铁苋菜饮片质量标准制定

徐岳鑫，张雪峰，胡生俊

宿迁市食品药品检验所，江苏宿迁 223800

铁苋菜为大戟科植物铁苋菜Acalypha australis L.的干燥地上部分，在我国除西部高原或干燥地区外，其余各省区均有产生，长于平原或山坡较湿润地方和空旷草地[1]。铁苋菜饮片收载于《江苏省中药饮片炮制规范》2002年版[2]，其性凉味苦、涩，归心、肺、大肠、小肠经，具有清热、解毒、利湿、收敛、止血的功效，用于肠炎、痢疾、吐血、衄血、便血、崩漏；外治痈疖疮疡、皮炎湿疹。原质量标准较为简单，仅有性状介绍，无法有效控制饮片的质量。本实验对铁苋菜饮片的性状、显微特征、薄层色谱、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物和含量测定等进行研究，为该饮片质量标准的修订奠定了基础。

1 仪器和药品、试剂

1260高效液相色谱仪 （美国Agilent公司）；BX51光学显微镜 （日本Olympus公司）；AUW120D电子天平 （日本岛津公司）；ATS4全自动点样仪及摄像装置（瑞士Camag公司）；FED115D烘箱（德国Binder公司）；P330马弗炉（德国Nabertherm公司）。

没食子酸对照品 （纯度90.8%，批号110831-201605）、铁苋菜对照品（批号 121655-201502），均由中国食品药品检定研究院提供；试剂为分析纯；水为纯化水。

收集铁苋菜样品共8批，经江苏省中科院植物研究所徐增莱教授鉴定为大戟科植物铁苋菜Acalypha australis L.的干燥地上部分。

2 方法与结果

2.1 药材性状

为不规则的短段，茎、叶、花、果、种子混合。茎类圆形，切面黄白色，有髓，表面棕色，有纵条纹；叶多皱缩，破碎，黄绿色；花序腋生，苞片三角状肾形，合时如蚌；蒴果小，三角状扁圆形，种子黑色。气微，味淡。

2.2 显微特征

粉末黄绿色。叶上表皮细胞垂周壁略平整，下表皮细胞垂周壁波状弯曲，气孔平轴式。非腺毛长80～200μm，由 3～4（5）个细胞组成。草酸钙蔟晶散在，直径 26～56μm。显微图片见图 1。

图1 铁苋菜显微特征图

2.3 薄层色谱鉴别

取本品粉末1g，加甲醇20mL，超声提取20min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取铁苋菜对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验[3]。吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm处检视。在供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图2。

图2 铁苋菜薄层色谱图

2.4 水分测定

8批样品水分的平均值为11.35%，以平均值的120%设限，为13.62%，暂规定本品水分不得超过14.0%。

2.5 灰分测定

8批样品灰分的平均值为11.39%，以平均值的120%设限，为13.67%，暂规定本品总灰分不得超过14.0%。酸不溶性灰分的平均值为3.53%，以平均值的120%设限，为4.24%，暂规定本品酸不溶性灰分不得超过5.0%。

2.6 浸出物测定

8批样品浸出物（热浸法，以50%乙醇为溶剂）的平均值为21.05%，以平均值的80%设限，为16.84%，故暂规定本品醇溶性浸出物不得少于16.0%。

2.7 没食子酸含量测定

2.7.1 色谱条件 色谱柱：安捷伦TC-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇为 A，0.1%磷酸溶液为B （0～5min，A 为 10%，B 为 90%，5～20min，A 为10%→90%，B 为 90%→10%）； 流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：270nm；进样量：5μL。

2.7.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品10mg，置50mL量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

2.7.3 供试品溶液的制备 精密称取本品粉末0.5g置圆底烧瓶中，加入4mol·L-1盐酸50mL，称定重量，加热回流 4h，放冷，再称定重量，用 4mol·L-1盐酸补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.7.4 线性关系考察 精密吸取“2.7.2”项下对照品贮备液适量，配成没食子酸浓度分别为4.11、20.55、41.10、61.65、102.75、205.50 μg·mL-1的对照品溶液，分别进样5μL，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为：Y=14.224X+3.755 2，r=0.999 6。结果表明，没食子酸对照品浓度在 4.11～205.50μg·mL-1范围内呈现良好线性关系。

2.7.5 精密度试验 精密吸取“2.7.4”项下浓度为61.65μg·mL-1的对照品溶液5μL，连续进样6次，对照品溶液峰面积的RSD为0.3%，表明精密度良好。

2.7.6 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别于 0、3、6、12、24 h 进样 5 μL，按“2.7.1”项下色谱条件测定，峰面积的RSD为0.5%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7.7 重复性试验 取同一批样品，按“2.7.3”供试品溶液制备方法平行制备6份，按“2.7.1”项下色谱条件测定，计算没食子酸的含量的RSD为1.6%，表明重复性良好。

2.7.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的铁苋菜样品6份，每份0.25 g，按低、中、高浓度分别精密加入没食子酸对照品约 2.4、3.0、3.6mg，照“2.7.3”项下制备供试品溶液，按“2.7.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率，结果平均回收率为97.22%，RSD为1.91%。

2.7.9 样品测定 按“2.7.3”项下制备供试品溶液，按“2.7.1”项下色谱条件，对8批样品进行测定，结果按干燥品计算，没食子酸含量分别为1.23%、1.04%、0.33%、0.91%、1.03%、0.95%、1.96%、1.37%，平均值为1.10%，以平均值的80%设限为0.88%，故暂规定铁苋菜中所含鞣质以没食子酸计不得少于0.80%。HPLC法图谱见图3、图4。

图3 没食子酸对照品色谱图

图4 铁苋菜饮片色谱图

3 讨 论

3.1 薄层色谱鉴别

在本实验研究中，对不同取样量（0.5 g、1 g）和不同提取方式（冷浸过夜、超声处理30min、水浴加热回流30min）分别进行了考察，确立了最佳样品前处理方法。经考察，供试品溶液在24h内点样，色谱图中斑点清晰，重现性好。另对不同薄层板（默克产硅胶G预制薄层板、自制硅胶G薄层板）、不同展开系统[三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸（5∶5∶1）、正己烷-乙酸乙酯（2∶1）、石油醚（60 ℃～90 ℃）-乙醚（9∶1）]开展实验，结果表明，本方法的薄层色谱斑点显色稳定、清晰一致。本实验还针对不同点样量（2μL、5μL、10μL）和不同温、湿度（t：5℃，RH：49%；t：19℃，RH：72%；t：19 ℃，RH：18%；t：19 ℃，RH：50%）等薄层条件进行了考察，结果表明，本薄层色谱耐受性好，能得到满意的实验结果。

3.2 浸出物测定

分别采用不同浸出方法（热浸法、冷浸法）、不同溶剂（水、50%乙醇、95%乙醇）进行比较，结果表明，以水和50%乙醇作溶剂，采用热浸法浸出物较高；但样品经水提取后，过滤速度太慢，较为耗时，不利于实验操作。因此，确定以50%乙醇为溶剂，采用热浸法来测定本品的浸出物含量。

3.3 含量测定

在设计含量测定方案时，考虑到铁苋菜具有清热解毒、收敛止血的功效，主要含有鞣质、黄酮类、有机酸类化合物[4，5]。其中有机酸类为其清热解毒功效的药理学基础，故也开展了咖啡酸、绿原酸和原儿茶酸等有机酸的含量测定，结果含量较低，故未选择有机酸类进行测定。鞣质是铁苋菜收敛止血作用的主要活性成分[6]。鞣质具收敛性，内服可用于治疗胃肠道出血、溃疡和水泻等症；外用于创伤、灼伤，可使创伤后渗出物中蛋白质凝固，形成痂膜，可减少分泌和防止感染，能使创面的微血管收缩，有局部止血作用。Park WY等[7]发现，铁苋菜中所含的鞣质类型为没食子酸型鞣质，而没食子酸作为该鞣质的水解产物，具有止泻止血的药理作用[8]。同时参考 《中国药典》2015年版一部中收载的地榆、五倍子、委陵菜等具有收敛止血功效的饮片，均采用酸水解法测定所含鞣质水解后的没食子酸的含量，故本实验借鉴此思路，来测定铁苋菜样品中没食子酸的含量。在有的文献中[9]，采用甲醇超声提取法直接测定其中没食子酸含量，本实验也用该方法对8个样品进行提取、测定，结果表明，没食子酸含量极低，仅为0.01%～0.06%，说明铁苋菜中游离态的没食子酸含量极低，故选择了酸水解的方法测定铁苋菜中没食子酸的含量。