动物寄生虫的实验检查法

孔凡兵

（黑龙江省双鸭山市动物疫病预防控制中心，黑龙江 双鸭山 155100）

通过实验室手段检查粪便或血液，可以确定宿主是否感染了体内寄生虫，及其感染种类和感染强度。其中，粪便检查在寄生虫病诊断、流行病学调查和驱虫效果评定上均具有重要意义。

1 小动物的体内寄生虫的检查

小动物的体内寄生虫检查是通过检查粪便中的寄生虫卵进行。应采用新鲜粪便样品进行检查，最好用粪环从直肠中采集粪便样品。采集的粪样应置于密闭容器中，加注适当标识后送交诊断实验室。寄送的粪样应固定在10%甲醛溶液中，也可在冷冻条件下寄送。其他防腐剂（如乙酸钠甲醛、聚乙烯醇）能更好地保护原虫，也有助于特殊染色（如三色染色法、铁苏木精染色法）。

可采用粪便直接涂片法和粪便漂浮法进行粪常规检查。通过在混合粪便样品中（用木制棉签的一头蘸取粪便）加1滴生理盐水（用于可游动的生物）直接制备涂片，然后加入卢戈氏液染色，以观察内部结构，如贾第鞭毛虫属寄生虫，并在载玻片上盖上盖玻片。粪便漂浮法主要用于诊断，需要大约2 g粪便，制备较为干净的样品。常用的漂浮液是糖和硝酸钠。采用硫酸锌漂浮法时，需要连续检查3 d，这是检查贾第鞭毛虫包囊的首选方法，这种包囊随粪便排泄时呈间歇式排泄，故需多次检查。采用贝尔曼沉淀法可对能游动的线虫幼虫进行收集和浓缩；一种可用于小动物的简便方法是在一滤茶器放置几层纱布，在其锥形漏嘴的广口端装上橡胶管和开关，将约2 g粪便置于纱布内，通过漏嘴加注温热的自来水或生理盐水，1 h后取沉渣物进行检查。幼虫由于重力作用而下沉，可从漏斗底部收集，并进行镜检。检查寄生虫的幼虫时，由于幼虫不易漂浮，也可采用特殊程序，如福尔马林乙酸乙酯沉淀法。采用饱和糖溶液漂浮法，聚焦到盖玻片下，即可检查到隐孢子虫卵囊（4~6 μm）或弓形虫卵囊（12 μm）。在进行镜检前10 min内，载玻片上的卵囊即可浮动到盖玻片的底面。

采集1滴血液直接制备血涂片，可用于检查能运动的犬恶丝虫的微丝蚴，但这不是唯一的检查方法。更精确的血液检查方法是改良的诺茨检查法：在15 mL试管中加入2%福尔马林溶液9 mL，再加入1 mL血液，以1500 r·min-1离心。弃去上清液，在沉淀中加入1滴亚甲基蓝染液，混匀后吸取适量滴在载玻片上，盖上盖玻片后进行显微镜检查，即可将犬恶丝虫的微丝蚴与非致病性隐蔽棘唇线的微丝蚴辨别开。对已经过治疗的犬，首选方法是防止患犬体内的犬恶丝虫变成微丝蚴，并采用两品化ELISA试剂盒检测犬恶丝虫雌成虫的循环子宫抗原。猫发生恶丝虫病时，由于恶丝虫的数量太少，因此无法依据微丝蚴血症或抗原血症的检查结果进行确诊；可以利用犬恶丝虫的抗体滴度，检测猫发生的提前暴露和可能存在的现症感染。

2 家畜的体内寄生虫的检查

应使用塑料手套从牧场采集新鲜的家畜粪便样品，最好从直肠采样。应将样品置于密闭样本瓶内，并进行恰当标识。由于不同动物排出的寄生虫卵囊数量差异很大，因此最少应采集10头动物的粪便，才能作为代表畜群样本的数量。可以将多份粪便样品充分混合形成一个组合样品，以便对一个畜群的混合样品进行检查。可以采用改良的威斯康星离心漂浮法或类似方法，计算粪便中的虫卵数，以便对发生“胃肠道寄生虫综合征”中的线虫（如牛的毛圆线虫幼虫）相对感染负荷进行评估，也可用于检查球虫和其他寄生虫，如肺线虫的幼虫和绦虫。取3 g粪便样品置于容器内，悬浮于约15 mL水中，通过纱布过滤到15 mL离心管内，以1 500 r·min-1离心3 min。弃去上清液，在沉淀中加入饱和糖溶液混均，将混合液倒入小管内，用吸管逐渐注满小管，使液面突出于管口形成正弯月透镜形，然后在管口盖上22 mm×22 mm的盖玻片。将试管再次以1 500 r·min-1低速离心5 min。盖玻片上的表膜就可能含有虫卵，将盖玻片取下，置于显微镜载玻片上，对毛圆线虫和类圆线虫虫卵进行计数。所得总数除以3可得到每g粪便样品的虫卵数（EPG）。如果存在其他寄生虫，也应记录，一般丰度指数表示方法为＋1（极少）、＋2（少量）、＋3（大量）或＋4（不计其数）。

饱和食盐溶液（sg为1.20）是检查家畜寄生虫的一种廉价介质，但食盐对金属可能有腐蚀性。硫酸镁（sg1.20）是检查猪粪的首选介质。计算EPG时，也可使用特制载玻片，其上有已知容量的计数室，尤其是对小反刍动物。用巴斯德吸管将含有滤液（通常是饱和盐水）中的粪样注入到计数板上每个计数室内，在低倍显微镜下进行虫卵计数。常用的计数板是麦克马斯特计数板，计数板上有两个计数室，每个计数室的容积为0.15 mL。例如，如果3 g粪便与42 mL浓缩液混合，然后进行计数，所得虫卵数乘以50即可得粪样中的EPG。在幼龄动物检出的EPG值和相对蠕虫数之间的相关性一般比较高，但成年动物检出的EPG值通常比较低（<5EPG）或出现负数。青年牛的EPG值一般是成年牛的10倍，青年牛的EPG>50表明有中度感染，EPG>500则表明虫卵数量很多需要进行治疗。