磷酸哌喹分散片的处方前研究

唐嘉曦，许小红

成都医学院 药学院(成都 610500)

磷酸哌喹(piperaquine phosphate，PQP)为 4-氨基喹啉类抗疟药，通常与双氢青蒿素合用，具有协同增效作用，可延缓疟原虫耐药性的产生[1]。目前临床常用剂型为复方片剂(规格为320 mg)，由于PQP临床剂量较大，不利于小孩或吞咽困难者服用，本研究拟研究开发为分散片，以提高患者服药的顺应性。PQP原料药基本理化性质研究文献报道较少[2-4]，本研究测定了PQP的平衡溶解度、油水分配系数、吸湿性、稳定性等参数，旨在为处方设计及研究提供依据[5]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦1260高效液相色谱仪；分析天平(梅特勒-托利多)；优普系列超纯水器(UPH-II-10T，四川优普超纯科技有限公司)；超声波清洗机[致微(厦门)仪器有限公司，功率：900 W，频率：(40±2) kHz]；药品稳定性试验箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；YG120药物光照试验箱(上海实验仪器厂有限公司)；数显气浴恒温振荡器(常州普天仪器制造有限公司)。

1.2 试药

PQP原料药(江苏斯威森生物医药工程研究中心有限公司，批号：150806)；PQP对照品(江苏斯威森生物医药工程研究中心有限公司，批号：161203)；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 PQP HPLC测定方法的建立

2.1.1 色谱条件[6]Nu-Analutical(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1 %三氯乙酸(磷酸调pH=2，25:75)；流速：1 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长为349 nm；进样量：10 μL(图1)。

图1系统适用性色谱图
注：A： PQP对照品溶液色谱图；B：PQP原料药色谱图

2.1.2 线性关系考察 精密称取PQP对照品，加流动相配制1 mg/mL的PQP对照品储备液。精密量取储备液适量，加流动相稀释得2、5、15、20、25、30、40、60、100 μg /mL的一系列对照品溶液。按照“2.1.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。以质量浓度(X)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=18.394X-4.6748(R2=0.999 9)。结果表明，PQP的质量浓度在0.002～0.1 mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.1.3 检测限与定量限 取线性研究中所用的PQP对照品的低浓度(2 μg /mL)，进行逐级稀释，分别按照“2.1.1”项下色谱条件进样，按信噪比法，在PQPS/N ≥10，确定PQP的定量限，在PQPS/N≥3,确定PQP的检测限，结果检测限为检测限为0.4 ng，定量限为1 ng。

2.1.4 进样精密度 取25 μg /mL PQP对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪中，照“2.1.1”项下色谱条件，连续进样6次，记录色谱图，考察主峰峰面积变化，结果峰面积RSD为0.36%，进样精密度良好。

2.1.5 重复性试验 取同一批PQP原料药共6 份，用加流动相适量超声溶解，冷却后定容至刻度，制成25 μg /mL的PQP供试品溶液，按照“2.1.1”项下色谱条件进样测定，结果PQP含量RSD为0.56 %，表明该方法重复性良好。

2.1.6 稳定性试验 取25 μg/mL的供试品溶液，照色谱条件，分别于0、2 、4 、6 、8 、12 、24 h精密量取10 μL注入液相色谱仪，照“2.1.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，结果峰面积RSD为0.30 %，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.7 破坏性试验 精密称取PQP25 mg置于50 mL量瓶中，加1 mol/L HCl溶液2 mL，在50 ℃水浴中加热2.5 h，放冷，用1 mol/L NaOH调节pH至中性，用流动相稀释并定容至刻度，作为酸破坏溶液；精密称取PQP25 mg置于50 mL量瓶中，加1 mol/L NaOH溶液2 mL，在50 ℃水浴中加热2.5 h，放冷，用1 mol/L HCl调节pH至中性，用流动相稀释并定容至刻度，作为碱破坏溶液；精密称取PQP 25 mg置于50 mL量瓶中，加30 %过氧化氢溶液2 mL，在50 ℃水浴中加热2.5 h，放冷，用流动相稀释并定容至刻度，作为氧化破坏溶液；将上诉3个破坏性溶液照“2.1.1”项下色谱条件进样，结果表明该方法能有效检出各破坏试验产生的杂质，且各杂质峰均能与主峰达到基线分离，专属性较好(图2)。

图2 破坏性试验色谱图注：A：酸破坏色谱图； B：碱破坏色谱图；C：氧化破坏色谱图

2.2 PQP在不同pH缓冲溶液中的平衡溶解度测定[7]

取过量PQP原料于带塞塑料管中，分别加入10 mL配制的pH分别为1.0、1.2、1.5、2.0、3.8、4.5、5.8、6.8、7.4、8.0的系列缓冲液中，摇床振荡8 h至药物不再溶解。将饱和溶液于12 000 rpm/min离心5 min，离心半径8.5 cm,取上清液，样品浓度超过线性范围时用流动相稀释一定倍数，照色谱条件进样，记录峰面积，并将结果代入标准曲线方程计算浓度。在37 ℃下， PQP的平衡溶解度随着缓冲液pH的增大而减小(图3)。

图3 PQP不同pH溶液中的溶解度

2.3 PQP油水分配系数的测定[8]

精密称取PQP原料药4 mg，用纯水饱和的正辛醇溶解并定容至50 mL，得88 μg/mL PQP的正辛醇溶液母液；取母液适量，用正辛醇定容至25 mL，得10、33、55 μg/mL的正辛醇PQP溶液。准确量取已配制的pH分别为1.0、1.2、1.5、2.0、3.8、4.5、5.8、6.8、7.4和8.0的系列缓冲液各2 mL至5 mL至离心管中，再配制高、中、低浓度PQP水饱和正辛醇溶液2 mL，强力涡旋5 min，然后12 000 r/min离心5 min，离心半径8.5 cm,分别取正辛醇层、水层 ，照“2.1.1”项下色谱条件进样，计算油相浓度(Co)和水相浓度(Cw)。结果采用公式P=CO/CW计算PQP表观油水分配系数P，并计算其对数值log P， 高、中、低浓度下PQP的log P值在pH(1.0～4.5)中的油水分配系数<0，亲水性较好；在pH(5.8～8.0)中的油水分配系数>0，亲油性较好(表1)。

表1 PQP在不同pH条件下Log P

2.4 PQP吸湿性测定[9]

将底部盛有氯化铵过饱和溶液的玻璃干燥器放入 25 ℃的恒温培养箱内恒温 24 h ，此时干燥器内的相对湿度为(80±2)%， 将恒重后的PQP样品粉末放入已恒重的称量瓶中，厚度约 2 mm， 精密称定后置于上述玻璃干燥器内，称量瓶盖打开于 25 ℃保存，分别于0、2、4、6、12、24、48、72 h 精密称重，计算吸湿百分率，并以时间为横坐标，吸湿百分率为纵坐标进行作图，结果表明PQP样品在24 h 后吸湿百分率约 0.69 % ，48 h后吸湿达到饱和，说明PQP略有引湿性(表2)。

表2 PQP原料药吸湿试验结果

2.5 PQP影响因素实验

2.5.1 高温试验 根据《中华人民共和国药典》2015 版[6]，9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则要求，供试品开口置适宜洁净容器中(培养皿中摊成≤5 mm 厚薄层)，60 ℃温度下放置 10 d，于第0、5、 10 天取样，考察其外观、含量及有关物质的变化。

2.5.2 高湿试验 根据《中华人民共和国药典》2015 版第 4 部，9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则要求，供试品开口置适宜洁净容器中(培养皿摊成≤5 mm 厚薄层)，在 25 ℃于相对湿度(90±5)%条件下放置10 d，于第0、5、10 天取样，考察其外观、含量及有关物质的变化。

2.5.3 强光照射试验 根据《中华人民共和国药典》2015 版[6]，9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则要求，供试品开口置适宜洁净容器中(培养皿中摊成≤5 mm 厚薄层)，于照度(4 500±500)Lx 条件下放置10 d，于第0、5、10 天取样，考察其外观、含量及有关物质的变化。影响因素试验结果显示，相对于0 d的样品，高温高湿光照条件下单个杂质和总杂都没有明显增长(表3)。

表3 PQP影响因素试验结果

3 讨论

药物的溶解度直接影响药物的吸收与药物在体内的生物利用度，是制备药物制剂首先应掌握的信息[10]。本研究旨在开发PQP分散片，在pH 1.0时PQP溶解度最大，说明PQP在胃中溶解度最大，制成分散片后能在胃中迅速溶出。油水分配系数可预测药物的亲水亲脂性[11]，PQP随着pH值的增大 LogP也增大，说明药物在胃中快速溶出之后随着消化道pH值的增大，能够较容易地透过细胞膜而吸收入血。

影响因素试验结果表明，PQP在光照条件下相对不稳定,湿度和温度对其影响不大，因此在今后的处方设计及制备工艺中，应适当避免光照，后期考虑进一步研究光照对PQP降解速率的影响，为实验操作过程避光程度提供更充分的实验数据。