沙眼衣原体感染对男性精子顶体酶活性的影响

王洪华 江世文 林孟远 顾 晔 张怡璇 熊 芳 陈道桢 杨亚萍

南京医科大学大学附属无锡妇幼保健院（江苏无锡 214002）

根据相关流行病学调查显示，育龄夫妇不孕不育发生率为10%～15%，其中一半为男性原因[1-3]，导致男性不育的因素较多，主要分为外部因素和内部因素，其中男性生殖系统炎症可改变精子生成及成熟的微环境，是影响男性精液质量导致不育的重要因素之一[4]，在影响男性不育的诸多因素中生殖系统感染约占4%～10%[5]。现对在本院诊断为精子顶体酶活力低下并有沙眼衣原体感染的不育男性患者39例进行治疗，将结果报道如下。

合肥市轨道交通1号线车站建筑方案设计的思路及探讨………………………………………………………… 闫阳（10-44）

资料和方法

一、研究对象

纳入标准：（1）年龄22～37岁；（2）不育时间3～9年，平均4.5年；（3）夫妻同居12个月以上，正常性生活，未采取任何避孕措施，未使女方受孕，且精液常规检查结果参数正常者；（4）无药物过敏史；（5）被诊断为精子顶体酶活力低下（＜36.0IU/106）并有沙眼衣原体感染。经抗炎治疗后转为阴性的男性不育患者。按上述标准，2016年9月至2017年11月在我院生殖医学中心就诊的39例男性不育患者被纳入研究，作为治疗组；同时选取1年内正常生育男性45例作为对照组。

精子顶体酶活力低下并有沙眼衣原体感染的患者的治疗是口服罗红霉素胶囊（浙江亚太药业股份有限公司生产，国药准字号：H10970189），0.15g，2次/d，连续2周，治疗期间禁止同房。

二、研究方法

1. 计算机辅助精子分析 （CASA）：采用计算机辅助精子分析仪检测精子浓度、前向运动（RP）精子百分率等。

段文瀚解释说，第一个“绿色”之所以叫“绿色矿山”，是因为云天化采用最先进、效率最高的开采技术，极大提高了对磷矿石的利用率，做到了对资源的充分利用和循环利用。除此之外，云南的磷矿大都是胶磷矿，杂质含量较多，这就需要采用先进的浮选技术对胶磷矿进行加工，使其更干净、有害因子更少。同时，矿产开采完之后，云天化还会对土壤进行回填，利用先进技术进行浮土植被的种植。浮土植被的种植听起来简单，实际上对技术有很高的要求，前期投入巨大。据段文瀚介绍，上个世纪80年代至今，云天化单是复垦植被，恢复绿色的投入就将近10亿元，目的就是希望从源头支撑整个绿色发展理念的运行。

2. 精子形态学分析 （Diff-Quik法）：检测精子畸形率=畸形精子数/计数精子总数×100%。

3. 检测精子顶体酶活性：采用改良Kennedy法（试剂盒由南京欣迪生物科技公司提供）测定，正常参考值为≥36.0IU/106。

美国专利链接制度实施几十年以来，随着第IV段专利挑战数量的增加，因此而引发的诉讼数量也随之增加。据统计，1992-2001年10年间，美国共有75件针对首个第IV段专利声明提起的专利诉讼，每年平均仅有7.5件；⑬ 同注释⑫。而在2003年至2009年7年间就有238件此类诉讼，每年平均达34件，且每年的诉讼量逐年上升。⑭ RBC Capital Markets Corp. Analyzing Litigation Success Rates，January 15, 2010.

5. 精液采集及顶体酶活性测定 对于上述患者进取精检查（内容包括精液常规、精子形态及顶体酶测定），受检者禁欲3～7 d，手淫法采集精液置入干净的一次性取精杯内，立即在37℃恒温水浴静置，待其完全液化后进行检测。对于不液化的标本，采用机械振荡或吹打的方法使其液化，严格依据WHO第5版精液分析标准行精液参数检查。

4. 检测CT感染情况：严格按照CT-DNA 荧光定量PCR试剂盒（由中山达安基因公司提供）说明书操作，拷贝数大于103copy/mL判定为阳性。

⑱Helena Machado，“Biologising Paternity，Moralising Maternity:The Constitution of Parenthood in the Determination of Paternity Through the Courts in Portugal”，Feminist Legal Study，215(16)，2008，p．221．

三、统计学处理

应用SPSS 19.0 软件，对以上数据进行分析，结果数据采用（±s）表示，采用t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

结 果

由表1可见，治疗组治疗前后在PR精子百分率、精子浓度及精子正常形态率方面与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。精子顶体酶活性治疗组治疗后明显高于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05），治疗后与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。沙眼衣原体感染率治疗后获得明显改善，与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0.05），治疗后与对照组比较差异无统计学意义（P＜0.05）。

表1 两组精液指标以及沙眼衣原体感染率精子顶体酶活性结果比较

讨 论

不孕不育是困扰许多育龄夫妇的一个世界性问题。带给社会和家庭的负担是难以想象的，不仅加重经济负担，还给患者带来很大的心理压力。据相关流行病学调查显示，在不孕不育夫妇中，男性因素占25%～40%，男性不育的患者数量不断增加，受到了社会多方面的广泛重视。导致不育有多种因素，备受关注的是男性生殖道感染，其中沙眼衣原体感染对正常生育力影响的机制部分已得到明确。沙眼衣原体是一种在宿主细胞内生长的革兰氏阴性病原微生物，全球每年大约有1亿新增感染病例，在许多国家每年感染例数还在不断增加[6,7]，有报道生殖道衣原体感染可导致竞争凋亡增加，引起顶体消失，从而造成精子穿透力减弱[8]。

精子顶体酶是一种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，以酶原的形式合成并储存在顶体中与顶体膜相连，当发生顶体反应时，就会释放顶体酶原被激活成有活性的顶体酶并被释放出来，水解卵透明带上的糖蛋白，精子剧烈运动及楔样作用，顺利穿过卵丘再穿过透明带，让精子能够进入到卵子的胞浆内完成受精过程。另外，顶体酶还具有增加生殖道激肽释放、增强精子活性和促进精子运动的作用。因此可见，顶体酶是受精过程中不可缺少的一种中性蛋白水解酶，其活性的高低很大程度决定了受精过程是否能顺利进行。其活性程度对生育有着直接的影响[9,10]。有研究表明锌在高浓度时，会使所有结合形式的酶失活，而低浓度时则可诱导顶体酶的激活，这种对顶体酶的可逆性调控作用使精子活动免受男、女生殖道对其潜在的损伤，直到与卵子结合。近年来有许多研究认为精子顶体酶是判断精子生育能力很有价值的指标[11]在活化的蛋白激酶A作用下磷酸化，磷酸化后可激发顶体外膜的电压依赖性钙通道开放，Ca2+释放至胞质；Ca2+使磷脂酶C 活化并水解磷脂酰肌醇二磷酸后激活蛋白激酶C，从而导致质膜上电压依赖性钙通道开放，大幅升高胞质Ca2+浓度，引起精子获能、质膜溶解及顶体反应发生。有学者研究发现低浓度NO 则具有保护精子活力的作用，而高浓度NO 则抑制精子活动力，降低顶体反应率[12]。已有研究发现生殖道慢性炎症可明显影响精子顶体酶活性、精子总活力、精子活动率及前向运动精子百分率、正常形态率及精子低渗肿胀，但对精液pH、精液量及精子密度等参数无明显影响。由于这些患者前列腺液中含有大量激活的炎症细胞，促发炎症反应，一方面可能通过与精子直接接触方式损伤精子，另一方面可能通过粒细胞产生可溶性物质来升高精浆中的活性氧（ROS）水平而至精子功能受到损害[13]并可引起精子顶体酶受损破裂，导致顶体酶流失或使其活性改变，致顶体反应性降低，从而影响精子活动率、精子运动参数和精卵结合而导致不孕不育。 近年来顶体酶活性的相关性研究逐渐成为男性不育领域的热点，这都为广大致力于男性不育症诊疗的科技和临床工作者提供了广阔的领域。值得注意的是在精液参数正常的情况下，精子顶体酶活性的检测是从另一个角度提供判断精子生育能力的方式，这是常规精液检测无法比拟的。