清眩降压汤和清达颗粒对大鼠离体胸主动脉血管环张力作用的药效比较研究

黄 月 ，褚剑锋 ，2，3，沈阿灵 ，3，李琼瑜 ，林 珊 ，3，彭 军 ，2，3

（1.福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 350122；2.福建省中西医结合老年性疾病重点实验室，福建 福州 350122；3.福建中医药大学陈可冀学术思想传承工作室，福建 福州 350122）

高血压病是严重危害人类健康的常见心血管病之一，是全球疾病负担的主要因素［1］。根据《中国居民营养与慢性病状况报告（2015年）》［2］调查显示：2012年年龄≥18岁人群高血压的知晓率、治疗率和控制率分别为46.5%、41.1%和13.8%。人群对高血压“三率”的认识也是很低的，大多数高血压患者血压控制还远未达标，防治任务相当艰巨。目前，药物治疗是高血压病最主要的治疗方法，其中中药治疗在高血压的早期防治中逐渐成为一个热点［3-5］。

国医大师陈可冀院士认为高血压发病存在由阳盛到阴阳两虚的一个演化过程［6］，临床上高血压初期多以肝阳上亢或肝火上炎为主要证候特征，故陈可冀院士在天麻钩藤饮的基础上加减化裁，创立了清眩降压汤用以治疗上述证型的高血压患者。临床研究表明：清眩降压汤可较好地控制血压，有效改善高血压患者的临床症状和生活质量［7-11］。基础研究提示清眩降压汤可有效控制SHR大鼠血压，改善高血压引起的脑损害，并有效抑制靶器官损害如肾脏纤维化、心肌重构和血管重构等［9-10］。清达颗粒由清眩降压汤精简化裁而来，由天麻、钩藤、黄芩和莲子心4味药组成，前期研究已证实清达颗粒具有显著抑制SHR大鼠血压的作用［12］。为了进一步比较清达颗粒与清眩降压汤对血管舒张作用，本文通过检测血管环张力改变，比较清眩降压汤和清达颗粒对高钾和去甲肾上腺素预收缩后大鼠离体胸主动脉血管环的舒张作用，为进一步的实验研究提供前期基础。

1 材 料

1.1 动物及分组 本实验采用8～10周龄的SPF级wistar雄性大鼠，平均体质量为（200±20）g。每次实验取1只健康雄性wistar大鼠的胸主动脉制备成血管环，分为对照组、清眩降压汤组和清达颗粒组，每组3个血管环。实验动物由福建中医药大学医学实验动物中心购买，实验动物使用许可证号：SYXK（闽）2014-0001。

1.2 试剂 清眩降压汤（生产批号：CKJ2016004）和清达颗粒（生产批号：CKJ2017001）购于江阴天江药业有限公司，分别用生理盐水配制成50 mg／mL的溶液，现配使用；重酒石酸去甲肾上腺素一水合物（NE，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；氯化钾（KCl，美国 Sigma 公司）；乙酰胆碱（Ach，美国Sigma公司）；Krebs缓冲液由超纯水溶解配制，其成分为：118 mM NaCl（国药集团化学试剂有限公司）；4.7 mM KCl（美国 Sigma 公司）；1.2 mM MgCl2（美国Sigma 公司）；10 mM HEPES（美国 Sigma 公司）；11.1 mM葡萄糖（北京索莱宝科技有限公司）和2 mM CaCl2（天津市博迪化工有限公司）。Krebs缓冲液配制完成后用3 mol／L NaOH（国药集团化学试剂有限公司）调pH值至 7.4，后续实验所需试剂均由正常Krebs缓冲液稀释至所需浓度。实验过程中所述浓度均为浴槽内试剂的终浓度。

1.3 仪器 JH-2（5 g）张力换能器、BL-420S生物机能实验系统、HV1403离体组织器官恒温灌流系统和HW-500超级恒温水浴均购自成都泰盟科技有限公司。

2 方 法

2.1 大鼠胸主动脉血管环制备及内皮完整性检测

将大鼠用2%戊巴比妥钠麻醉后，腹主动脉采血处死，迅速打开胸腔并分离胸主动脉，置于4℃Krebs缓冲液中，用大头针固定血管环两端，剥离干净血管周围的脂肪及结缔组织，把动脉剪成长度约3～4 mm的血管环。血管环一端用不锈钢三角钩垂直悬挂于浴槽中，另一端连接张力转换器，使用BL-420S生物机能实验系统记录血管环的张力。每个浴槽内悬挂一条血管环并向浴漕内持续通入95%O2和5%CO2，缓慢调节血管环张力至 2 g，37℃下平衡1 h，期间每20 min换液 1次。在浴槽中加入60 mM KCl刺激，张力收缩幅度小于1 g的血管环被认为活性差，不用于实验。用1μM NE预收缩血管环，待收缩达到平台期后加入10μM乙酰胆碱，若舒张幅度大于70%认为内皮完整。

舒张率计算公式：舒张率＝［（NE诱发最大收缩值－加入药物后的血管张力值）／NE诱发最大收缩值］×100%

2.2 静息状态下3组血管环张力的观察 待血管环张力稳定后，清眩降压汤组和清达颗粒组分别以累积加药法依次加入配制好的清眩降压汤和清达颗粒药液，使浴槽内药物终浓度分别达到0.25、0.5、0.75、1mg／mL，每个浓度干预时间 30 min；对照组加入等体积生理盐水。观察3组血管环张力的变化。

2.3 KCl预收缩后3组血管环张力的观察 待血管环张力稳定后，用60 mM KCl预收缩血管环，使其收缩达到平台期后，清眩降压汤组和清达颗粒组分别以累积加药法依次加入配制好的清眩降压汤和清达颗粒药液，使浴槽内药物终浓度分别达到0.25、0.5、0.75、1mg／mL，每个浓度干预时间 30 min；对照组加入等体积生理盐水。观察3组血管环张力的变化。

2.4 NE预收缩后3组血管环张力的观察 待血管环张力稳定后，用1μM NE预收缩血管环，使其收缩达到平台期后，清眩降压汤组和清达颗粒组分别以累积加药法依次加入配制好的清眩降压汤或清达颗粒药液，使浴槽内药物终浓度分别达到0.25、0.5、0.75、1 mg／mL，每个浓度干预时间 30 min；对照组加入等体积生理盐水。观察3组血管环张力的变化。

每次记录每组3个血管环的张力值，最后结果取其平均值。

2.5 统计学处理 数据采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。计量资料属于正态分布的以（±s）表示，采用单因素方差分析，非正态分布的采用秩和检验。

3 结 果

3.1 3组静息状态下血管环张力的变化 见图1。

图1 3组对静息状态下胸主动脉血管环张力的变化

3.2 KCl预收缩血管后3组血管环张力的变化见图2。图2显示清眩降压汤对血管环的最大舒张率达18.7%，清达颗粒对血管环的最大舒张率达34.4%，清达颗粒在高钾预收缩血管后对血管环的舒张作用优于清眩降压汤。

图2 3组对KCl预收缩血管环张力的作用

3.3 NE预收缩血管后3组血管环张力的变化见图3。图3显示清眩降压汤对血管环的最大舒张率达48.1%，清达颗粒对血管环的最大舒张率达88.3%，清达颗粒在NE预收缩血管后对血管环的舒张作用优于清眩降压汤。

图3 3组对NE预收缩血管环张力的作用

4 讨 论

清眩降压汤是陈可冀院士治疗高血压的临床经验方［12］，清达颗粒是在清眩降压汤基础上优化化裁而来。清达颗粒中天麻熄风定惊为君；钩藤清热平肝熄风为臣；黄芩清肝泻火为佐；加以莲子心清心除烦为使，全方共奏清肝热、平肝阳、泻心火之功效。为探讨清达颗粒和清眩降压汤在舒张血管上的药效，本实验采用大鼠离体胸主动脉血管环，给予不同的血管收缩剂诱导血管收缩后，测量血管环张力，观察清眩降压汤和清达颗粒对离体大鼠胸主动脉血管环张力的影响。

实验结果表明：在静息状态下，清眩降压汤和清达颗粒对血管环的张力并无明显改变，可见，清达颗粒和清眩降压汤对静息状态下的血管环张力均无影响；在NE刺激血管收缩后，清达颗粒和清眩降压汤均可促进血管舒张，可见，舒张因NE水平升高导致的收缩血管可能是清达颗粒和清眩降压汤发挥降压作用的机制之一；在KCl刺激血管收缩后，清达颗粒和清眩降压汤亦均可促进血管舒张，可见，舒张因KCl水平升高导致的收缩血管亦可能是清达颗粒和清眩降压汤发挥降压作用的另一重要机制，且清达颗粒在舒张血管上的效果优于清眩降压汤。