复方嗜酸乳杆菌片对便秘的研究

周凯旋,李丽静，孙桂媛，朱志杰*

（通化金马药业集团股份有限公司·吉林 通化·134003）

在当今社会，由于不良饮食作息等生活习惯，以及人口的老龄化，使便秘的发生率逐渐上升[1]，而常用的以酚酞片为首的西药治疗副作用较大，且疗效并不理想[2]。近年来，有研究显示，肠道菌群的失调与便秘的发生密切相关，功能性便秘患者的肠道菌群组成在种类和数量上较健康人群有着显著差异[3]。为进一步研究益生菌对肠道的作用以及对比益生菌制剂与常用西药对便秘的作用差异，作者对便秘小鼠进行研究，探究益生菌对便秘的治疗作用。

1 材料

1.1 实验动物

健康成年SPF级昆明种小鼠48只，雌雄各半，体质量22～25 g，由辽宁长生生物技术股份有限公司提供，许可证号：SCXK（辽）2015-0001。饲养于长春中医药大学SPF级动物房中，自由摄入食物和水。

1.2 实验主要试剂及仪器

复方地芬诺酯片（产品批号1810020）购自常州康普药业有限公司；复方嗜酸乳杆菌片 （产品批号20190512）购自通化金马药业集团股份有限公司；酚酞片（产品批号180610）购自山西亨瑞达制药有限公司；伊红美蓝琼脂（产品批号20190311）、LBS琼脂（产品批号 20180831）、BBL琼脂 （产品批号 20190516）、粪肠球菌琼脂（20180831）均购自于青岛高科园海博生物技术有限公司；革兰氏染色液（产品批号20190327）购自北京索莱宝科技有限公司；厌氧罐及厌氧袋均购于日本MGC；生理盐水（产品批号1805290514）购于吉林省都邦药业股份有限公司。

2 方法

2.1 造模与给药

地芬诺酯便秘造模采用10mg/kg的剂量[4]，空白组灌胃同等量的蒸馏水，以0.1ml/10g的体重每天定时给小鼠灌胃，造模0.5h后，正常组、模型组给蒸馏水，给药组给药剂量为0.04g/ml的复方嗜酸乳杆菌片，酚酞片阳性对照组给药剂量为1.4mg/ml。

2.2 指标检测

2.2.1 粪便含水量的测定

给药第8天收集各组小鼠新鲜粪便，称量粪便的质量，烘干后再次称重，测定粪便含水量。粪便含水量＝(粪便湿质量－粪便干质量)/粪便湿质量

2.2.2 小鼠粪便菌落数

实验的第14天采集新鲜粪便，装于事先灭菌称重的10 mL离心管中，再次称重记录；加入生理盐水，玻璃棒搅碎，使彻底匀浆化，稀释并选择合适的稀释度接种。

2.2.3 粪便菌群观察

取100倍粪便稀释液，涂抹于载玻片，进行革兰氏染色，观察粪便菌群变化。

2.2.4 小肠运动实验

灌胃16天后，各组造模0.5 h后，分别灌胃含墨汁药物。25 min后，将小鼠脱颈处死。将肠系膜与腹腔分离，将肠道从幽门切下。小肠拉直，放于倒有生理盐水试验台，使其自然伸展，测量小肠的总长度。从幽门到墨水前端为墨水推进长度，计算墨汁推进率。

3 结果

3.1 复方嗜酸乳杆菌片对小鼠粪便含水量的影响

与模型组相比，正常组的小鼠粪便含水量较高（P<0.05），而给药组和阳性组粪便含水量均有所提高（P<0.05 和 P<0.01）结果见表 1。

表1 复方嗜酸乳杆菌片对小鼠粪便含水量的影响（X±s，n=12）

3.2 复方嗜酸乳杆菌片对小鼠粪便菌群的影响

将小鼠粪便进行革兰氏染色后，置于1000倍油镜下观察，发现相对于正常组，模型组细菌菌群中杆菌数量明显减少，表明小鼠肠道菌群失调，而给予复方地芬诺酯片后，小鼠的肠道菌群有所改善，给予酚酞片干预便秘发现小鼠粪便中菌群较模型组有着进一步的失调，结果见图1。

在进行菌群培养后发现，相对于正常组，模型组粪便中大肠杆菌、粪肠球菌、双岐杆菌、乳杆菌均具有下降的趋势，表明便秘对肠道菌群有损伤作用，给药组中各菌群都有着不同程度的上升，然而给予酚酞片的粪便菌群进一步发生失调，结果见图2。

3.3 复方嗜酸乳杆菌片对小鼠小肠运动的影响

与正常组相比，便秘模型组小鼠小肠碳墨推进率显著下降（P＜0.001），与模型组相比，给予复方嗜酸乳杆菌片和酚酞片的两组推进率有着不同程度的升高（*P＜0.05），促进小肠的蠕动（表 2）。

表2 复方嗜酸乳杆菌片对小鼠小肠运动的影响（X±s，n=12）

4 讨论

复方嗜酸乳杆菌片可提高粪便的含水量，促进肠道的蠕动，对于便秘，具有一定的治疗作用，对于便秘所导致的肠道菌群的紊乱具有一定的改善作用，常用治疗便秘的酚酞片，在长期使用后，易产生药物的依赖性，药物过量或长期滥用时可造成电解质紊乱，诱发心律失常、神志不清、肌痉挛以及倦怠无力等症状，且临床有出现皮疹、瘙痒、发热等症状[5]。此次实验显示，长期使用酚酞片对肠道菌群的平衡具有一定的损伤。而使用益生菌制剂复方嗜酸乳杆菌片后，便秘有所缓解，并且对肠道菌群具有一定的保护作用，如今益生菌在生活中应用非常广泛,医学方面对其研究也越来越火热[6]。肠道菌群与机体互相影响，紊乱的肠道菌群结构会通过代谢产物等途径影响机体正常的生理功能，机体新陈代谢、饮食等异常也会影响肠道的菌群结构[7]，使用益生菌制剂代替常用化学药物来治疗肠道相关疾病在未来或有较大的发展前景。