流式细胞术检测多发性骨髓瘤中骨髓细胞表面免疫表型的价值

苏密龙

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是单克隆恶性浆细胞在骨髓中无节制增生，最终造成骨髓造血功能异常的一种疾病，临床表现为贫血、骨痛、肾功能受损等[1]。骨髓瘤细胞分布呈灶性分布，与正常细胞的形态区别甚微，临床诊断时，往往会因此瘤细胞和正常细胞比值尚未达到诊断标准而无法确诊疑似患者，但表面免疫表型差异巨大。临床研究显示[2]，CD38和CD138在浆细胞上表达强烈，其中CD138仅在浆细胞表达，阳性率为100%，而CD38则更强。CD45在患者中多数为阳性表达，CD56则在正常浆细胞中几乎没有表达，却在骨髓瘤细胞中高表达。CD19在骨髓瘤细胞中却几乎不表达，目前，临床已经开始使用流式细胞仪鉴别骨瘤细胞核正常细胞[3]。本次研究选取2017年1月—2018年9月我院收治的49例多发性骨髓瘤患者，试检查肿瘤细胞表面的CD19、CD38、CD45、CD56、CD138的具体表达情况，以检测多发性骨髓细胞表面免疫表型，以与正常细胞进行鉴定和区别，具体报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2017年1月—2018年9月我院收治的49例多发性骨髓瘤患者作为研究组，并同期选取25例继发性单克隆免疫球蛋白血症患者作为对照组。研究组中男性25例，女性24例，年龄36～88岁，平均年龄（51.8±5.9）岁；肿瘤分期：ⅠA期2例、ⅠB 期3例、ⅡA期7例、ⅡB期9例、ⅢA期11例、ⅢB期17例。对照组患者中男性14例、女性11例，年龄42～76岁，平均年龄（50.8±4.2）岁，原发疾病：肝硬化6例、系统性红斑狼疮3例、肾炎7例、白血病7例、肺癌2例。两组患者的性别、年龄对比，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

抽取两组患者0.5 mL骨髓标本，进行抗凝处理。使用磷酸盐缓冲液重悬细胞，使得细胞数调整至1×106/L，取上样管，加入骨髓血样本50 μL、荧光标记抗体20μL、磷酸盐缓冲液25μL，混合均匀后，避光培育15 min，再加入200μL红细胞裂解液，混合均匀后，在室温下培育15 min，加入磷酸盐缓冲液2mL，以1 000 rpm的速度离心10 Min，弃去上清液后加入多聚甲醛固定液500 μL。设置流式细胞仪进行荧光校准和荧光补偿，用SSC和FSC设门，再以CD45和SSC设门，检测细胞表达情况。

1.3 仪器和试剂

CD19、CD38、CD45、CD56、CD138单克隆抗体、磷酸盐缓冲液、流式细胞仪、红细胞裂解液、多聚甲醛固定液。

1.4 诊断标准

荧光强度FI：≥500为强阳性，200～499为阳性，100～199为弱阳性，＜100为阴性。 患者免疫表型结果表达：CD抗原阳性率90%～100%为强表达；60%～89%为高表达；20%～59%为弱表达。

1.5 统计学方法

采用SPSS 20.0进行数据处理，计量资料用（均数±标准差）表示，采用t检验，计数资料用例（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者骨髓瘤细胞免疫表型荧光强度对比

研究组CD38和CD138荧光强度高于对照组，CD19荧光强度低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 骨髓瘤患者的流式细胞分析结果

CD19阳性率为6.1%（3/49），为弱表达，CD38 阳性率为100.0%（49/49），为强表达；CD45阳性率为38.8%（19/49），为弱表达；CD56阳性率为81.6%（40/49），为高表达；CD138阳性率为100.0%（49/49），为强表达。

3 讨论

多发性骨髓瘤在血液肿瘤疾病中较为常见，传统筛查常用骨髓细胞涂片形态学检测，但瘤细胞之间的增殖范围差异较大，容易造成医师误诊[4-7]。近年来，流式细胞术开始被频繁使用，其具有多种优点，检测迅速灵敏，可定性或定量检测细胞膜上多种抗体的表达。

表1 两组患者骨髓瘤细胞免疫表型荧光强度对比（ ±s）

表1 两组患者骨髓瘤细胞免疫表型荧光强度对比（ ±s）

组别 CD38 CD138 CD19 CD45 CD56研究组（49 例） 781．3±147．3 987．2±227．1 59．2±22．1 153．3±46．2 218．2±65．3对照组（25 例） 556．1±103．4 612．4±126．4 367．2±123．6 179．5±22．7 306．9±145．8 t值 6．824 7．653 17．025 2．669 3．623 P值 0．000 0．000 0．000 0．000 0．000

正常浆细胞表面没有特异性表面标志物，但通过分析免疫表型可区分正常细胞和瘤细胞，CD38、CD138均可在正常浆细胞和骨髓瘤细胞表达，CD38在多数恶性浆细胞表面也均可表达，CD19在正常浆细胞中表达，在骨髓瘤细胞中几乎不表达，CD56则相反，其可在骨髓瘤细胞中表达，但不在正常浆细胞中表达[8-9]。

本次研究结果显示，CD19阳性率为6.1%（3/49），CD38 阳性率为100.0%（49/49），为强表达；CD45阳性率为38.8%（19/49），为弱表达；CD56阳性率为81.6%（40/49），为高表达；CD138阳性率为100.0%（49/49），为强表达。正常细胞和恶性细胞均表达了CD38，但仅有骨髓瘤细胞的CD38表达率为100%，而CD138仅在骨髓瘤细胞和浆细胞中表达，可以作为鉴别多发性骨髓瘤细胞的特异性标志物。本次研究中，CD19阳性率为6.1%（3/49），与既往研究结果也一致[10-11]。分析原因为CD138是影响骨髓瘤的重要因素之一，若细胞发生凋亡，则CD138的表达也随之减少，所以可以根据CD138的表达情况来判断肿瘤细胞的数量变化。CD56属于免疫球蛋白，主要作用是介导造血细胞粘附，在预测骨髓瘤患者病情变化中有一定的作用[12-13]。本次研究中CD56阳性率为81.6%（40/49）也证实了这一点。在患者患病初期CD56的表达会增多，若CD56表达降低时，则可能提示有好转。

综上所述，使用流式细胞仪检测骨髓瘤细胞免疫表型可鉴别骨瘤细胞和正常细胞，具有重要诊断价值。