Vimentin和Suivivin在子宫内膜腺癌中的表达及其相关性研究

梁利丹，焦丹丹

子宫内膜癌(endometrium carcinoma)为女性生殖系统的三大恶性肿瘤之一，其中子宫内膜腺癌占80%～90%，严重威胁女性生殖健康及生命[1-2]。Suivivin属于凋亡蛋白抑制因子家族 (inhibitor of apoptosis proteins,IAPS) 成员，即凋亡蛋白抑制因子，Ambrosini等[3]应用EPR-1 (effector cell protease receptor-1)的cDNA最先分离出来，是人类基因组编码的IAP家族成员之一。Suivivin是一种相对分子质量为16.5 kD的蛋白质，由142个氨基酸构成。Suivivin可引起细胞的增殖失调控、永生化，进而发生癌变，参与血管生成，为肿瘤细胞的浸润和转移提供路径。

Vimentin是波形蛋白，属于Ⅲ型中间丝蛋白之一。而中间丝蛋白是细胞骨架的重要结构[4]，主要源于上皮细胞和间充质细胞，主要存在于白细胞、成纤维细胞等来源于中胚层的细胞中，与微管、微丝等构成了细胞骨架，对于调节及维持细胞功能起着重要的作用。Vimentin基因定位在染色体的10p13，DNA约为10 kb长度； 有研究显示Vimentin参与细胞迁移、黏附，参与细胞信号转导。Vimentin的存在有促进肿瘤细胞迁移的作用。

Vimentin和Suivivin在子宫内膜腺癌中的表达关系尚不明确，因此，本文采用免疫组化方法监测Vimentin和Suivivin在子宫内膜腺癌中的表达情况，以探讨二者与子宫内膜腺癌的相关性。现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料收集我院2009年至2012年刮宫或者手术切除标本的存档蜡块，其中子宫内膜不典型增生27例(对照组)、子宫内膜腺癌58例(按照FIGO2009分期)，均经病理确诊。以上标本均经4%甲醛固定，石蜡包埋切片，所有病例无其他恶性肿瘤。按照FIGO(2009) 分期标准及组织学分级标准：Ⅰ期16例，Ⅱ期25例，Ⅲ期17例；G1级25例，G2级16例，G3级17例。所有子宫内膜腺癌手术前未接受过性激素替代治疗或放、化疗。DAB酶底物显色剂，兔抗人Vimentin单克隆抗体(即用型)，SP免疫组化试剂盒，兔抗人Suivivin单克隆抗体(即用型)及SP免疫组化试剂盒均购自福建迈新生物工程有限公司。

1.2检测方法采用免疫组化SP法将石蜡组织制作成4 μm, 经二甲苯梯度脱蜡，梯度乙醇脱苯至水化，进行热修复抗原，然后免疫组化染色，严格按照试剂说明书。Vimentin波形蛋白主要定位于细胞质内，以胞质内出现棕黄色的颗粒为阳性判断标准。Suivivin凋亡蛋白抑制因子主要定位于细胞质内，以细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性判断标准。 均以福建迈新生物公司提供的阳性切片作为染色的阳性对照。将阳性细胞的百分比和染色强度进行综合评分，每个切片随机选取5个高倍镜视野(×400)进行观察，见图1-2。按照染色强度的深浅进行计分：0分为背景颜色一致或无染色，1分为淡黄色颗粒，2分为棕黄色颗粒，3分为黄褐色颗粒。按照阳性细胞数的百分比进行计分：0分无阳性细胞，1分为阳性细胞占1%～25%，2分为26%～50%，3分为>50%。颜色强度及阳性细胞数的分结果相加得分>2分者判为阳性，≤2分者为阴性。

1.3统计学方法Vimentin和Suivivin的免疫组化结果及与临床病理资料间关系使用是SPSS21统计学软件包，计数资料应用四格表χ2检验, 秩和检验分析进行统计分析Vimentin和Suivivin在子宫内膜腺癌中的表达的相关性分析。随访60个月，以死亡为终点事件，采用Kaplan-Meier生存分析法，并应用Log-rank检验，以P<0.05为显著性检验标准。

2 结果

2.1Vimentin在子宫内膜癌中的表达Vimentin阳性表达于胞质，其在子宫内膜不典型增生中的阳性率为3.70%，在子宫内膜腺癌中的阳性表达率为75.86%。子宫内膜腺癌中高中低分化的阳性表达率分别为56.00%、81.25%、100.00%，3组比较差异有统计学意义(P<0.05)， Vimentin在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期子宫内膜腺癌中的表达分别为56.25%、72.00%、100.00%，3组比较差异有统计学意义(P<0.05)，与淋巴结转移相关(P<0.05)，而与年龄无关(P>0.05)。在子宫内膜腺癌中分化越差、恶性程度越高、表达越强。

2.2Suivivin在子宫内膜腺癌中的表达Suivivin阳性表达为细胞膜/质，Suivivin在在子宫内膜腺癌中阳性表达于细胞质(阳性率25.92%)。子宫内膜腺癌中高中低分化Suivivin阳性率分别为64.00%、87.50%、100.00%，3组比较差异有统计学意义(P<0.05)，Suivivin在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期子宫内膜腺癌中的阳性率分别为50.00%、88.00%、100.00%，3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Suivivin的表达与组织学分级及FIGO分期相关(P<0.05)，与淋巴结转移相关，而与年龄无关(P>0.05)，见表1。

图1 Vimentin在不典型增生和子宫内膜腺癌组织中的表达(SP，×400)

图2 Suivivin在不典型增生和子宫内膜腺癌组织中的表达(SP，×400)

表1 Vimenitin和Suivivin在子宫内膜腺癌中的表达及临床生物学特性例(%)

2.3Vimentin蛋白和Suivivin蛋白在子宫内膜腺癌中表达的相关性在58例子宫内膜腺癌组织中，Vimentin和Suivivin在子宫内膜腺癌中的表达呈正相关(P>0.05)，见表2。

表2 Vimentin和Suivivin在子宫内膜腺癌中表达的相关性

2.4Vimentin和Suivivin的表达与预后分析将Vimentin和Suivivin的表达分为阳性组和阴性组，绘制了Kaplan-Meier生存曲线，Vimentin表达阳性组与阴性组相比较，差异有统计学意义(χ2=8.514，P<0.05)。Suivivin表达阳性组与阴性组相比较，差异有统计学意义(χ2=5.265，P<0.022)，见图3-4。

图3 子宫内膜腺癌Vimentin表达与预后Kaplan-meier分析(P=0.008)

图4 子宫内膜腺癌Suivivin表达与预后Kaplan-meier分析(P=0.040)

3 讨论

子宫内膜癌为妇科常见的恶性肿瘤之一，其中腺癌病理类型占子宫内膜肿瘤的80%～90%，在全球范围内，子宫内膜癌在全球恶性肿瘤中排第六位[5-6]。子宫内膜腺癌发病的确切病因及病理生理机制尚不十分清楚，目前认为缺乏体力活动和肥胖是子宫内膜癌的两个重要的高危因素[7]。然而，肿瘤的发生发展是由多种癌基因、抑癌基因等共同参与，引发细胞增殖与凋亡失衡并长期累积的结果。

Vimentin在乳腺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌中表达上调[8-9]，并与它们的侵袭转移有关；Suivivin包含一个凋亡蛋白抑制因子家族成员的特征性BIR结构区(baculovirus IAP repeat, BIR )，而且Suivivin的羧基末端的结构域是由一个含有丰富的疏水基团的α-螺旋结构取代锌指结构的蛋白，且与纺锤体上的微管蛋白结合，发挥了凋亡抑制的作用[10]。另外，在BIR结构域中含有对凋亡有重要抑制作用的氨基酸的残基，即Cys84、Trp67 和Pro33。Suivivin可通过残基与caspase-3和caspase-7结合，并抑制其活性。Suivivin基因定位于染色体17q25，长度为14 700 bp，3个内含子、4个主要外显子和3个隐藏外显子(a、b、c)组成，外显子与内含子的比例不同，组成了不同的Suivivin的异构体，在细胞凋亡过程中发挥不同的调节作用[11]。

Suivivin是介导线粒体凋亡途径的重要的凋亡抑制因子，在凋亡的细胞中高度表达，当细胞接收到凋亡信息时，线粒体凋亡途径激活，可诱导大量的Suivivin释放，抑制胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶介导的线粒体凋亡途径，抑制细胞的凋亡。Suivivin-ptEx2/3和Suivivin-2a等被发现[12-13]，并且证实其在细胞凋亡过程中发挥重要的调节作用。有研究提示Suivivin在宫颈癌、肝癌、胃癌、胰腺癌中均表达升高，提示Suivivin过表达促进肿瘤发生发展。在大部分恶性肿瘤内Suivivin的表达均上调，然而抑制Suivivin能激活细胞的线粒体凋亡途径，从而诱导肿瘤细胞的凋亡[14]。因此，Suivivin蛋白为肿瘤治疗研究的新靶点提供理论依据。

在子宫内膜腺癌中，Vimentin和Suivivin的表达均增高，这提示了它们和子宫内膜癌有相关关系，而二者在子宫内膜癌中呈正相关，说明它们在子宫内膜腺癌的发生发展过程中起到协同作用。Vimentin和Suivivin有可能作为子宫内膜腺癌发生发展和预后的临床诊断指标，并为子宫内膜腺癌的靶向治疗提供信息，而且为子宫内膜腺癌的预后和复发提供理论依据。