直肠黏膜酪酪肽(PYY)表达在肠易激综合征诊断中的价值

陈晓敏， 吴建华， 罗 云， 施月芳， 桂 琴， 吴跃龙

1.上海市嘉定区安亭医院消化内科，上海 201805; 2.上海健康医学院附属嘉定区中心医院病理科

肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS)是一种慢性肠道功能紊乱性疾病，表现为腹痛或腹部不适伴排便习惯和粪便性状改变，该病总患病率在西方国家为7%～21%[1-2]，我国约5%。随着饮食结构的改变，我国该病的发病率也在逐年上升。目前普遍认为IBS的病因是多因素相互作用的结果，发病机制复杂。目前只能通过大量昂贵的检查和化验排除器质性疾病获得诊断，因此临床上IBS诊断还是一个排除性诊断[3]。本研究通过观察直肠黏膜酪酪肽(peptide tyrosine tyrosine,PYY)表达与IBS的关系，为IBS诊断提供一个新的方向。

1 资料与方法

1.1 一般资料对照组：21名，因其他症状和体征的正常体检者或健康志愿者，均有正常完整的结肠，现无任何肠道疾病症状的成年人(20～70岁)，男11名，女10名，平均年龄46岁。IBS组：按照罗马Ⅲ标准[4]诊断为IBS患者80例，年龄20～70岁，分为便秘型IBS(IBS-C)41例(男21例，女20例，年龄46～34岁)、腹泻型IBS(IBS-D)39例(男20例，女19例，平均年龄46.85岁)。IBS患者伴有其他胃肠道疾病剔除。有糖尿病、肝肾疾病、免疫系统疾病者剔除。所有成员均知情同意，签署知情同意书，直肠黏膜活检很快会自行修复，不会对受检者造成额外伤害，并通过伦理审查。所有入选者近期均无服药史。

1.2 主要试剂PYY免疫组化试剂由上海长嘉生物科技有限公司代购，美国Abcam公司提供，多克隆兔抗PYY抗体(Anti-peptide YY antibody ab22663)。

1.3 方法

1.3.1 标本处理：所有受检者结肠镜检查前口服复方聚乙二醇电解质散溶液2 000 ml清洁肠道，然后进行结肠镜检查。所有受检者结肠镜下黏膜均正常，受检者在距肛直肠15 cm处3点、9点各取黏膜1块，放入10%甲醛液中固定，送检病理科进行标本处理：脱水、石蜡固定、切片。活检黏膜常规HE染色，2块黏膜分别利用特殊抗体作PYY免疫组化染色。免疫组化实验步骤按照试剂盒说明书进行。

1.3.2 染色结果判定：免疫反应阳性细胞染色结果分析采用粗略计分标准，随机清点5个高倍视野阳性细胞数取平均值。染色结果判断：PYY阳性反应颗粒呈棕黄色或棕褐色，无着色为阴性反应，分布于腺上皮和间质中。判定标准：在视野中未见阳性着色细胞为(-)，记0分；阳性细胞在视野中占<25%为+，记1分；阳性细胞在视野中占25%～50%为++，记2分；阳性细胞在视野中占50%～75%为+++，记3分；阳性细胞在视野中占>75%为++++，记4分。所有标本检查均由一人完成，检查者对所有标本情况不知情。标本免疫组化检测一次性完成，保证试剂同一批次。

2 结果

2.1 一般情况IBS组和对照组的年龄和性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)。所有受检者结肠镜检查中均未见异常，直肠黏膜活检标本常规HE染色组织学检查无异常。

2.2 直肠黏膜PYY阳性细胞数量计分IBS组PYY阳性细胞数量低于对照组(见图1)。对照组直肠黏膜PYY阳性细胞数量计分：2.38±0.92；IBS组直肠黏膜PYY阳性细胞数量计分：1.51±0.67；采用独立样本t检验，差异有统计学意义(P<0.05)。IBS-C直肠黏膜PYY阳性细胞数量计分：1.54±0.71；IBS-D直肠黏膜PYY阳性细胞数量计分：1.49±0.64，各组间比较采用单因素方差分析，差异均有统计学意义(P<0.05，F=11.668)。

图1 PYY免疫组化阳性细胞(400×) A：IBS组；B：对照组Fig 1 PYY-immunoreactive cells (400×) A: IBS group; B: control group

3 讨论

胃肠激素是由存在于胃肠道黏膜内的数十种内分泌细胞分泌的，主要化学成分为多肽，它既可作为循环激素起作用，也可作为旁分泌物在局部起作用或分泌入肠腔发挥作用。目前很多学者就IBS与胃肠激素之间的关系做了多方面的研究，提示胃肠内分泌细胞异常在IBS病理生理中起重要作用，提示是一种治疗IBS潜在的手段[5-9]。

神经肽Y家族包括NPY(neuropeptide Y)、PYY和胰多肽(pancreatic polypeptide, PP)，为36个氨基酸组成的肽类物质，广泛分布于中枢和外周神经系统。其中NPY主要分布于神经系统，PYY、PP主要分布于胃肠道。PYY主要由分布于回肠及结肠黏膜的内分泌细胞即L细胞分泌，在小肠少量分布(5 pmol/g)，回盲部、升结肠含量分别为84 pmol/g、82 pmol/g，乙状结肠含量较高，达196 pmol/g，而直肠黏膜含量最高达480 pmol/g[10]。

血浆PYY变异较大，空腹血浆PYY水平较低，随着进食后可升高。有研究显示，空腹及餐后血浆PYY水平在IBS及对照组差异无统计学意义[11]，血浆PYY因空腹与进食导致较大变异，因此血浆PYY水平不能作为诊断IBS的有效生物标志物。

ZHANG等[12]研究发现，IBS患者禁食时血清NPY水平及乙状结肠黏膜NPY水平均较对照组减少。李军红、惠德生等通过药物试验提示NPY在IBS发病机制中起重要作用[13-14]。刘欣等[15]研究发现，IBS模型大鼠血清PYY水平在IBS-D组高于正常对照组，IBS-C组与正常对照组比较，差异无统计学意义，IBS-D组大鼠空肠黏膜上皮细胞PYY表达与IBS-C、正常对照组比较，差异均无统计学意义。因为肠道PYY在直肠黏膜含量最高，而NPY以神经系统分布最广，所以上述研究均不能具有很好的代表性。

国外研究IBS患者结肠各部位PYY分布也有差异，结论不一致。有研究发现，IBS患者回盲部PYY细胞在总体IBS及IBS-C组中较对照组升高，IBS-D组与对照组比较，差异无统计学意义，PYY与便秘程度相关，与腹痛、腹泻无关[16]。有研究发现，IBS组右半结肠、左半结肠黏膜PYY密度较正常对照组减少，各亚型IBS组结肠黏膜PYY密度较正常对照组减少[17]。

本研究显示，IBS总体、IBS-D、IBS-C各组直肠黏膜PYY表达均显著低于对照组，这与EL-SALHY等[18]研究相似。PYY抑制胃肠动力及胃肠道分泌，刺激水、电解质重吸收，是“回肠闸”的一个主要调节剂[19]，且抑制前列腺素E2和血管活性肠肽(VIP)分泌小肠液[19-21]。推断IBS-D患者发病，由于PYY分泌减少，导致肠道蠕动及分泌增强，肠腔水电解质重吸收减弱，回肠闸作用减弱，最终导致腹泻。而IBS-C患者虽然PYY减少，却导致便秘，其原因不明，考虑IBS有多种胃肠激素参与，机制复杂，有待进一步研究。

有研究表明,直肠黏膜PYY表达在淋巴细胞性结肠炎增高，在溃疡性结肠炎及结直肠癌中无变化，在克罗恩病中减少[22-23]。因此，除了克罗恩病，直肠PYY细胞密度可能将IBS从其他胃肠疾病中区分出来。

综上所述，直肠黏膜PYY含量最高，直肠黏膜PYY表达与IBS密切相关，直肠黏膜活检相对较容易,提示直肠黏膜PYY表达可能作为IBS诊断的生物学标志物。