高效液相色谱法测定40%硫磺·三环唑悬浮剂中硫磺的含量

洪陈艳，王学林，李学院，安燕萍

（昆明农药有限公司，云南 昆明 650401）

水稻稻瘟病可采用的药剂较多，有稻瘟灵、稻瘟净、三环唑等，单一使用某一种农药容易诱导稻瘟病菌产生抗药性以致药剂用量越来越大，药效却越来越差[1]。40%硫磺·三环唑悬浮剂是一种具有保护和内吸治疗作用的复配杀菌剂，该药具有流动性较好、悬浮率较高、黏着力较强、较耐雨水冲刷、易被作物吸收等特点，是防治水稻稻瘟病的理想药剂。

40%硫磺·三环唑悬浮剂中的有效成份硫磺（英文通用名:sulfur）为无机物，其测定方法通常采用化学法。化学法操作复杂、对人员的操作熟练程度要求高、测定结果重现性不好、测定准确度差。本文通过实验研究建立了一种高效液相色谱分析方法，更能准确、方便、快捷地测定40%硫磺·三环唑悬浮剂中的硫磺的质量分数。

1 实验方法

1.1 溶液和试剂

硫磺标样（质量分数98.0%）；甲醇（色谱纯、流动相用）；甲醇（分析纯）；N,N二甲基甲酰胺（分析纯）；水（新蒸二次蒸馏水）。

1.2 操作仪器

液相色谱仪:液相色谱仪（具有可调节波长紫外检测器和定量进样阀）；色谱数据工作站:N2000色谱工作站；色谱柱:200mm×4.6mm（i.d）不锈钢柱，内装DOS（C18）5μm填充物；微量进样注射器:50μL；定量进样器5 μL；超声波清洗器。

1.3 高效液相色谱操作条件

柱温:相当于室温；流动相:甲醇,经滤膜过滤并用超声波脱气。流速:1.25mL/min；波长:265nm；进样体积:5μL；保留时间:4.690min。

1.4 实验步骤

1.4.1 配制标样溶液

称取0.05g(精确至0.0001g)硫磺标样置于50 mL容量瓶内，加5 mL蒸馏水摇匀使之溶解，再加入5 mL N,N二甲基甲酰胺，最后再用甲醇溶解到刻度，超声5 min，直到标样完全溶解，冷却摇匀后用移液管移取此溶液10 mL于另一个50 mL容量瓶内，加甲醇溶解到刻度，摇匀后过滤用。

1.4.2 配制试样溶液

称取0.1g(精确至0.0001g)40%硫磺·三环唑试样置于50 mL容量瓶内，加5 mL蒸馏水摇匀使之溶解，再加入5 mL N,N二甲基甲酰胺，最后再用甲醇溶解到刻度，超声5min，直到试样完全溶解，冷却摇匀后用移液管移取此溶液10 mL于另一个50 mL容量瓶内，加甲醇溶到刻度，摇匀后过滤用。

1.4.3 测定方法

在以上色谱操作条件下、仪器基本稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针标样溶液中的硫磺峰面积相对变化小于1.5%后。按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样进行测定[2]。40%硫磺·三环唑悬浮剂的高效液相色谱图（图1）。保留时间为2.157min的是三环唑色谱峰，保留时间为4.690min的是硫磺色谱峰。

图1 40%硫磺·三环唑悬浮剂的液相色谱图

1.4.4 计算方法

将测得的两针试样溶液,以及试样前后两针标样溶液中硫磺峰面积，分别进行平均。试样中硫磺的质量分数w1(%)按下列公式计算:

式中:R2为试样溶液中硫磺与内标物峰面积的平均比值；m1为标样硫磺的质量，g；w为标品硫磺的质量分数，%；R1为标样溶液中硫磺与内标物峰面积的平均比值；m2为试样的质量，g；w1为样品中硫磺的质量分数，%。

1.4.5 允许差

两次平行测定结果之相对差不大于1.0%，取其算术平均值作为测定结果。

2 结果与讨论

2.1 波长的选择

用紫外可变波长检测器，在不同波长下对硫磺进行扫描，当扫描波长为265nm时，硫磺的响应值最大，且能与杂质峰彻底分离，因此选择265nm作为检测波长。

2.2 色谱操作条件的选择

为了保证40%硫磺·三环唑悬浮剂剂样品中硫磺的质量分数测定的准确性，流动相的选择十分重要。当使用甲醇为流动相时，样品色谱图基线平稳，峰型好，准确度高，分离效果较好，出峰时间适宜，因此确定选用甲醇作为流动相。

2.3 试样溶剂的选择

根据硫磺的性质，当选用N,N二甲基甲酰胺和甲醇为试样溶剂时，能较好地溶解试样，且峰型分离较好，满足试剂的选择条件。

2.4 实验方法中的线性相关性测定

各称取硫磺标样 0.03、0.05、0.07、0.09、0.11g（精确至0.0002g），然后配制成几种质量浓度不同的标准溶液。按1.3、1.4中的方法进行分析，得出了一系列色谱峰面积（表1）。以硫磺的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性相关曲线，得出硫磺的线性方程y=14184x+10655，线性相关系数为0.9990，呈现出良好的线性关系。

表1 不同质量浓度硫磺标样与对应的峰面积

2.5 方法的精密度测定

各称取5个平行试样，按照以上色谱条件和测定步骤测定，硫磺的标准偏差为0.43%；变异系数为0.02%，具有良好的精密度（表2）。

表2 分析方法的精密度测定结果

2.6 方法的准确度测定

称取已知含量的试样5份（0.1026、0.1064、0.1069、0.1043、0.1031g） 精确至0.0002g，各加入不同质量的硫磺标样（含量99.5%）。在以上操作步骤及色谱条件下测定，硫磺的平均回收率为99.83%，故此方法的准确度比较高（表3）。

3 结语

本文建立的高效液相色谱法测定40%硫磺·三环唑悬浮剂中有效成分硫磺含量，具有良好的准确性和可重复性，方法高效、快捷、准确，能达到定量分析的要求，可用于该复配制剂中硫磺含量的检测和质量控制。

表3 方法的准确度测定结果