遗传学实验中染色体制片技术的方法改进

秦永燕，姚沁涛

（1.长治学院 生物科学与技术系，山西 长治 046011；2.长治市第一中学，山西 长治 046011）

经典遗传学实验中观察根尖有丝分裂、减数分裂、多倍体、核型和结构变异等实验都需要进行染色体装片的制备，装片制备的好坏直接影响实验结果的观察。因此染色体制片技术是经典遗传学实验的基本技术。笔者根据多年实验教学的经验认为，染色体制片技术的关键是如何获得分散良好的图片。对于经验丰富的研究者或教师而言可能很容易，但是对于初学者来说，在相对有限的时间内确保每次实验都能成功是有难度的。

根尖染色体装片制备的基本步骤是：材料培养——处理——固定——解离——制片——观察。对于不同的材料，培养方法、处理方法和解离条件都需要摸索，在材料相同的情况下，不同的制片方法则会得到不同的实验效果。因此，文章对经典的制片和十字交叉扣压法制片的效果进行分析总结，并提出一种新的改进方法，为初学者提供参考。

1 经典方法

将解离好的材料置于洁净的载玻片中央，用刀片切取分生区乳白色的区域，不管纵切还是横切，切出最薄的一片留下染色，剩余的放入废物缸中。染色之后，盖盖玻片。食指、中指固定盖玻片，取铅笔末端（有平面的一端）对准材料，轻敲多次，直至材料呈云雾状为止。

结果可能有部分细胞呈单层，没有重叠，可以观察，但是不均匀的地方还是有重叠现象，而且染色不均匀。此外，染液用量很难掌握，用量稍多则容易造成污染。

2 十字交叉扣压法

为了尽可能消除重叠现象，首先材料用量要少。于是改进方法，采用“十字交叉扣压法”。切取最薄的一小块组织于载玻片中央。另取一块载玻片，呈十字交叉压在材料上，用拇指垂直按压，将材料压散，然后小心将两块载玻片分开，注意不能移动材料的位置。此法中载玻片分离时很容易移动，也会造成部分重叠、染色不均匀等现象，影响观察。

3 改进方法

根据相关研究结果和学生的实际情况，对制片和染色这一步进行改进。取解离好的根尖，在载玻片上切取分生区部位的组织于1.5mL离心管底部，用玻璃棒将其捣碎，然后滴加染液，染色。最后用移液器吸取10μl滴于载玻片中央，盖盖玻片，轻压即可观察。此法既能保证细胞呈单层，染色均匀，又不会因染液用量过多而污染环境。该法用于学生遗传学实验中，学生很容易操作，效果很好，每次在有限时间内，学生都能成功地观察到实验结果。

图1是初学者用三种方法制备大蒜根尖有丝分裂装片的结果图，从图中可以清楚的看出经典法染色不均匀；十字交叉法有重叠现象；改进方法后背景清晰，染色效果良好，利于观察。因此，该改进方法适合在指导学生制备观察染色体装片实验中推广应用。

图1 大蒜根尖不同制片方法的比较