益心酮片HPLC指纹图谱的构建*

徐宝欣，杜义龙，潘海峰，李艳荣

（承德医学院中药研究所/河北省中药研究与开发重点实验室，河北承德 067000）

益心酮片HPLC指纹图谱的构建*

徐宝欣，杜义龙，潘海峰，李艳荣△

（承德医学院中药研究所/河北省中药研究与开发重点实验室，河北承德 067000）

目的:构建益心酮片的HPLC指纹图谱。方法：采用HPLC法建立13批益心酮片的指纹图谱。色谱条件：ZORBAX SB-C18色谱柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相为A：0.1%甲酸-水混合溶液、B：乙腈、C：四氢呋喃，梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长350nm，柱温30℃，进样量10μl。使用中药指纹图谱相似度评价软件（版本2004 A）进行相似度分析。结果：根据13批益心酮片的指纹图谱检测结果，共标定出10个共有峰，13批益心酮片的相似度均大于0.99。结论：该方法操作简单、可靠，重复性强，结果比较稳定，适用于益心酮片的质量评价。

益心酮片；高效液相色谱；指纹图谱

益心酮片收载于2015年版《中国药典》一部，是以山楂叶提取物为原料制成的成方制剂，具有活血化瘀、宣通血脉的功效。在质量控制方面，现行药典采用HPLC法控制益心酮片中牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的总量[1]，文献[2-5]也多集中在含量测定方面。基于中药成份的复杂性，仅控制一个或几个成分的含量难以全面表征其质量。目前，中药指纹图谱作为一种被广泛认可的中药质量评价及控制模式，能够比较全面地反映中药中所含化学成分的种类与数量[6-8]。为了更好更全面地控制益心酮片的质量，保证临床疗效，本文建立了益心酮片的指纹图谱，以期为有效控制和科学评价其质量提供简便、准确可行的方法。

1 仪器与试药

仪器：Agilent1200 Series高效液相色谱仪，色谱工作站Agilent Chemstation(美国安捷伦公司)；十万分之一电子分析天平（型号：AG-245）；高速离心机（型号：HC-2062）；超声波清洗器（型号：KQ-700）。

试剂：乙腈、甲醇为色谱纯（Fisher Scientific，USA），四氢呋喃为色谱纯（Mreda Technology Inc，USA）；其他试剂均为分析纯。

对照品：绿原酸(批号110753-200413)、牡荆素(批号111687-200602)、牡荆素鼠李糖苷(批号111668-200602)、芦丁(批号100080-200707)、金丝桃苷(批号111521-201004)，均购于中国药品生物制品检定所；牡荆素葡萄糖苷（批号为A0513），购自成都曼思特生物科技有限公司。以上对照品均供含量测定用。

益心酮片：益心酮片共13批。S001-S004，山西省恒山中药有限责任公司（批号：130201、130301、130401、131101）；S005-S007，山西振东泰盛制药有限公司（批号：1301251、1303291、1310272）；S008-S009，海南天煌制药有限公司（批号：130202、130703、131106）；S010-S011，山西昂生药业有限责任公司（批号：130601、130701）；S012-S013，湖南方胜制药股份有限公司（批号：131101、140301）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（5μm，4.6mm×250mm），流动相：A：0.1%甲酸-水混合溶液、B：乙腈、C：四氢呋喃，梯度洗脱：t（min）：0-20-30-40-50，A（90%-84%-84%-78%-74%）、B（8%-14%-14%-20%-24%）、C（2%-2%-2%-2%-2%）；检测波长为350nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，进样量10μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的配制：分别精密称定各对照品适量，加色谱甲醇，溶解，得到每1ml含0.30mg牡荆素、1.00mg牡荆素鼠李糖苷、0.08mg芦丁、0.40mg绿原酸、0.30mg金丝桃苷和0.80mg牡荆素葡萄糖苷的混合对照品溶液，备用。

2.2.2 供试品溶液的配制：取益心酮片研细（过五号筛），精密称定0.3g，置25ml容量瓶，先加15ml的70%甲醇溶解后，再加至刻度，精密称定总重量，超声处理20min，放至室温，用70%甲醇补充减失的重量，滤过，取续滤液离心10min（12000r/min），用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.3 益心酮片指纹图谱的建立与分析

2.3.1 方法学考察：

⑴精密度试验：取S001批益心酮片细粉制得供试品溶液（按2.2.2项下方法制得），设置色谱条件（2.1项），连续6次进样。结果测得共有峰相对峰面积的RSD均小于1.7%，相对保留时间的RSD均小于1.4%，表明该实验有良好的精密度。

⑵重复性试验：平行制备6份益心酮片细粉（S001）供试品溶液（按2.2.2项下方法制备），按2.1项色谱条件测定，计算各共有峰的相对峰面积及相对保留时间并进行分析。结果相对峰面积的RSD均小于2.0%，相对保留时间的RSD均小于1.3%，表明该实验具有良好的重复性。

⑶稳定性试验：取S001批益心酮片细粉制得供试品溶液（按2.2.2项下方法制备），设置色谱条件（见2.1项色谱条件），进样时间分别为0h、2h、4h、8h、12h、24h，分析各峰的相对峰面积及相对保留时间。结果相对峰面积的RSD均小于2.3%，相对保留时间的RSD均小于1.5%，结果表明样品在24h内具有良好的稳定性。

2.3.2 益心酮片指纹图谱的确定：13批益心酮片按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下方法设置色谱条件，分别进样，记录各色谱图。使用中药指纹图谱相似度评价系统（版本2004 A）进行相似度处理，设定S001批图谱为参照图谱，将其它样品的色谱峰与参照图谱自动进行匹配，对照图谱按中位数法生成并进行处理，建立益心酮片的指纹图谱叠加图。见图1：

图1 益心酮片指纹图谱叠加图

2.3.3 共有峰的标定：根据13批益心酮片指纹图谱的检测结果，通过相似度评价软件，共标出10个共有峰(图2)。图2中3号峰(牡荆素葡萄糖苷)分离度较好，峰面积也比较稳定，故选择此峰作为参照峰。经与对照品比对，共对比出6个化合物。

图2 益心酮片对照指纹图谱

2.3.4 益心酮片指纹图谱相似度评价：对13批益心酮片的液相数据进行处理，并和对照品指纹图谱进行匹配，13批益心酮片的相似度分别为：0.999、0.999、0.998、0.997、0.998、0.997、0.993、0.997、0.995、0.995、0.997、0.999和0.996。

3 讨论

本研究采用常规HPLC法建立了益心酮片指纹图谱，为了使指纹图谱提供更多的信息，前期对色谱条件进行了优化（色谱柱、流动相、检测波长等）。结果显示，本研究中所使用的色谱条件使得各色谱峰均有较好的分离效果，且峰个数多，能够用于实验研究。

本研究建立了13批不同厂家益心酮片的指纹图谱，采用指纹图谱软件共标定出10个共有峰，通过与对照品比对对比出6个化合物，相似度均大于0.9，说明所建立的指纹图谱具有较好的稳定性和可控性，能为益心酮片的质量评价提供依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.1402.

[2]于淼，原源.HPLC法测定益心酮片中四种黄酮类成分的含量[J].东南国防医药，2015，1（72）：157-159，165.

[3]杨明宇，王领弟，杜义龙，等.高效液相色谱法测定不同厂家益心酮片中6种成分的含量[J].承德医学院学报，2016，33(4)：273-275.

[4]赵彩云，王强.HPLC法测定益心酮片中五种成分的含量[J].中国药品标准，2011，12(2)：113-116.

[5]邹平，刘桂平，刘辉，等.益心酮口腔崩解片的制备和质量控制[J].中国药师，2013，16(4)：562-564.

[6]张婷，郑夺，王文彤，等.指纹图谱结合一测多评模式在参芎养心颗粒质量评价中的应用研究[J].中草药，2015，46(13)：1920-1925.

[7]邵建强.中药指纹图谱的研究进展[J].中草药，2009，40(6)：994-998.

[8]周建良，齐炼文，李萍.色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用[J].色谱，2008，26(2)：153-159.

CONSTRUCTION OF HPLC FINGERPRINT OF YIXINTONG TABLETS

XU Bao-xin, DU Yi-long, PAN Hai-feng, et al

(Institute of Chinese Materia Medica/Hebei Key Laboratory of Research and Exploitation of Traditional Chinese Medicine,Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To construct the HPLC fingerprint of Yixintong tablets. Methods:The HPLC was used to construct the fi ngerprint of 13 batches Yixintong tablets with the condition that the column was ZORBAX SB-C18column (5µm,4.6mm×250mm); the mobile phase was eluted with gradient by 0.1% formic acid-water, acetonitrile and tetrahydrofuran; the fl ow rate was 1.0ml/min; the detection wavelength was 350nm; the column temperature was 30℃; the sample volume was 10μl. The similarity evaluation software (2004A version) was used for similarity analysis.Results:The HPLC fingerprints of 13 batches Yixintong tablets calibrated 10 common peaks, and the similarity were all higher than 0.99.Conclusions:The method is simple, stable and feasible, and can be used to evaluate the quality of Yixintong tablets.

Yixintong tablets; HPLC; Fingerprint

R917

A

1004-6879（2018）01-0006-03

* 河北省高等学校科学技术研究重点项目（ZD2015097），河北省中医药管理局项目（2014063），河北省高校重点学科建设项目资助

△ 通讯作者

2017-04-28）