5种不同种质来源铁皮石斛茎含水量、总黄酮及多糖含量分析

吴建国，林柳悦，吴岩斌，吴锦忠

（福建中医药大学药学院，福建 福州 350122）

铁皮石斛（Dendrobium officinaleKimura et Migo）为兰科石斛属植物，俗称铁皮枫斗，是常用的名贵中药，《神农本草经》中列为上品，功能益胃生津，滋阴清热，用于热病津伤，口干烦躁，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软［1］265。 铁皮石斛含有黄酮、多糖、甘露糖、和生物碱等活性成分，具有抗衰老、抗氧化和免疫调节等作用［2-4］。本实验对5种不同种质来源铁皮石斛茎含水量、总黄酮和多糖含量进行测定，为其质量评价提供参考依据。

1 实验材料

1.1 材料与试剂 5种不同种质来源铁皮石斛来自福建连城（LC）、浙江（ZJ）、厦门集美（JM）、厦门（XM）和云南（YN），福清市佳家农业综合发展有限公司提供，经黄泽豪副教授鉴定为兰科石斛属铁皮石斛（Dendrobium officinaleKimura et Migo）。芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080-200707）；葡萄糖标准品（上海国药集团有限公司，分析纯）；无水乙醇（天津市致远化学试剂厂，分析纯）；氢氧化钠、苯酚（天津福晨化学试剂厂）；硝酸铝（上海新宝精细化工厂）；亚硝酸钠、浓硫酸（上海三鹰化学试剂有限公司，分析纯）。

1.2 仪器 AR223CN千分一电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；UV-1800紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；KQ-500E超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司）；石英比色皿（上海精密科学仪器有限公司）；SFG-0.2600电热恒温鼓风干燥箱（黄石市恒丰医疗器械有限公司）；RE-2000A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHB-Ш循环水式多用真空泵、DLSB-5／20低温冷却液循环泵、R501C恒温水浴锅（郑州长城科技工贸有限公司）。

2 方法与结果

2.1 新鲜铁皮石斛茎含水量测定 采用2010年版《中国药典》一部，附录 IX H 水分测定法［1］147，结果见表1。

表1 5种不同种质来源铁皮石斛茎含水量测定结果

2.2 铁皮石斛茎总黄酮含量测定

2.2.1 供试品溶液的制备 将铁皮石斛茎用蒸馏水洗净、干燥、粉碎，准确称取1.0 g铁皮石斛干燥粉末，加入料液比1∶30，80%的乙醇回流提取3次，2 h／次，合并滤液并浓缩，回收溶剂后用80%乙醇定容于50 mL量瓶中。

2.2.2 芦丁标准曲线制定 精密称取芦丁对照品10 mg，置于50 mL瓶中，无水乙醇定容至刻度，得浓度为0.2 mg／mL的对照品；依次精密量取芦丁对照品溶液 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 和 3.0 mL 于 10 mL的量瓶中，分别加入蒸馏水至3 mL；依次分别加入5%亚硝酸钠溶液0.5 mL混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液0.5 mL摇匀，放置6 min，再加入4%氢氧化纳溶液5 mL，加蒸馏水稀释至刻度摇匀，放置15 min；以相应的试剂为空白对照，在510 nm处测得吸光度值［5］。结果表明芦丁在 0.01～0.06 mg／mL线性关系良好，标准曲线的回归方程为：

2.2.3 总黄酮含量测定方法学验证 精确吸取芦丁对照品溶液2 mL于10 mL的量瓶中，共6份，按“2.2.2”方法连续测量6次，计算其吸光度RSD为0.43%，表明仪器精密度良好。稳定性试验精确量取3号供试品溶液2 mL于10 mL的量瓶中，共6份，按“2.2.2”方法每隔10 min测量，结果显示平均吸光度值为0.210，RSD值为1.18%，表明待测品溶液在50 min内稳定性良好。取3号供试品6份平行制备供试品溶液，按“2.2.2”项连续测量，结果显示平均含量为0.442%，RSD值为1.50%，表明重复性良好。精密称取6份已知总黄酮含量的3号铁皮石斛粉末1.0000 g，加入一定量的芦丁对照品，按照2.2.1所述制得样品液，按照2.2.2所述显色并测定吸光度，得平均回收率为99.46%，RSD值为1.02%。

2.2.4 供试品中总黄酮含量测定 精密吸取2 mL供试品溶液，按“2.2.2”方法测定吸光度，每个供试品按照该法平行测定3份，取其平均值，计算铁皮石斛中总黄酮的含量。见表2。

表2 5种不同种质来源铁皮石斛茎中总黄酮含量

2.3 铁皮石斛茎多糖含量测定

2.3.1 供试品溶液的制备 精密称定铁皮石斛粉末（过 3号筛）约 0.3 g，平行 3份，加水 200 mL，加热回流2 h，趁热过滤，定容；精密量取续滤液2 mL，置15 mL离心管中，精密加入无水乙醇至10 mL，摇匀，冷藏1 h后离心，弃去上清液，沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8 mL，离心，弃去上清液，干燥得石斛多糖；加热水溶解，转移至25 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，备用。

2.3.2 葡萄糖标准曲线制定 精密称取葡萄糖标准品5 mg，置于50 mL的量瓶中，蒸馏水溶解定容至刻度，得浓度为0.1 mg／mL的对照品；分别精密量取葡萄糖标准品溶 液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL置于10 mL的具塞试管中，并分别加蒸馏水至2 mL，各加1.0 mL 5%苯酚溶液，振摇混匀，迅速加入浓硫酸5.0 mL，混合均匀，于沸水浴中加热15 min，取出，迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白对照。在490 nm处测得吸光度值［6］，结果表明葡萄糖在2.655～15.930 mg／L线性关系良好，标准曲线的回归方程为：

2.3.3 多糖含量测定方法学验证 精确吸取葡萄糖对照品溶液2 mL于10 mL的量瓶中，共6份，按“2.3.2”方法连续测量6次，计算其吸光度RSD为0.43%，表明仪器精密度良好。稳定性试验精确量取3号供试品溶液2 mL于10 mL的具塞试管中，共6份，按“2.3.2”方法每隔10 min测量，结果显示平均吸光度值为0.319，RSD值为1.20%，表明待测品溶液在1 h内稳定。取3号供试品6份平行制备供试品溶液，按“2.3.2”项连续测量，结果显示平均含量为29.1%，RSD值为0.65%，表明重复性良好。准确称取6份已知总多糖含量的3号石斛多糖，准确加入一定量的葡萄糖对照品，按照2.3.1所述制得样品液，按照2.3.2所述显色并测定吸光度，得平均回收率为98.39%，RSD值为1.58%。

2.3.4 供试品中多糖含量测定 精密吸取2 mL供试品溶液，按“2.3.2”项测量，每个供试品按照该法平行测定3份，取其平均值。测得的吸光度代入回归方程中，计算铁皮石斛中多糖的含量。见表3。

表3 5种不同种质来源铁皮石斛茎中多糖含量

3 讨 论

本实验结果发现：5种不同来源铁皮石斛茎不论是含水量，总黄酮和多糖含量均存在一定的差异，含水量以云南种质来源最高（云南＞厦门＞连城＞厦门集美＞浙江＞70%）；总黄酮含量也以云南最高 （云南＞浙江＞厦门集美＞厦门＞连城＞0.4%）；而多糖含量则以浙江最高（浙江＞厦门＞福建连城＞云南＞厦门集美）。这些差异可能来自于不同的种质来源。本实验为石斛的质量评价及控制提供了一定的参考依据，不同种质来源石斛的质量差异及其影响因素有待于进一步的研究。