丹皮酚影响哮喘大鼠气道高反应性的研究

赵智丽，黄莹，应梦佳

（深圳市龙华区人民医院药学部，广东深圳 518109）

哮喘作为全球患病率、死亡率较高的呼吸系统疾病，近几年发病率上升已成为威胁人类身心健康的常见疾病之一，疾病病程长、并发症多、易反复发作，如何有效治疗控制病情发展、提高患者生存质量得到临床治疗者关注[1]。虽然目前可用于哮喘的西药较多，但受药物毒副作用影响，部分患者疗效不理想，因此临床一直在寻求一种质优价廉、安全稳定的药物来进行治疗。近些年随着中药广泛用于临床疾病治疗，有学者研究发现丹皮中有效成分丹皮酚能有效改善患者肺功能，临床认为可能与丹皮酚能减轻气道高反应、降低相关细胞因子水平表达有关[2]。但目前临床相关丹皮酚治疗哮喘的机制研究较少，故本文通过观察哮喘大鼠应用丹皮酚后气道高反应性情况，探究药物治疗机制，旨在为后期临床疾病治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 动物、仪器、试剂 本次选取SD大鼠均为雄性、健康、清洁级，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，许可证号：SCXK沪，2012-0002；共40只，体质量230.6 g-264.8 g，平均（247.0±5.8）g，随机将大鼠分为四组，每组大鼠10只。试剂、仪器：离心机、电子天平、超声雾化器、全自动酶联免疫工作站、动物肺功能分析系统；氢氧化铝（分析纯）、水合氯醛（分析纯）、乙酰胆碱、卵清蛋白，丹皮酚注射液 （批准文号：国药准字H33020043，产品规格：2 mL：10 mg，宁波天真制药有限公司）、IgE试剂盒。

1.2 方法

1.2.1 模型制作 模型组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组大鼠以0.2% OVA凝胶（10%氢氧化铝凝胶配制后溶入OVA）行十点（即四足趾、颈部、两侧腹股沟及背部上中下）致敏，每点皮下注射凝胶0.05 mL，最后腹腔注射0.5 mL，同时雾化吸入0.2%OVA，建立哮喘大鼠模型，术后正常饮水、进食。空白对照组致敏及雾化吸入均使用生理盐水。

1.2.2 给药 丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组分别灌胃给药丹皮酚75 mg/kg、300 mg/kg，并在给药后半小时再次行雾化吸入1%OVA，攻击30 min，空白对照组、模型组给予生理盐水。如此持续4周。

1.2.3 血清IgE检测 在最后一次攻击1天后，对大鼠以3.5%水合氯醛进行麻醉，取腹主动脉血2 mL-3 mL，进行离心处理，使用离心机参数3,000 r/min，离心时间15 min，取血清以ELISA法对血清IgE水平进行检测，严格按说明书进行。

1.2.4 气道反应性测定 在取血后对大鼠腹腔注射0.8%戊巴比妥钠麻醉，行气管插管，对大鼠尾静脉注射Ach，浓度依次为1.0 mg/kg、4.0 mg/kg、8.0 mg/kg，每浓度注射间隔5 min，以肺功能仪观察大鼠、肺顺应性（Cdyn）、气道阻力（RL）变化情况。

1.3 观察指标 观察大鼠血清IgE水平变化，测定大鼠注射乙酰胆碱（Ach）后气道反应情况，观察RL、Cdyn下降率。

表1 血清IgE水平变化（Mean±SD,μg/mL）

1.4 统计学分析 以SPSS 20.0系统行统计学分析，计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示，采用t检验。计数资料采用率（%）表示，采用卡方检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠模型建立情况 在OVA致敏、激发后，模型组出现呼吸急促、饮食减少、打喷嚏、烦躁不安、腹部煽动、口唇发绀等情况，空白对照组小鼠一般状态正常，其他两组大鼠较模型组状态有改善，此次建模成功。

2.2 大鼠血清IgE水平变化 各组间血清IgE水平有明显差异（P＜0.05），具体见表1。

2.3 大鼠气道高反应性变化 不同浓度各组间RL、Cdyn下降率有明显差异（P＜0.05），具体见表2。

表2 大鼠气道高反应性变化（Mean±SD,%）（n=10）

3 讨论

支气管哮喘是临床进展性慢性病，临床症状以喘息、胸闷、咳嗽等常见，且易反复发作给患者生活、工作等造成影响，临床认为疾病发生与气道高反应有关，目前疾病治疗主要以西药为主，其中糖皮质激素是现今最有效的药。其具有良好抗炎作用，但大量实践表明此类药不良反应较多，易造成患者依赖性，因此临床在寻求一种新型药物来治疗疾病[3]。

丹皮酚是中药丹皮中有效成分，现代药理研究发现其具有抗炎、抑制变态反应的作用，能有效抑制炎症因子释放，而哮喘发生是由多种炎性因子共同作用所致，有学者认为此药能通过抑制机体炎症发展，从而松弛支气管平滑肌，改善哮喘症状[4]。但目前有关研究较少，故本次观察哮喘大鼠用药后的情况，I型变态反应主要是由IgE介导，当IgE水平上升时，机体大量炎性介质释放，细胞浸润导致气道分泌粘液增加，血管壁通透性增加、平滑肌收缩，促哮喘发作，故血清中IgE水平是哮喘病情严重程度、缓解的重要指标[5]。本研究中模型组血清IgE水平高于其他三组，而丹皮酚低剂量IgE水平高于丹皮酚高剂量（P＜0.05），提示丹皮酚能有效降低患鼠血清IgE水平，高剂量此药能抑制炎症细胞浸润、防治哮喘发作。

气道高反应（AHR）是哮喘的特征，哮喘病情严重程度与其AHR的高低呈正相关，故临床一般以AHR是否降低作为疾病治疗有效性的指标，而RL、Cdyn作为AHR评价指标，RL、Cdyn下降率越低表示气道反应越低，哮喘改善效果越好[6]。本次丹皮酚组RL、Cdyn下降率低于模型组，且丹皮酚高剂量下降率低于低剂量（P＜0.05），提示丹皮酚能减轻RL、提高肺顺应性，从而降低气道高反应性，改善哮喘发作。

综上所述，高剂量丹皮酚能降低哮喘大鼠气道高反应性、减少血清IgE水平，可能会对哮喘防治起到一定作用。