伊曲康唑凝胶的制备及体外透皮性考察*

夏爱晓，周鹏，林忠，孙渊，章艳，蒋正立

[1.台州恩泽医疗中心(集团)浙江省台州医院药剂科临床药学实验室，台州 317000；2.温州医科大学药学院，温州 325035]

婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma，IH)是目前婴幼儿中最常见的良性生长肿瘤，可累及皮肤或内脏器官[1]。IH发病率8.7%～12.7%，早产儿高达30%[2]。可自行消退的IH占较大比例，但对于复杂难治性IH需采用外科手术或药物治疗才能彻底缓解。目前临床治疗IH的方法多样。在药物治疗方法中，普萘洛尔为目前治疗IH的一线药物[3]。但口服普萘洛尔治疗IH存在安全隐患和不良反应，并有减缓心率作用。故临床考虑局部外用药物治疗IH，以提高患者依从性，特别是针对口服给药困难的婴幼儿，目前主要局部外用治疗IH的药物有噻吗洛尔、咪喹莫特和中草药制剂。

伊曲康唑(itraconazole，ITZ)是近年来发现具有抗血管瘤作用的药物[4-5]，口服伊曲康唑对血管瘤改善率达80%～100%，安全性较好。研究表明，伊曲康唑具有抑制血管及血管内皮细胞增生作用，但具体机制尚不清楚，可能与其抑制内皮细胞胆固醇运转、抑制 hedgehog 信号传导通路等有关。

伊曲康唑几乎不溶于水，因此其口服制剂生物利用度低，全身大剂量给药易导致不良反应，局部外用制剂可避免全身性不良反应。笔者在本实验制备伊曲康唑凝胶外用制剂，该制剂可长时间停留于瘤体表面，使药物与皮肤充分接触，发挥良好药效，降低毒性，并具有缓释效果，提高用药依从性，对于开发治疗IH的伊曲康唑外用制剂具有一定应用前景。

1 仪器与试药

1.1仪器 Waters高效液相色谱系统，包含：Waters717自动进样器，1525四元泵，2487紫外检测器，breeze数据获取处理系统(美国Waters公司)；Waters ODS2(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱(美国Waters公司)；TP-2A/3A型智能药物透皮扩散实验仪(上海互佳仪器设备有限公司)；PHS-3CPH计(上海精密科学仪器有限公司)，XY-80A涡旋混合器(上海医大仪器厂)，XMTD-204数显式电热恒温水浴锅(常州诺基仪器有限公司)，SB25-12D超声波清洗机(宁波新芝生物科技有限公司)，AL104电子分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司，感量：0.1 mg]。

1.2试药 伊曲康唑原料药(武汉东康源科技有限公司，含量：99.7%，批号：20161101)，卡波姆940(德国BASF公司，批号：WPOG565B，含量：99%)，三乙醇胺(分析纯，天津市东丽区天大化学试剂厂，批号：20171015)；二甲亚砜(DMSO，分析纯，天津市登丰化学品有限公司，批号：20170901)，聚乙二醇(PEG，北京市海淀会友精细化工，批号：FA7030291，含量：99.9%)，噻酮(南京龙潭精细化工有限公司，批号：20170412，含量：99%)，甘油(郑州祖辉化工产品有限公司，批号：20171217011，含量：99.7%)，甲醇(色谱纯，天津四友精细化妆品有限公司，批号：533776-08616)。

2 方法与结果

2.1伊曲康唑凝胶的制备

2.1.1伊曲康唑凝胶基质与辅料的选择 卡波姆940是一类非常重要的流变调节剂，三乙醇胺中和卡波姆等酸性高分子凝胶后可得到优质凝胶基质，低浓度即可形成高黏度凝胶[6]。以卡波姆940为基质制得的凝胶易涂展，无油腻性，黏附性和均匀性良好，对皮肤和黏膜无刺激性，不污染衣物，药物呈零级或近似零级释放[7]。用卡波姆制备的凝胶浓度一般为0.5%～2.0%[8]。

伊曲康唑为脂溶性药物，在水中几乎不溶，油水分配系数(lgP)为5.66，lgP在1～3的药物具有良好的透皮潜能，需用三乙醇胺作为pH值调节剂。PEG-400为液体，与各种溶剂广泛相容，是很好的溶剂和增溶剂。DMSO有“万能溶剂”之称，是最常用的溶剂，集溶剂和渗透促进剂的优点于一身，是最早和最广泛研究的渗透促进剂之一，具有高渗透性[9]。

噻酮是近年来发现的新型外用制剂促渗剂。其高效促渗作用得到广泛关注，将1%噻酮作为药物促渗剂可提高临床疗效[10]。

2.1.2正交设计优选处方 经查阅文献，结合预实验，确定处方为伊曲康唑含量1%、DMSO含量5%、噻酮含量1%、三乙醇胺适量。根据2015年版《中华人民共和国药典》对凝胶的要求优选处方，确定影响凝胶形成的3个重要因素，分别为卡波姆用量(A，0.5%～2.0%)、甘油用量(B，5%～10%)、PEG-400用量(C，10%～15%)，利用L9(34)正交表进行处方设计优化，见表1。凝胶综合评分为考察指标，满分为10分，见表2(均匀度考察：各取上、中、下部位凝胶0.1 g，配制成10 μg·mL-1样品溶液，比较样品中伊曲康唑含量，最大值与最小值差异越小越均匀。热稳定性考察：取样品1 g，密封，50 ℃恒温条件下放置1周，每日测定一次样品中伊曲康唑含量，最大值与最小值的差异越小热稳定性越好)。

表1 正交实验的因子水平

Tab.1Factorsandlevelsintheorthogonaldesign%

表2 评分标准

正交设计方案和结果见表3，根据极差大小，判断因素主次，RA>RB>RC，因此因素A是影响实验指标的主要因素，最优工艺条件为A2B3C3。图1说明各因素水平之间存在主效应，凝胶评分随因子水平而变化。图2说明三者之间存在相互作用，响应均值的变化取决于另一因子的水平，如A与B的交互作用，行1列2图表示在A的2水平，横坐标B的3水平凝胶评分值最大，这个组合最好。因此，处方的最佳配比为卡波姆(A2)1.0%，甘油(B3)10%，PEG-400(C3)15%。根据最佳配比，按照伊曲康唑 1 g，波姆940 1 g，甘油10 mL，PEG-400 15 mL，DMSO 5 mL，噻酮1 mL，三乙醇胺适量，加纯化水至100 g，制备伊曲康唑凝胶样品3批。制成的凝胶细腻均匀，涂展性良好。

表3 正交实验方案与结果

图1 主效应图

图2 交互作用图

2.1.3稳定性实验 取优选后的同一批样品，分别在室温放置0，2，4，6，8，12，24 h，测得其峰面积分别为467 834，455 697，455 987，462 025，455 127，449 879，450 120，计算得RSD为1.4%(n=7)，表明该伊曲康唑凝胶在24 h内稳定性良好。

取3批已放置一周的伊曲康唑凝胶样品各3 g，置于离心管，以10 000 r·min-1离心20 min，凝胶无分层。

2.2液相测定方法的建立

2.2.1色谱条件与溶液的配制 色谱柱：迪玛ODSC18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(体积比90：10)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：261 nm；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。

供试品溶液：精密称取伊曲康唑凝胶0.1 g，置烧杯中，加入适量甲醇溶解，摇匀，超声10 min溶解完全后，转移至100 mL量瓶，用甲醇定容，摇匀，得10 μg·mL-1的溶液。经孔径0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试品溶液。

对照品溶液：精密称取干燥至恒重的伊曲康唑原料药0.02 g于100 mL量瓶，加适量甲醇溶解并定容，摇匀，稀释后得10 μg·mL-1对照品溶液。

2.2.2标准曲线的绘制 精密称取伊曲康唑25.00 mg于25 mL量瓶，加适量甲醇，超声溶解，再用甲醇定容至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1.00 mL至25 mL量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，得40 mg·L-1伊曲康唑储备液。分别精密量取该储备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL至10 mL量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，得一系列标准液，分别进样，采用HPLC法测定，得标准曲线方程A=41 559C+38 110，R2=0.999。结果显示伊曲康唑在2.00～20.00 μg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.3精密度实验 取供试液20 μL进样，测定。取峰面积积分值计算得日内精密度RSD值为1.11%。连续3 d每天测定6份样品的精密度，方法同上。得日间RSD为1.47%。结果表明精密度良好。

2.2.4回收率实验 按处方量配制3份不含伊曲康唑的空白凝胶基质，分别加入80%，100%，120%处方量的伊曲康唑原料药，按“2.1.1”项方法配制溶液，测定其峰面积，计算得回收率分别为96.5%，100.4%，95.3%。平均回收率为97.4%，RSD为1.99%。

2.3体外透皮实验 取处理好的大鼠皮，剪成适当大小，将鼠皮固定于改进的Franz立式扩散池接受器上口，表皮层在上。其中扩散池的有效渗透面积(A)为3.4 cm2。一般用0.9%氯化钠溶液作为接受液来模拟人体皮肤生理环境，由于伊曲康唑水溶性很差，故在0.9%氯化钠溶液中加入PEG-400增加其溶解度，加入PEG-400体积分数为20%。在接受室中加入接受液15 mL，使接受液与处理好的大鼠皮充分接触。称取凝胶1.0 g均匀涂在皮肤表面，固定装置。将此装置置于温度为(32.0±0.5)℃TP-2A/3A型智能药物透皮扩散实验仪上，磁力搅拌，并开始计时。分别于1，2，4，6，8，10，12，24 h抽取接受液3 mL，并同时加入等体积同温度空白接受液。取出的接受液过孔径0.45 μm滤膜，弃去初滤液，取续滤液20 μL进样，记录峰面积，求药物浓度，计算累积释药量。

样品的制备：取凝胶0.1 g，加适量含20%PEG-400的0.9%氯化钠溶液溶解，超声10 min，再转移至100 mL量瓶，用20%PEG-400的0.9%氯化钠溶液定容即得10 μg·mL-1样品溶液。

Q=(CnVn+ΣCi·Vi)∕A

式中：Q为单位皮肤累积渗透量，Cn为第n次取样时药物浓度，Vn为接受室的总体积，Ci为第n-1次取样时药物浓度，Vi为每次取样的体积，A为有效渗透面积。

伊曲康唑凝胶在大鼠皮肤上的累积渗透量结果， 其24 h皮肤累积渗透量Q为(6.88±0.10) μg·(cm2)-1(n=3)。将样品各时间点渗透量的均数与时间的关系，分别采用零级动力学、一级动力学、Higuchi方程3种数学模型进行拟合，分析其体外渗透性。以单位面积累积渗透量(Q)对时间(t)分别进行一级、零级、Higuchi方程拟合，结果分别为lgQ=0.015t+0.520(R2=0.899)、Q=0.016t+0.317(R2=0.949)、Q=0.102t1/2+0.188(R2=0.977)。结果表明伊曲康唑凝胶的体外释放符合Higuchi方程，随着时间的增加其累积释放量也逐步增加，在前1 h经皮渗透比较明显，之后透过较缓慢，分析原因，可能是前1 h由于浓度差的快速透过皮肤，使皮下迅速达到治疗浓度，之后就缓释透过，维持一定治疗浓度后药物缓慢释放，达到较久的治疗作用。

3 讨论

伊曲康唑为脂溶性药物，在水中几乎不溶，故考虑先将伊曲康唑溶于有机溶剂，再与基质混合均匀。根据2015年版《中华人民共和国药典》，结合实际凝胶评选标准，利用正交设计进行处方优化，最后筛选出处方最佳配比为卡波姆1.0%，PEG-400 15%，甘油用量10%，制得的凝胶均匀细腻，性质稳定。选择合适的体外透皮实验条件是反映药物透皮吸收特征的重要因素[12]。由于伊曲康唑为脂溶性药物，故在0.9%氯化钠溶液中加入PEG-400来增加其溶解度。体外渗透实验结果表明伊曲康唑凝胶体外释放率高，该药物具有缓释作用效果，有部分伊曲康唑贮存在皮肤中，随着时间的累积其贮存量也越来越多，这将有利于IH的治疗。

目前国内外伊曲康唑的上市制剂有伊曲康唑胶囊、伊曲康唑软膏、伊曲康唑口服液，用于治疗真菌性疾病，HIV阳性或免疫系统损伤患者的口腔或食道念珠菌病[13]。伊曲康唑暂无适于治疗IH的制剂，将其制成凝胶有利于药物充分吸收，且安全性良好，可提高患者依从性，用于治疗IH具有价值。后期将对伊曲康唑的药效学及作用机制做进一步的探索。