高通量测序技术在产前诊断中的临床应用

金敏

553000六盘水市妇幼保健院，贵州六盘水

出生缺陷又称先天异常，包括无脑儿、脊柱裂、兔唇、先心病、唐氏综合征等多种疾病，是影响新生儿健康状况、导致家庭经济负担加重的主要因素。加强产前检查，可有效检出上述疾病。有研究指出，高通量测序技术的应用，对出生缺陷检出率的提高具有重要意义。在本院2017年5月-2018年5月收治的孕妇中随机选取产前筛查中唐氏筛查高风险和临界高风险(开放性脊柱裂除外)孕妇300 例作为样本，阐述了高通量测序技术的应用方法，观察了该技术的临床效果。

资料与方法

选取产前筛查中唐氏筛查高风险和临界高风险(开放性脊柱裂除外)孕妇300例，年龄20～34岁，孕周16～20周；所有孕妇均自愿参与本研究，且依从性良好，可定期接受随访。

方法：①采用三联生化指标进行唐氏筛查，唐氏数据采用腾程软件处理，21-三体高风险截断值为1/380，18-三体为1/350。②300 例孕妇均采用高通量测序技术进行产前检查：和产前诊断中心合作，采用贝瑞华康基因检测；抽取孕妇血浆，获取血浆游离DNA，高通量测序结果。③高风险者再进行羊水穿刺染色体诊断，对结果进行分析，判断有无出生缺陷。④对低风险者进行随访妊娠结局，判断有无出生缺陷。

统计学方法：计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验；计量资料以(±s)表示，采用t检验；P＜0.05 为差异有统计学意义。

结 果

高通量测序结果：高通量测序结果提示高风险者占4.33%(13/300)，T21阳性占4.0%(12/300)，T18阳 性 占0.33%(1/300)，未见T13阳性(0/300)。

患者验证结果：高风险患者中，真阳性占92.3%(12/13)，假阳性占7.7%(1/13)，已验证者占100%(13/13)；T21阳性患者中，真阳性占92%(11/12)，假阳性占8%(1/12)，已验证者占100%(12/12)；T18阳性患者中，真阳性占100%(1/1)，假阳性占0(0/1)，已验证者占100%(1/1)；未发现T13阳性患者。其余287例低风险孕妇经过随访妊娠结局，未发现21-三体，18-三体患儿的出生，假阴性均为0%。

讨 论

出生缺陷为影响新生儿健康状况的关键因素，孕期检出并及早给予干预，可有效提高新生儿的健康水平，减轻家庭经济负担[1]。出生缺陷的常规诊断方法以羊水穿刺为主，临床研究发现，采用羊水穿刺的方式诊断疾病，检出率约为42.5%[2]。导致羊水穿刺检出率低的原因，与以下因素有关：①健康知识匮乏：部分孕妇及家属健康知识匮乏，认为夫妻双方身体健康，则无对出生缺陷进行筛查和诊断的必要，故拒绝羊水穿刺，导致出生缺陷检出率下降[3]。②担心风险：部分孕妇错误地认为，羊水穿刺可增加流产的风险，因此孕妇对该检查技术往往伴有一定的恐惧情绪，导致唐氏综合征等出生缺陷的检出率下降[4]。

高通量测序技术(High-throughput sequencing)又称下一代测序技术，可一次性对几十乃至几百万DNA 分子序列进行测定[5]。该技术的出现，使得基因领域的研究取得了革命性进展。为提高出生缺陷的检出率，本院将高通量测序技术应用到了出生缺陷的诊断过程中，结果显示，高通量测序结果提示高风险者占4.33%，其中T21阳性占4.00%，T18阳性占0.33%，未见T13阳性。上述研究结果表明，采用高通量测序技术进行产前诊断，可有效检出T21、T18及T13阳性患者。为判断该技术诊断结果的准确性，本院通过羊水穿刺和随访的方式，对诊断结果进行了验证，结果显示，T21真阳性占92%，假阳性占8%；T18阳性患者中，真阳性占100%，假阳性占0%；低风险患者随访妊娠结局，未发现21-三体，18-三体患儿的出生。上述研究结果表明，采用高通量测序技术进行产前筛查，检出结果准确性较高。与常规羊水穿刺技术相比，高通量测序技术具有如下优势：①检出率高：本研究结果表明，将高通量测序技术应用到产前诊断中，T21、T18及T13阳性的检出率均较高，可见该技术具有一定的临床应用价值。②无痛苦：采用高通量测序技术进行产前筛查，仅需获取孕妇血浆即可，孕妇无痛苦，无恐惧情绪，接受度高。③成本低：与羊水穿刺相比，高通量测序技术测序成本较低，可减轻孕妇的经济负担，有助于提高出生缺陷的检出率，应及早给予干预，提高新生儿的健康水平。④耗时短：高通量测序技术，测序时间较短，效率较高，孕妇可于短时间内获取检测结果，无需长期等待。⑤作为唐氏筛查的补充手段，可避免95%以上的唐氏筛查高风险和临界高风险假阳性患者进行羊水穿刺和脐穿刺等有创性的产前诊断。结合以上优势可以看出，高通量测序技术在产前诊断中的应用价值较高，值得推广。

综上所述，将高通量测序技术应用到产前诊断中，能够有效提高T21、T18及T13阳性检出率，可以作为唐氏筛查的补充，节约成本、时间(与羊水穿刺相比较)，降低羊水穿刺带来的风险与出生缺陷的发生率。