各组淋巴结清扫彻底，故血液中ET-1表达水平明显降低。如术式不标准或切除不彻底可能会影响ET-1术后的表达水平，故建议手术清扫淋巴结应严格按照胃癌根治术的标准进行，尽可能清除疑似转移淋巴结。由于本研究胃低分化腺癌组患者均为70岁以上老年人，其血清ET-1水平可能会受骨质疏松的影响[12]。

综上所述，胃低分化腺癌患者ET-1的高表达可用来判断胃低分化腺癌患者术后预后，因此术后仍呈现高表达者患者均应行术后辅助治疗，如放化疗、分子靶向治疗、中医药治疗等综合治疗。定期采血监测体内ET-1表达水平变化，将有助于评价患者术后放、化疗等辅助治疗疗效[13-14]，并指导治疗和判断远期预后。外周血ET-1是否可作为胃癌肿瘤标志物，需要进一步深入研究。

目前本研究还存在不足之处：（1）样本量较少，会导致研究结果不够精确，需扩大样本量，进一步对癌组织中ET-1的表达情况进行深入研究；（2）对照研究的病理类型较少，应收集更多的病理类型，如印戒细胞癌、鳞状细胞癌、未分化癌及一些特殊型癌。（3）血清中的ET-1是否来自肿瘤组织的释放，还是激活某些启动因子而释放？以及是否可致癌痛？[15]（4）行胃癌根治术后ET-1表达水平降低，虽然与切除瘤体相关，但是否与清除淋巴结有关需大量临床数据加以印证。（5）临床Ⅲ期患者无法耐受扩大根治术，因此均行标准的胃癌根治术，这可能会对ET-1表达水平有所影响。目前国内外上市的ET受体拮抗剂主要有替唑生坦、西他生坦等，主要应用于心肺疾病及部分恶性肿瘤（如肺癌、前列腺癌等）的治疗，还能增强某些化疗药物的效果。ET受体拮抗剂在治疗恶性肿瘤中的作用已被大多数学者认可，有望成为治疗恶性肿瘤的新型分子靶向药物。