NIPT技术在胎儿染色体非整倍体检测中的应用意义

钟志文

广东省广州市番禺区中心医院妇产科 511400

统计数据显示我国每年缺陷儿出生率高达4%～6%，每年新增出生缺陷约90万例，每年因为出生缺陷儿引起的经济负担超200亿[1]，患儿家属承担着巨大的经济负担及心理负担，因此近年来国家加大了产前筛查的推广力度。血清学筛查法，通过结合孕妇血液生化指标、体质量、孕妇预产期、孕周、年龄等计算出唐氏病患儿的危险系数，在胎儿染色体疾病中应用广泛，然而其准确性较低，易出现误诊、漏诊等，因此探讨准确性更高的诊断价值有着积极的临床意义。羊水穿刺、脐血穿刺、绒毛活检等准确度高，然而作为有创技术，其可以对胎儿、母体造成较大不良影响，引起流产、感染等，孕妇接受度不高[2]。近年来无创胎儿染色体整倍体基因检测逐渐兴起，并在产前筛查中广泛使用。为进一步明确NIPT技术在胎儿染色体非整倍体检测中的应用价值，笔者选取在我院接受产前检查的300名孕妇临床资料进行研究分析，现具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取自2016年6月—2018年6月在我院接受产前检查的300名孕妇(均为单胎活检)作为观察对象，均为单胎妊娠。纳入标准：(1)年龄≥35岁；(2)B超显示胎儿存在异常或者唐氏筛查结果为临界风险、高风险；(3)孕妇知情并签署知情同意书。研究经医院伦理委员会审核通过。年龄20～48岁，平均年龄(31.17±3.09)岁；初产妇156例，经产妇144例；孕次1～4次，平均孕次(2.53±0.44)次；孕周15～34周，平均孕周(21.87±3.02)周。其中年龄≥35岁者56例，唐氏筛查临界风险165例，高风险49例，胎儿异常30例。

1.2 方法 孕妇签署《无创产前基因检测知情同意书》后取外周静脉血5ml，置于EDTA抗凝管内抗凝，轻微摇晃后放置于4℃温度下待测。双重离心，转速1 600r/min，离心10min；离心完成后取上清液，再次离心，转速1 600r/min，时间10min。离心完成后去除残留细胞碎片及白细胞。将无细胞血浆放置于离心管内，置于-80℃下。选取无开盖、渗漏、裂管及外溢样本，血浆量≥2ml、无溶血、污染为合格样本，送至深圳华大临床检验中心进行胎儿游离DN筛查，并提取游离DNA行大规模并行测序，获取每条染色体上分布的真实核算片段数量，经文库构建后利用高通量测序技术、生物学信息，推算出胎儿染色体疾病的风险。对于NIPT检测出高风险孕妇进行健康教育，建议其进行羊水穿刺等进一步检查。在获取孕妇同意后签署知情同意书，并行介入性产前诊断，B超介导下，于羊水或者脐带血中取材20ml，经细胞培养G显带染色体核型分析,确诊胎儿是否出现染色体非整倍体疾病。若羊水穿刺或脐血穿刺染色体核型分析为高风险，则建议孕妇引产，对于产前基因检查低风险者则做随访、复查处理，直至分娩。引产胎儿进行尸检，分娩婴儿在出生后3个月时行再次检查。

2 结果

2.1 NIPT检测结果 300名胎儿经NIPT技术检测，高风险21例，低风险279例，阳性检出率为7%，具体见表1。

表1 NIPT检测结果分布情况[n(%)]

2.2 羊水穿刺或者脐血穿刺结果 NIPT检出高风险的21例胎儿均接受羊水或者脐血穿刺检查，其中确诊高风险20例，1例为低风险，阳性检出率为6.67%。其中13-三体综合征8例(2.67%)，21-三体综合征11例(3.67%)，18-三体综合征1例(0.33%)。

2.3 NIPT检测价值 以羊水穿刺或者脐血穿刺结果为金标准，NIPT检测真阳性20例，假阳性1例，真阴性277例，假阴性2例。NIPT检测灵敏度、特异度及准确度分别为90.90%、99.64%、99%。

2.4 胎儿随访结果 羊水穿刺或者脐血穿刺确诊为高风险患者20例，均行引产处理，尸检结果证实存在染色体疾病；1例NIPT确诊而羊水穿刺检查阴性者，胎儿出生后未见染色体疾病。其余279名胎儿随访至出生，未见染色体疾病发生。

3 讨论

近年来随着国家优生优育政策的推广，孕前检查、产前检查等广泛开展，通过早期产前筛查不仅能够在胎儿出生前发现异常以及时终止妊娠，同时能够帮助临床医生明确胎儿疾病，把握适当时机给予新生儿药物或者手术治疗，为新生儿的健康成长提供保障[1]。临床产前检查主要通过超声筛查，对于检查结果为高危至畸的孕妇进行进一步检查，明确胎儿染色体疾病及单基因疾病等。

我国自20世纪90年代引进孕中期唐氏筛查，能够检出70%～80%胎儿染色体非整倍体，近年来通过与B超联合，假阳性率控制在5%以下，90%左右的非整倍体胎儿可以被检出，然而其仍有较高的假阳性率，需进一步明确诊断[3]。绒毛活检、脐血穿刺及羊水穿刺等虽然准确性高，然而作为有创技术，临床操作导致宫腔感染、流产及死胎风险增加，易引起医疗纠纷；此外染色体核型分析所需时间较长，因此临床接受度不高。上世纪，临床学者发现胎儿游离DNA可在母体外周血浆内存在，孕妇外周血游离DNA中有5%～10%来源于胎儿的凋亡细胞，且在孕早期即可被检测[4]；而随着孕周的增加，胎儿游离DNA含量相应增加。鉴于此，临床尝试对孕妇外周血内游离DNA进行高通量测序，以实现早期筛查胎儿染色体非整倍体疾病。近年来随着高通量测序技术的快速发展，NIPT在胎儿染色体非整倍体疾病的检测中灵敏度、特异度达到99%左右。本文中，300名胎儿接受NIPT检测，其灵敏度、特异度及准确度分别为90.90%、99.64%、99%，灵敏度相对低于国内类似研究[5]，分析认为与本次纳入样本数较少有关。通过对结果2.1进行观察分析，可以发现高龄产妇、唐氏筛查高危以及胎儿异常为胎儿染色体非整倍体疾病的高危人群，且21-三体综合征、13-三体综合征占据较大比例，因此对于高龄孕妇、B超诊断异常者，需进一步完善NIPT诊断，以避免唐氏儿的出生。

虽然无创产前基因检测技术具有快捷、安全、准确等优势，然而该技术无法筛查染色体结构异常，在嵌合体染色体检测、染色体平衡结构异常的检测中，易出现假阴性、假阳性，同时在多胎妊娠诊断中无法使用，无法取代传统的染色体核型分析技术[6]，因此在临床使用时需严格把握适应证:(1)产前高危或者临界风险孕妇；(2)发热、感染未愈、先兆流产等存在接入性产前诊断禁忌证者；(3)确诊时孕周较大、超出产前筛查范围孕妇；(4)高龄孕妇，以更好的服务于孕妇及胎儿。

总之，NIPT在胎儿染色体非整倍体基因检测中具有敏感度、特异度及准确度高等特点，同时具有无创、便捷等优势,可作为产前缺陷儿筛查的有效手段推广。