高效液相色谱法测定丹敏停胶囊中丹参酮ⅡA的含量

慕佳冶，朱昆，王颖，汪旭，赵亚男，李忻※

（1.吉林大学中日联谊医院药学部，长春 130033；2.长春市中心医院制剂室，长春 130024；3.吉林省食品药品检验所，长春 130033）

丹敏停胶囊为院内制剂，处方由丹参、苍术、蝉蜕、荆芥穗、白鲜皮、生地黄、地肤子等中药制备而成，其性状为淡棕色粉末，味淡，微苦，具有活血解毒、养燥湿健脾、祛湿止痒之功效，临床用于治疗急慢性荨麻疹及过敏性皮肤病。丹参为该方剂中的君药，丹参酮ⅡA为丹参的主要有效成分，具有抗炎抑菌、清除自由基、抗氧化及改善肝功能等多种药理作用[1-4]。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对丹敏停胶囊中丹参酮ⅡA的含量进行测定，通过建立丹参酮ⅡA含量测定方法，为控制该产品质量提供试验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；KQ3200E型超声波处理器（昆山超声仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

丹敏停胶囊（批号 2017022、2017023、20170024，长春市中心医院制剂室）；丹参酮ⅡA（批号110766-201721，中国食品药品检定研究院）；甲醇为色谱纯；其他所用试剂均为分析纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[5-6]

色谱柱：WondaSil C1（85m，4.6 mm 250 mm）；流动相：甲醇-水（80∶20）；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃。

2.2 对照品溶液的制备

2.3 供试品溶液的制备

称取适量丹敏停胶囊内容物，研磨成细粉末，用3号筛滤过后，精密称取样品1 g，置入500 mL容量瓶中，加入95%乙醇定容至50mL，密闭，称重，超声波振荡20min后，取出放冷，再对其称重，用95%乙醇溶液弥补溶液耗损，振荡摇匀，滤过溶液，即得供试品溶液。

2.4 阴性样品溶液的制备

按处方中药材比例，取除丹参外的其他药材，按工艺流程制备成不含丹参的阴性成品，按照“2.3”项下方法制成不含丹参酮ⅡA的阴性样品溶液。

2.5 专属性试验

采用“2.1”项下色谱条件，分别取对照品溶液、阴性样品溶液以及样品溶液，分别进样10L，得相关HPLC色谱图。研究结果表明（图1～3），丹参酮ⅡA出峰时间约16.75 min，在此时间段，阴性样品溶液未见明显杂质峰干扰，即丹敏停胶囊组方中的其他成分在该检测条件下对丹参酮ⅡA含量测定不产生影响，专属性较强。

图1 丹参酮ⅡA对照品液相色谱图Fig.1 Liquid chromatography of tanshinoneⅡA reference substance

图2 供试品液相色谱图Fig.2 Liquid chromatogram of the test sample

图3 阴性样品液相色谱图Fig.3 Liquid chromatogram of negative sample

2.6 线性范围的考察

精密称取适量丹参酮ⅡA对照品，用95%乙醇配制成0.0442mg/mL的溶液，分别精密吸取2、6、10、14、18、22L，注入液相色谱仪，测定丹参酮ⅡA的色谱峰面积，将进样量作为横坐标、峰面积积分值作为纵坐标绘图，进行线性回归，得到回归方程：y=7 106x 3 852.3（r=0.999 1），丹参酮ⅡA 进样量在 0.017 1～0.274 2g丹参酮ⅡA色谱峰面积与进样量呈现良好的线性关系。

2.7 精密度试验

2.8 稳定性试验

取同一批供试品（批号2017022），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h，按照“2.1”项下色谱条件测定丹参酮ⅡA色谱峰面积，以考察试验环境下供试品溶液的稳定性。结果，RSD为0.46%（n=6），表明供试品溶液在该环境下24 h内的稳定性达到测定要求。

2.9 重复性试验

取丹敏停胶囊6份（批号2017022），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱峰面积，计算得出RSD为0.47%，表明该方法测量结果的偏差小，重复性达到测定要求。

2.10 加样回收率试验

取已知含量样品（批号2017022）6份，分别加入丹参酮ⅡA对照品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样测定，测定样品中丹参酮ⅡA的含量，计算加样回收率，结果，平均回收率为99.87%，RSD为0.57%，表明该方法对于样品的处理方法准确可行。

2.11 丹敏停胶囊中丹参酮ⅡA的含量测定

按照“2.3”项下方法，取3个批次（批号2017022、2017023、2017024）的丹敏停胶囊样品，制备3批供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件，分别对3个批次的供试品溶液丹参酮ⅡA含量进行测定。结果，3个批次丹敏停胶囊中丹参酮ⅡA的含量分别为 0.295 6、0.294 4、0.298 1 mg/g。

3 结论与讨论

本研究在选择样品提取溶剂过程中，分别以甲醇、95%乙醇为提取溶剂，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件比较2种试验条件下丹参酮ⅡA峰面积与称样量的比值大小，以选取最佳提取溶剂。研究结果表明，甲醇及95%乙醇的提取率相似，故选取毒性较小的95%乙醇作为供试品的提取溶剂。在检测时间方面，本研究将数据采集时间设定为120min，在30min后再无其他色谱峰出现，故以30min作为该研究检测时间，优化检测条件。

综上所述，通过该方法建立的丹敏停胶囊中丹参酮ⅡA的含量测定方法，可以为该制剂的质量标准提供可靠的试验依据，方法简便、稳定、重现性好。