草果不同炮制品特征图谱比较研究

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(1.康美(北京)药物研究院有限公司，北京 102600；2.康美药业股份有限公司，广东 普宁 515300)

草果为姜科植物草果(Amomumtsao-koCrevostet Lemaire) 的干燥成熟果实，秋季果实成熟时采收，除去杂质，晒干或低温干燥。其味辛，温，归脾、胃经，具有燥湿温中、截疟除痰的功效，可用于寒湿内阻、脘腹胀痛、痞满呕吐、疟疾寒热、瘟疫发热的治疗[1]。现代药理学研究表明，草果具有抗氧化[2]、抗菌[3]、抗肿瘤[4-5]、调节胃肠功能[6]、抗诱变、防霉等作用。

目前有关草果的质量评价研究多集中于对桉油精等单一成分及总挥发油的定量测定上，建立草果挥发油类成分的特征图谱，可作为其质量全面评价研究的基础，同时对不同炮制品进行比较研究。

1 仪器与试药

7890B型气相色谱仪、7697A型氢火焰离子检测器(安捷伦科技有限公司)；毛细管色谱柱(DB-17，30 m×0.25 mm×0.25 μm、安捷伦科技有限公司)；XPE205型电子分析天平(梅特勒-托利多)；KQ-500DE型(昆山市超声仪器有限公司)。

乙酸乙酯(分析纯、20180310、北京化工厂)；桉油精对照品(110788-201606、98.4%、中国食品药品检定研究院)。收集主产地云南草果29批、广西草果8批和亳州市场3批草果，用于草果药材特征图谱研究。

草果仁：取净草果，按照清炒法(《中国药典》2015年版四部通则0213)炒至焦黄色并微鼓起，去壳，取仁。姜草果仁：取净草果仁，按照姜汁炙法(《中国药典》2015年版四部通则0213)炒干。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性[7]

火焰离子检测器；毛细管色谱柱(DB-17，柱长30 m，内径25 mm，交联50%二苯基甲基硅氧烷为固定相，涂膜厚度0.25 μm)；进样口温度250 ℃；检测器温度300 ℃；分流比5∶1。程序升温如表1所示。

2.2 对照品溶液制备

取桉油精对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.1 mg桉油精的溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备

取本品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，精密加入乙酸乙酯25 mL，称定重量，超声处理(功率600 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

表1 程序升温步骤

2.4 方法学验证

按照《中国药典》2005年版一部中药质量标准分析方法验证指导原则的要求，对上述方法进行方法学验证。稳定性实验表明样品在24 h内稳定性良好；精密度和重现性试验测得各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD小于5.0%，说明该方法重复性良好。

2.5 特征图谱分析结果和相似度分析

2.5.1 草果特征图谱 分别精密吸取对照提取物溶液与供试品溶液各1 μL，注入气相色谱仪测定，记录色谱图，即得。39批草果样品的供试品溶液按上述确定条件进样，记录色谱图。利用中药指纹图谱相似度评价系统软件，采用自动匹配法生成共有模式对照特征图谱，见图1、图2。

数据表明，5个特征峰的相对保留时间分别为0.885(峰1)、1(峰2，S)、1.589(峰3)、1.736(峰4)、1.867(峰5)，相对保留时间RSD均小于3%，说明不同产地和不同批次的样品有较多相同的成分；相对峰面积差异较大，RSD介于50.5%～73.2%之间，说明不同生长地区、不同环境与不同批次的样品含量差异较大。

图1 草果药材对照特征图谱(S.桉油精)

图2 39批草果药材特征图谱

2.5.2 草果仁特征图谱 草果仁33批样品的供试品溶液按上述确定条件进样，记录色谱图。利用中药指纹图谱相似度评价系统软件，采用自动匹配法生成共有模式对照特征图谱，见图3、图4。

图3 草果仁对照特征图谱(S.桉油精)

图4 33批草果仁特征图谱

数据表明，5个特征峰的相对保留时间分别为0.787(峰1)、1.000(S峰)、1.130(峰3)、1.200(峰4)、1.854(峰5)，相对保留时间RSD均小于1%，说明不同产地和不同批次的样品有较多相同的成分；相对峰面积差异较大，RSD介于42.7%～62.1%之间，说明不同产地和不同批次的样品含量差异较大，可能与原料质量和炮制工艺有关。

2.5.3 姜草果仁特征图谱 姜草果仁15批样品的供试品溶液按上述确定条件进样，记录色谱图。利用中药指纹图谱相似度评价系统软件，采用自动匹配法生成共有模式对照特征图谱，见图5、图6。

由实验数据分析可知，5个特征峰中仅1.000(S峰)均有检出，其他4个特征峰相对保留时间分别为0.787(峰1)、1.130(峰3)、1.200(峰4)、1.854(峰5)部分样品未检出。

2.5.4 草果药材、草果仁和姜草果仁特征图谱之间的相关性 对草果药材共有特征图谱S1、草果仁共有特征图谱S2和姜草果仁的共有特征图谱S3进行对比，验证其是否有相关性，结果见图7、图8。

结果表明，草果和草果仁特征图谱相似度为0.849，相似度高，说明有较多相同的成分，其成分含量比例较为一致；姜草果仁与草果药材、草果仁有很大差异。

图5 姜草果仁对照特征图谱(S.桉油精)

图6 15批姜草果仁特征图谱

图7 草果和草果仁特征图谱比较

图8 草果、草果仁和姜草果仁对比

3 讨论

按照《香港中药材标准》草果指纹图谱的测定方法，对供试品工艺的提取方法(水蒸气蒸馏法、超声提取法)，提取溶剂(正己烷、乙酸乙酯)、溶剂用量(10mL、25mL、50mL)进行考察，选定的方法峰形和分离度均良好，理论塔板数按桉油精峰计算不低于5000。

通过对草果不同炮制品的特征图谱研究，得到草果药材对照特征图谱，该图谱可代表其特性成分，作为草果药材的鉴别依据。

草果的临床应用在历代本草中多记载为去皮壳，药典规定以草果仁入药，研究结果表明草果药材与草果仁有较多的相同成分，草果去壳是否会浪费药材资源有待进一步商榷。

姜汁炙草果仁见于清代，沿用至今，草果仁姜炙后化学成分变化较大，炮制加热过程造成挥发性成分散失，挥发性成分的降低会不会造成其临床疗效降低，以及姜炙草果仁的炮制作用机理有待进一步研究。