糖尿病视网膜病变患者血浆中miR-21、miR-93的水平变化及临床意义

李雷，唐平

(海南医学院第一附属医院,海口570102)

糖尿病视网膜病变属于糖尿病患者最常见的并发症之一，其主要发病机制为糖尿病损害视网膜上的毛细血管，从而使得周围组织水肿、出血，甚至毛细血管阻塞，进一步导致视网膜缺血、缺氧，促进新的增殖物产生，导致视网膜病变[1]。有研究报道证实，随着糖尿病患者病程增加，视网膜病变的发生风险越高[2]。因此，对糖尿病视网膜病变患者进行早期有效的诊断和治疗显得尤为重要。随着近年相关研究的深入，越来越多的学者发现微小核糖核酸(miRNA)参与了细胞的增殖、分化以及凋亡等过程，且miR-21与miR-93在眼部疾病中的表达明显异常，可能成为眼部疾病诊断、治疗的新靶点[3]。鉴于此，本文探讨了糖尿病视网膜病变患者血浆中miR-21、miR-93的水平变化并分析了其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2016年2月～2018年2月海南医学院第一附属医院收治的糖尿病视网膜病变患者109例(视网膜病变组)。其中男61例、女48例，年龄32～78(57.32±10.52)岁。另取本院收治的单纯糖尿病患者100例(单纯糖尿病组)，其中男57例、女43例，年龄31～80(57.40±10.47)岁。再取同期于本院进行体检的健康人员100例作为对照组，其中男54例、女46例，年龄30～77(57.27±10.38)岁。三组性别、年龄比较，P均>0.05。纳入标准[4]：糖尿病患者均符合1999年世界卫生组织糖尿病专家委员会提出的相关诊断标准；糖尿病视网膜病变患者均符合临床眼科影像学诊断标准；年龄>20岁；临床病历资料完整；入院前均未接受相关治疗。排除标准：合并心、肝、肾等脏器功能严重障碍者；伴有急慢性感染性疾病、恶性肿瘤以及心脑血管疾病者；存在精神疾病或交流沟通障碍者。三组患者及其家属均签署知情同意书，本院伦理委员会已批准。

1.2 观察指标及其检测方法 三组入院后均采集清晨空腹静脉血10 mL，以3 000 r/min离心10 min，分别取血清与血浆保存于-80 ℃冰箱中待检。常规生化指标的检测：血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平：采用日立7060全自动生化分析仪测定；空腹血糖(FPG)水平：采用葡萄糖氧化酶法检测；血浆糖化血红蛋白(HbA1c)：采用高效液相色谱法测定；血浆内酯素、抵抗素以及瘦素水平：采用脂肪因子免疫酶联吸附法测定，具体操作严格按照试剂盒说明书进行，相关试剂盒均购自日本SHINO-TEST公司。血浆miR-21、miR-93水平的检测：采用德国Qiagen公司的miRNeasy血浆提取试剂盒提取血浆总miRNA。采用ABI 7500型荧光定量PCR仪进行实时荧光定量PCR反应，内参为U6，miRNA逆转录反应体系包括RNA模板5 μL，U6 3 μL，miRNA特异性茎环引物3 μL，100 mmol/L的脱氧核糖核苷酸0.15 μL，逆转录酶1 μL，RNase抑制剂0.19 μL，无菌三蒸水4.16 μL。反应条件如下：16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min，保存于4 ℃中进行逆转录反应。以U6为内参，扩增条件如下：95 ℃ 10 min ，95 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s共40个循环。实验重复3次，根据公式2-ΔΔCt计算miRNA相对表达水平。

2 结果

2.1 三组各项临床生化指标水平对比 视网膜病变组FPG、HbA1c、抵抗素、瘦素水平均高于单纯糖尿病组与对照组，而内酯素水平均低于单纯糖尿病组与对照组；且单纯糖尿病组FPG、HbA1c水平均高于对照组(P均<0.05)，见表1。

表1 三组各项临床生化指标水平对比

注：与对照组相比，#P<0.05；与单纯糖尿病组相比，*P<0.05。

2.2 三组血浆miR-21、miR-93表达水平比较 视网膜病变组血浆miR-21与miR-93表达水平均高于单纯糖尿病组与对照组(P均<0.05)，见表2。

表2 三组血浆miR-21与miR-93表达水平比较

注：与对照组相比，#P<0.05；与单纯糖尿病组相比，*P<0.05。

2.3 糖尿病视网膜病变患者血浆miR-21、miR-93与各生化指标的相关性分析 Preason相关性分析结果显示，糖尿病视网膜病变患者血浆miR-21、miR-93分别与FPG、HbA1c、抵抗素、瘦素呈正相关(r分别为0.503、0.625、0.679、0.636，0.485、0.613、0.684、0.627；P均<0.05)，而与内酯素均呈负相关(r分别为-0.608、-0.583，P均<0.05)。

2.4 糖尿病视网膜病变发生的多因素分析 多因素Logistic回归分析结果显示，血浆FPG、HbA1c、抵抗素、瘦素及miR-21、miR-93均是糖尿病视网膜病变的独立危险因素，而内酯素为保护性因素(P均<0.05)。见表3。

表3 糖尿病视网膜病变发生的多因素Logistic回归分析

3 讨论

糖尿病视网膜病变属于糖尿病严重并发症之一，该病会对患者的视功能造成一定程度的损害，从而导致视物模糊不清、甚至突然视物不见等多种临床症状，对患者的生活质量造成了严重影响[5，6]。因此，早期有效的监测以及治疗显得尤为重要。miRNA属于内源性非编码单链RNA分子，在视网膜组织中的表达具有特异性[7，8]。有研究报道显示，miRNA可能是通过诱导细胞分化、调节炎症反应等机制参与糖尿病视网膜病变的发生、发展过程[9，10]。

本研究结果发现，视网膜病变组FPG、HbA1c、抵抗素、瘦素水平均高于单纯糖尿病组与对照组，而内酯素水平均低于单纯糖尿病组与对照组；且单纯糖尿病组FPG、HbA1c水平均高于对照组，提示视网膜病变患者FPG、HbA1c、抵抗素、瘦素水平存在明显高表达，而内酯素水平存在明显低表达。内酯素在机体内属于血清调节因子，在糖脂代谢与炎症反应以及免疫应答过程中起着重要作用，其水平的不足会导致机体血糖调节异常，对眼部微血管具有较大的损害作用，并可进一步加重患者的病情以及视网膜病变程度[11]。抵抗素属于炎症细胞因子之一，具有促进炎症介质释放以及调节血管功能的作用，其含量增多会增加血管通透性，从而增加了水肿、蛋白尿以及脏器损伤的发生风险，最终加重糖尿病所致眼部微血管病变损伤[12]。瘦素则可对血管生成以及血小板凝聚造成影响，同时具有较强的血管收缩效应，可导致视网膜血管压力升高，进一步引发视网膜毛细血管内皮受损，最终导致视网膜病变发生[13]。此外，本研究结果显示，视网膜病变组血浆miR-21与miR-93表达水平均高于单纯糖尿病组与对照组，提示视网膜病变组患者机体的miR-21以及miR-93表达水平更高。符春艳等[14]研究显示，miR-21以及miR-93的表达可能在糖尿病视网膜病变的发生发展过程中起着至关重要的作用。有研究报道显示，多种miRNA表达水平在急性光诱导视网膜损伤小鼠中升高，其可能是通过增加糖尿病中细胞外基质纤维连接蛋白，进一步促进糖尿病视网膜病变的发生[15，16]。因此，miR-21与miR-93可能参与了糖尿病视网膜病变的进展。另外，多因素Logistic回归分析结果显示，FPG、HbA1c、抵抗素、瘦素与血浆miR-21、miR-93均是糖尿病视网膜病的独立危险因素，而内酯素为保护性因素。提示上述因素均参与了糖尿病视网膜病变的发生，临床上可通过针对上述因素制定相关干预措施，从而有效降低糖尿病视网膜病变发生的风险。同时，经Pearson相关性分析可得，糖尿病视网膜病变患者血浆miR-21、miR-93与FPG、HbA1c、抵抗素、瘦素均呈正相关，而与内酯素均呈负相关。这也再次证实了糖尿病视网膜病变患者病情越重，血浆miR-21、miR-93表达水平越高，两者可能成为临床上判断糖尿病视网膜病变患者病情严重程度的有效指标。

综上所述，糖尿病视网膜病变患者血浆miR-21、miR-93均存在明显高表达，此二者可能参与了病情进展。临床工作中可通过对两项指标进行检测，从而早期诊断糖尿病视网膜病变。