血清铁蛋白、转铁蛋白、层粘连蛋白水平与肝硬化Child-Pugh分级的相关性分析

江海燕

（四川大学华西广安医院检验科，四川 广安638000）

铁蛋白主要由肝脏合成，存储与肝脏、脾脏、骨髓等脏器中，为人体内储铁的标志［1］，可反映机体铁储存水平。血清铁蛋白为判断体内铁含量的重要指标，也是检查体内铁缺乏最敏感的指标［2］。血清转铁蛋白为负责运载由消化系统吸收的铁剂、红细胞降解释放的铁，以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生成［3］。在慢性炎症、肝细胞受损时，铁含量变化可加重疾病进程，影响疾病治疗及预后［4］。层粘连蛋白（LN）为肝纤维化、基质沉积相关的直接指标，可反映肝窦毛细管化、汇管区ECN增生，门脉高压及肝功能受损情况。为了解肝硬化患者血清铁蛋白、转铁蛋白、层粘连蛋白水平与肝硬化Child-Pugh是否具有相关性，本研究选择我院2016年5月至2018年5月收治130例肝硬化患者为研究对象，检测血清铁蛋白、转铁蛋白、层粘连蛋白水平，并分析与肝硬化Child-Pugh分级的关系，总结如下。

材料和方法

1 一般资料

选择我院2016年5月至2018年5月肝病科门诊或住院患者130例作为观察组，其中男75例，女55例；年龄25～75岁，平均年龄46.8±6.2岁；乙型肝炎肝硬化108例，丙型肝炎肝硬化14例，酒精性肝硬化8例。Child-Pugh肝功能分级A级70例，B级38例，C级22例。选择同期入院行健康体检者40例作为对照组，其中男23例，女17例；年龄26～75岁，平均年龄47.2±6.2岁。两组患者年龄、性别等一般资料差异无统计学意义（P＞0.05）。基线资料比较见表1。

表1 两组基线资料比较

2 肝硬化纳入标准与排除标准

纳入标准：①符合中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会修订的《慢性乙型肝炎防治指南》中的相关诊断标准［5］，并经临床、生化、影像、肝穿刺活检等证实为肝硬化；②门静脉、腹主动脉无血栓、斑块等；③无乙醇、精神类药物成瘾史；④所有患者均对本次研究知情同意，自愿签署知情同意书。

排除标准：①合并肝肾综合征者；②本研究前近1个月内接受过抗病毒治疗者；③肝脾良、恶性占位；④中重度脂肪肝；⑤既往有脾脏切除史；⑥合并心、肾、脑、肺等器官重大疾病。

3 研究方法

酶标仪为华东电子DG5033A型酶标仪，血清铁试剂盒、血清转铁蛋白试剂盒均购自合肥志宏生物技术有限公司。血清铁蛋白、层粘连蛋白检测步骤：取患者空腹静脉血3 mL，离心收集血清。检测前将试剂盒放置于室温平衡40 min，所有试剂在用前均轻轻摇匀。将标准品原液稀释成7.5、15、30、60、120 ng／mL。分别设置空白孔、样品孔、标准品孔。样品孔加入样品40μL，再加入抗-SF抗体／抗-LN抗体10μL，链霉亲和素-HRP 50μL，标准品孔加入不同浓度的标准品50μL。轻轻晃动混匀，盖上封板膜，37℃温育60 min。以洗涤液反复洗涤各孔5次，洗涤完毕后以吸水纸吸干酶标板。各孔加入显色剂A 50μL，再加入显色剂B 50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光反应15 min。每孔加入终止剂50μL，终止反应，于酶标仪上450 nm处检测各孔OD值，根据标准曲线计算各样品孔含量。

血清转铁蛋白（TRF）采用采用ELISA法检测，试剂盒购自北京中昊生物有限公司，严格按照试剂盒操作说明操作。具体步骤：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上准确加标准品样50μL，待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL（样品最终稀释度为5倍）。以封板膜封板后置37℃温育30 min。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复5次，吸干。每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。37℃温育30 min。温育完成后，重复洗涤5次。每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B 50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 min。每孔加终止液50μL，终止反应。以空白调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。

4 统计学处理

采用SPSS22.0统计学软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差描述，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。相关性分析采用Spearman相关分析。均以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 两组血清铁蛋白、转铁蛋白、层粘连蛋白水平比较

观察组血清SF水平显著高于对照组，血清TRF水平显著低于对照组（P＜0.05）。见表2。

表2 两组血清铁蛋白、转铁蛋白含量比较（）

表2 两组血清铁蛋白、转铁蛋白含量比较（）

组别 SF（μg／L） TRF（ng／L） LN（ng／mL）观察组405.64±52.83 1.82±0.46 150.48±30.09对照组 34.05±5.68 2.75±0.61 83.51±16.74 t值 44.316 8.889 13.433 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2 不同Child-Pugh分级肝硬化患者血清铁蛋白、转铁蛋白、层粘连蛋白水平比较

不同Child-Pigh分级患者血清SF、TRF水平差异有统计学意义。Child-Pugh A级患者血清SF、Child-Pugh评分显著低于Child-Pugh B级、Child-Pugh C级患者。Child-Pugh A级患者血清TRF水平显著高于Child-Pugh B级、Child-Pugh C级患者。Child-Pugh B级患者血清SF、Child-Pugh评分显著低于Child-Pugh C级患者。Child-Pugh B级患者血清TRF水平显著高于Child-Pugh C级患者（P＜0.05）。见表3。

评分Child-Pugh A级（70） 135.64±28.52 2.15±0.34 115.32±21.84 4.25±0组别 SF（μg／L） TRF（ng／L） LN（ng／mL） Child-Pugh.85 Child-Pugh B级（38） 408.36±55.37 1.94±0.31 154.68±30.15 7.92±0.94 Child-Pugh C级（22） 522.47±61.05 1.62±0.27 258.74±36.58 11.63±1.25 F值 865.583 23.763 231.469 555.580 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

3 血清铁蛋白与Child-Pugh评分的相关性分析

血清铁蛋白水平与Child-Pugh评分呈线性正相关（r＝0.915，P＜0.05）。见图1。

图1 血清铁蛋白与Child-Pugh评分的相关性

4 血清转铁蛋白与Child-Pugh评分的相关性分析

血清转铁蛋白水平与Child-Pugh评分呈线性负相关（P＜0.05）。见图2。

图2 血清转铁蛋白与Child-Pugh评分的相关性

5 血清层粘连蛋白与Child-Pugh评分的相关性分析

血清层粘连蛋白水平与Child-Pugh评分呈线性正相关（r＝0.908，P＜0.05）。见图3。

图3 血清层粘连蛋白与Child-Pugh评分的相关性

讨 论

肝硬化的发生机制尚未完全阐清，临床报道［6-7］显示，肝硬化的典型病理改变为胶原及其他细胞外基质合成、降解失衡，使其在肝内过量沉积，而使肝细胞坏死、纤维化。血清肝纤维化指标可反映肝硬化患者肝纤维化、肝功能损害程度，但该指标缺乏器官特异性［8］，在肝损害程度的诊断上还需联合其他生化指标。

人体肝脏为铁蛋白合成及含量最多的组织，肝脏在铁蛋白的合成、代谢中具有重要的作用［9］。生理情况下，铁元素以Fe2+的形式吸收入血，经铜蓝蛋白氧化成Fe3+，Fe3+与转铁蛋白结合后转运至组织，或通过幼红细胞膜转铁蛋白受体，以胞饮作用进入细胞内，再与转铁蛋白分离并还原成Fe2+，至线粒体中与原卟啉结合形成正铁血红素，最后与珠蛋白结合形成血红蛋白［10-12］。人体内1／2的铁以铁蛋白的形式贮存，铁蛋白主要功能为维持铁元素的代谢平衡，在机体需铁量增加时，铁蛋白释放出铁离子，参与机体活动［13］。故铁离子、铁蛋白代谢可客观反映肝脏的合成及代谢功能。BRUNS等［14］的研究发现，急性肝损伤后数月内，肝活检可见Kuffer细胞内含铁血黄素的沉积。GKAMPRELA等［15］对急性HBV／HAV感染者的活检结果显示，黄疸两周内未见可染色铁沉积，2周后所有患者均可见肝窦内皮细胞及分散的簇状巨噬细胞中铁蛋白沉积。上述研究均提示肝内铁的出现为肝细胞破坏释放的结果。本研究中，观察组血清SF水平显著高于对照组，且随着Child-Pugh分级的升高，SF水平也逐渐升高，提示SF在一定程度上反映肝硬化的损害程度，SF的水平升高与肝细胞坏死致SF及酶类释放有关，这与陶冉等［16］的文献报道结论一致。主要原因为：在病毒感染过程中，由于肝细胞炎性反应，使SF合成增加，同时由于部分肝细胞变性坏死，SF释放入血液可使SF升高。

临床报道［17］显示，TRF可作为判断肝病预后的指标之一。TRF水平可影响铁的状态，而铁在肝细胞的沉积与肝细胞损害、病毒复制、宿主的免疫反应密切相关。肝细胞损害时，肝细胞的储备功能下降，影响TRF的合成、分泌，血清TRF下降与肝细胞受损程度密切相关［18-19］。本研究中，观察组TRF水平显著低于对照组，且随着肝硬化Child-Pugh分级的升高，TRF水平下降更显著，可能原因为：随着肝硬化患者肝实质损害的加剧，肝细胞的储备功能进一步降低，影响到转铁蛋白合成及分泌。

层粘连蛋白为肝纤维化的常用评价指标，主要由肝脏贮脂细胞、内皮细胞、肝脏纤维化的肝细胞产生，也是基底膜的特有成分，与肝硬化密切相关。在肝纤维化时，肝窦内皮细胞间隙可有明显的LN沉积。对诊断肝纤维化及肝硬化严重程度有重要的临床价值。

Child-Pugh分级为目前临床广泛应用于肝储备功能评价的重要指标，积分越高，肝储备功能越差，肝功能损害程度就更严重［20］。血清铁蛋白、层粘连蛋白与Child-Pugh评分的相关性结果显示，血清铁蛋白、层粘连蛋白水平与Child-Pugh评分呈线性正相关，即血清铁蛋白、、层粘连蛋白含量随Child-Pugh升高而逐渐升高，这与血清铁蛋白、层粘连蛋白水平变化可反映肝脏储备功能变化的报道结论一致。血清转铁蛋白与Child-Pugh评分呈线性负相关，即血清转铁蛋白水平随Child-Pugh升高而逐渐降低，也可用来反映肝脏储备功能变化。

综上所述，SF、TRF与肝硬化程度密切相关，也与肝脏储备功能有关，检测血清SF、TRF水平可对肝硬化病情进展及肝硬化的鉴别诊断提供指导。