两种方法分析白酒中己酸乙酯成分

侯冬岩，李铁纯，回瑞华，刁全平，张美丽

(鞍山师范学院 化学与生命科学学院,辽宁 鞍山 114007)

中国白酒是世界蒸馏酒中独树一帜、具有中国浓厚文化色彩的产品.白酒味苦、甘、辛，性温，入心、肝、肺、胃经；可通血脉，御寒气，醒脾温中.适量饮用白酒有通风散寒、舒筋活血的作用；还可以消除疲劳，陶冶情操，使人轻快并有提神的功能.有失眠症者睡前饮少量白酒有利于睡眠，并能刺激胃液与唾液分泌，起到健胃的作用.此外，饮用少量低度白酒可以扩张血管，促进血液循环，延缓胆固醇等脂质在血管壁的沉积，对循环系统及心脑血管有利.近年来，关于白酒的酿造工艺、白酒香味成分的分析、白酒的香型及白酒的应用等报道较多[1-10].本文采用固相萃取-气相色谱-质谱联用和高效液相色谱法分析4种常见白酒的己酸乙酯[11-14]，建立快速准确的分析方法，为开发和利用白酒提供实验参考.

1 实验仪器与材料

1.1 试验仪器

HP 6890-5973气相色谱-质谱联用仪，美国惠普公司；75 μm CAR/PDMS Extraction of head(SUPELCO USA)；R2-201型旋转蒸发器，上海中科机械研究所；510High performance liquid chromatograph (Waters,USA)；PHS-3C精密数显酸度计，上海天达仪器有限公司.

1.2 试剂

氯化钠(AR，国药集团化学试剂有限公司),甲醇(色谱纯，山东禹王化学试剂厂),无水乙醇(天津市光复精细化工研究所),乙腈(色谱纯，山东禹王化学试剂厂),磷酸二氢钾(AR，天津市科密欧化学试剂开发中心).

1.3 实验样品

河套老窖、水井坊、老龙口、五粮液.

2 4种常见白酒香气成分的分析

2.1 香气成分的提取

移取5 mL酒样于顶空样品瓶中并密封瓶口，在40 ℃条件下预热15 min，将萃取头插入到样品瓶中，并于40 ℃恒温萃取吸附30 min.然后将萃取头插入气相色谱仪的进样口，在240 ℃下解吸5 min[15].

2.2 GC-MS测定条件

GC条件：HP-FFAP弹性石英毛细管色谱柱(25.0 m ×200 μm×0.30μm)；进样口温度：240 ℃；载气：He；流速：1 mL/min；柱温：40 ℃(5 min)，以10 ℃/min升温至220 ℃(13 min).

MS条件：离子源为EI源；离子源温度为230 ℃；接口温度为230 ℃；四极杆温度为150 ℃；电离电压为70 eV；倍增电压为1 988 V；发射电流为34.6 μA；质量范围m/z为20～500.

2.3 实验步骤

采用75 μm CAR/PDMS萃取头提取1.3中酒样品的香气成分，由GC-MS对样品进行分析鉴定.图1～图4分别给出4种浓香型白酒样品的总离子流图，表1给出其分析结果(表中1、2、3、4分别代表河套老窖、水井坊、老龙口、五粮液).

图1 河套老窖白酒的总离子流图

图2 水井坊白酒的总离子流图

图3 老龙口白酒的总离子流图

图4 五粮液白酒的总离子流图

由表1可知，4种常见白酒主要香气成分组成均含有己酸乙酯，且相对百分含量都较高.

河套老窖含己酸乙酯59.23%、水井坊含己酸乙酯51.82%、老龙口含己酸乙酯68.05%、五粮液含己酸乙酯60.87%.

3 4种常见白酒中己酸乙酯的HPLC定量分析

3.1 标准溶液的制备

将甲醇和乙腈分别经0.45 μm微孔滤膜过滤、脱气.配制0.1 mol/L的KH2PO4溶液作为流动相，经0.45 μm微孔滤膜过滤、脱气.准确称取0.352 2 g己酸乙酯于10 mL容量瓶中，用60%乙醇水溶液定容，得到浓度为35.22 mg/mL己酸乙酯标准储备液.再取己酸乙酯标准溶液2 mL置于25 mL容量瓶中，用60%乙醇水溶液定容.

3.2 样品溶液的制备

分别取适量的河套老窖、水井坊、老龙口、五粮液酒样，经0.45 μm微孔滤膜过滤，待测.

3.3 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱；流动相：乙腈和纯净水的体积比为35∶65；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；扫描波长：190.0～400.0 nm；进样量：10.0 μL.

表1 4种常见白酒的香气成分组成及相对百分含量

3.4 检测波长的确定

取适量的3.1标准溶液，按3.3 色谱条件，在波长范围190～400 nm内扫描，在210 nm 处有最大吸收峰，高效液相色谱图如图5.取适量的3.2 样品溶液，按3.3 色谱条件，在波长范围190～400 nm内扫描，均在210 nm 处有最大吸收峰.因此，选择检测波长为210 nm.

图5 己酸乙酯标准溶液的高效液相色谱图

3.5 标准曲线的绘制

从3.1制备的标准溶液中，准确移取0.20,0.40,0.60,1.00,1.50,2.00 mL标准溶液于10 mL容量瓶中，用60%乙醇水溶液定容.标准溶液浓度与色谱峰面积之间的回归方程为：

y=361 798x+272 26，γ=0.999 9，

线性范围为0.704 4～7.044 mg/mL.

3.6 样品的测定

准确称取经3.2处理的4种白酒样品，每个样品测定3次，计算4种白酒样品的己酸乙酯含量，见表2.

表2 4种常见白酒样品中己酸乙酯的含量测定结果 (mg/mL)

3.7 方法的精密度实验

取适量3.1的标准溶液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，进行HPLC检测，平行测定9次，方法的标准偏差为0.082 0 mg/mL，变异系数为3.948%.

3.8 最低检出限的测定

取适量3.1的标准溶液逐级稀释，经0.45 μm微孔滤膜过滤，测定响应值为基线噪音二倍时峰面积，己酸乙酯的最低检出限小于0.359 0 mg/mL.

3.9 回收率实验

取适量的酒样，加入不同体积的标准溶液，用流动相定容至10 mL，进行HPLC分析，计算该方法的回收率，见表3.

表3 回收率实验

4 结果与讨论

固相萃取法提取4种常见白酒的香气成分，用气相色谱-质谱联用分析相对百分含量.结果表明香气成分中主要含有酯类化合物和酸类化合物.其中4种白酒中均含有酯类化合物己酸乙酯，其相对百分含量分别为:河套老窖59.23%、水井坊51.82%、老龙口68.05%、五粮液60.87%.4种白酒香气成分中己酸乙酯相对百分含量由大到小的顺序为老龙口、五粮液、河套老窖、水井坊.

采用HPLC法定量分析4种常见白酒中己酸乙酯的含量，结果为河套老窖0.356 5 mg/mL、水井坊0.353 8 mg/mL、老龙口0.618 2 mg/mL、五粮液 0.456 4 mg/mL.4种白酒中己酸乙酯含量由高到低的顺序为老龙口、五粮液、河套老窖、水井坊.

比较用固相萃取提取、气相色谱-质谱联用测定4种常见白酒的香气成分得到的己酸乙酯相对百分含量与用HPLC法定量分析得到的己酸乙酯含量趋势相一致.

4种常见白酒中均含有己酸乙酯，己酸乙酯的含量高低决定着白酒的风味特征.己酸乙酯的含量与原料、曲的种类、发酵工艺、窖池结构、发酵时间、生产环境和贮存时间等有关.