冠通颗粒中苦杏仁苷含量测定的方法研究

2019-02-11 09:37蓝保强陆霞农云开饶伟源
药学研究 2019年12期
关键词:桃仁甲醇供试

蓝保强,陆霞,农云开,饶伟源,2

(1.广西中医药研究院,广西 南宁 530022;2.广西中药质量标准研究重点实验室,广西 南宁 530022)

冠通方来源于有多年临床使用的民间验方,立足“胸痹心痛”的中医辨证理论而拟定,由桃仁、红花、当归、川芎等药材组成,具有理气化痰,温通经络,活血止痛之功效,用于痰瘀阻络型胸痹心痛。

广西中医药研究院和玉林市中医医院进行科技合作,对冠通方进行系统研究,将其开发成医疗机构制剂——冠通颗粒,为了有效地控制药品质量,本文采用高效液相色谱法对冠通颗粒进行研究,选定方中君药桃仁中的主要活性成分苦杏仁苷作为含量测定指标,建含量测定方法,为完善其质量标准提供了科学依据。

1 仪器与试药

LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司);SPD-20A型紫外检测器;AUW220D 型十万分之一电子天平(日本岛津公司);KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。苦杏仁苷对照品(中国食品药品检定研究院提供,供含量测定用,批号:110820-201607,含量以90.7%计),冠通颗粒及缺桃仁的阴性样品由玉林市中医医院制剂室。水为重蒸水,甲醇为色谱纯试剂,其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取苦杏仁苷对照品适量,加甲醇制成浓度为50 μg·mL-1的溶液,即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取冠通颗粒适量,研细,混匀,取细粉约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,置水浴上加热回流60 min,放至室温,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。

2.1.3 阴性样品溶液的制备 取缺桃仁的冠通颗粒阴性样品适量,研细,混匀,取细粉约0.5 g,照“2.1.2”项下方法制备阴性样品溶液。

2.2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱: Shimadzu VP-ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相:甲醇-水 (20∶80);检测波长:210 nm;柱温:25 ℃,进样量为10 μL。在此色谱条件下,苦杏仁苷峰分离度大于1.5,理论板数按苦杏仁苷峰计算不低于4 000。阴性样品溶液、供试品溶液及对照品的色谱图见图1。

A.阴性样品溶液;B.供试品溶液;C.对照品

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密称取苦杏仁苷对照品8.27 mg(含量以90.7%计),置100 mL量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液(浓度为75.0 μg·mL-1)。按正文拟订的色谱条件,分别进样2、5、10、15、20 μL对照品溶液,以苦杏仁苷对照品进样量(X,μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标(Y),绘制标准曲线并计算回归方程和相关系数,得回归方程为:Y=2.05×106X-1.87×104(r=0.999 9)。结果表明:当苦杏仁苷进样量在0.15~1.50 μg范围内时,线性关系良好。

2.3.2 专属性试验 取“2.1.3”项下阴性样品溶液,照“2.2”项下的色谱条件,进样10 μL测定,结果在苦杏仁苷出峰位置未出峰,说明阴性无干扰。阴性样品溶液的色谱图见图1。

2.3.3 精密度试验 取同一份供试品溶液,照“2.2”项下的色谱条件,连续进样10 μL测定6次,记录苦杏仁苷峰面积并计算RSD, 6次测定结果峰面积的RSD为1.40%(n=6),说明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 取同一供份试品溶液,照“2.2”项下的色谱条件,于0、1、2、3、6、12、24 h分别进样10 μL测定,结果稳定性试验测定苦杏仁苷峰面积的RSD为1.53%(n=7),结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 重复性试验 取同一批样品(批号:180801),研细,混匀,取细粉约0.5 g,共6份,分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,平行测定,结果6份样品测定苦杏仁苷含量的平均值为:3.618 mg·g-1,RSD=1.67%(n=6)。结果表明,本法的重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密称取苦杏仁苷对照品9.76 mg(含量以90.7%计),置250 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,备用(浓度为35.41 μg·mL-1)。称取冠通颗粒(批号:180801,苦杏仁苷含量为3.618 mg·g-1)约0.25 g,平行取6份样,分别精密加入上述浓度为35.41 μg·mL-1的对照品溶液25 mL,按 “2.1.2”项下方法制备加样回收供试品溶液,测定,计算回收率,结果平均回收率为97.18%,RSD=1.95%(n=6)。

表1 加样回收率试验结果(mg,n=6)

2.4 样品测定 按本文建立的含量测定方法,测定了本品7批小试样品和3批中试样品中的苦杏仁苷含量,结果10批样品含量在2.69~3.77 mg·g-1之间,平均含量3.28 mg·g-1。

3 讨论

3.1 测定指标的选择 桃仁为冠通颗粒方中君药,为蔷薇科植物桃[Prunuspersica(L.) Batsch]或山桃[P.davidiana(Carr.) Franch.]的干燥成熟种子[1],具有活血祛瘀、止咳、平喘润肠通便等功效[2-5],苦杏仁苷(amygdalin)是桃仁的主要有效成分之一,其不仅有祛痰止咳的功效,研究显示苦杏仁苷和其降解物还有抗动脉粥样硬化、免疫调节、抗肿瘤、抗炎等作用[6-7],此外,苦杏仁苷本身虽然无毒,但通过酶解有可能产生有毒的氰化物[8],所以测定苦杏仁苷的含量对控制冠通颗粒的安全有效具有重要意义。

3.2 供试品溶液的制备提取方法的比较 研究中对比了样品分别精密加入甲醇25 mL,分别按超声处理(功率240 W,频率40 kHz)30 min、超声处理(功率240 W,频率40 kHz)60 min和加热回流60 min处理,制得供试品溶液后,分别进样测定。

表2 提取方法考察结果

从表2的结果可以看出本品加热回流效率远大于超声提取,这明显有别于多数中药指标性成分超声提取效率和加热回流提取效率较接近的情况[9-10],本文选择提取较完全的加热回流作为提取方法。

3.3 为了避免对医院原冠通方的提取工艺发生质的改变,在开发成医院制剂时,保留其传统的煎煮工艺,用采用L9(34)正交设计,进行正交试验优选工艺参数,10批试制样品中苦杏仁苷转移率35.2%~46.4%,保持比较稳定的水平。

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