气相色谱内标法测定d-柠檬烯含量

邱小梅，熊宝林，陈 石

（云南省化工研究院，云南 昆明 650228）

作为绿色环保农药的有效组分和实用助剂——d-柠檬烯（d-Limonene），对鳞翅目、鞘翅目、半翅目、膜翅目等农业害虫均具杀灭作用，是农业用橙油桔油等产品的重要有效成分之一[1-2]。含柠檬烯的农药产品，在高品质农产品的种植生产中，使用程度越来越高，可大量减少有机磷及化学农药的使用。在2018年召开的第九届全国农药登记评审委员会第二次委员会议上，d-柠檬烯原药及可溶液剂被评审通过为新农药产品。虽然，柠檬烯在药品和保健品领域，有较为成熟的检测方法，检测多以GC-MS、GC和HPLC等方法进行[3-4]，但在农药应用领域，柠檬烯水剂的气相色谱检测方法尚未见文献报道。本文建立和讨论的气相色谱内标法，可做为产品质量的控制方法，在今后，亦可为相应检测标准的制定，提供可靠的经验和数据支持。

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

仪器:Agilent6890气相色谱仪，带FID检测器。

试剂:甲醇分析纯，国药集团化学试剂有限公司；乙酸丁酯，不含有干扰分析的杂质；d-柠檬烯标准品（D-limonene） 质量分数为90.0%（巴西 CUTRALE）。

1.2 气相色谱检测条件

毛细管色谱柱:Agilent HP-innowax（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温 50℃；进样口温度220℃；检测器温度250℃；进样量1.0μL；载气为高纯氮，流速1.5mL/min，分流比30∶1；空气300mL/min；氢气:30mL/min。

1.3 样品检测

1.3.1 标准溶液的配制

内标溶液的配制:乙酸丁酯1.5g，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀。

标样溶液的配制:称取d-柠檬烯标样0.0841g，置于25mL容量瓶中，用移液管准确加入5mL内标溶液，用甲醇稀释到刻度，摇匀。

试样溶液的配制:称取试样0.8～1.2g，置于25mL容量瓶中，用移液管准确加入5mL内标溶液，用甲醇稀释到刻度，摇匀。

1.3.2 样品检测

在上述气相色谱操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻两针中待测组分与内标物的峰面积比值的相对响应值变化小于1.5%时进样检测。色谱图如图1所示。由图1看出，待检组分与内标物分离度良好。

1.4 结果计算

试样中d-柠檬烯质量分数w按下式计算:

图1 d-柠檬烯与内标物的气相色谱图Figure 1 Gas Chromatogram of the D-limonene and the internal standard

式中:r1为标样溶液中，d-柠檬烯与内标物峰面积比的平均值；r2为试样溶液中，d-柠檬烯与内标物峰面积比的平均值；m1为d-柠檬烯标样的质量，g；m2为试样的质量，g；w0为标样中d-柠檬烯的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 线性相关性验证

称取d-柠檬烯标样0.75g，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀备用。用移液管分别移取1、2、5、10、20mL标样溶液，置于25mL容量瓶中，准确加入5mL内标溶液，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

按上述气相色谱操作条件进行多组分析测定，以d-柠檬烯与内标物的质量比为横坐标，d-柠檬烯与内标物的峰面积比为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程为y=0.0161x+0.0005；其线性相关系数为0.9999。如图2所示。

图2 标准曲线Figure 2 Standard curve

2.2 方法精密度验证

按前述内标检测方法,对同一个柠檬烯样品进行平行测定，精密度测定结果见表1。

表1 精密度试验结果Tab1 Precision test results

由表1可见，d-柠檬烯含量的相对标准偏差为0.35%。

2.3 方法准确度验证

以加标回收率作为准确度验证方法，在已知d-柠檬烯含量的样品中分别加入不同量的d-柠檬烯标准样品，按前述述色谱条件进行测定。结果见表2。由表2可见，d-柠檬烯的平均回收率为100.3%。

表2 准确度试验结果Tab2 Accuracy test results

3 结论

气相色谱内标法测定d-柠檬烯含量，以乙酸丁酯为内标物，具有前处理过程简便，样品分离效果好等优势。相比于外标法，此方法不受样品进样量的影响，并且由于通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算，也一定程度上消除了手动进样、分流歧视、操作条件波动等的变化所引起的误差，检测方法更为简便可靠。