江西某黑山羊养殖场布鲁菌病感染调查

张伟锋，唐慕德.2，伍 钢，郑路程，徐智亮，温宇婷，吴青青，刘 犇

(1.宜春学院生命科学与资源环境学院，湖北 宜春 336000；2.广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530004)

布鲁菌病(以下简称“布病”)不仅会对畜牧业的发展带来不利影响，而且对于人类的健康也存在着一定的安全隐患。每年我们都要消耗大量的动物性产品，因而在养殖场中控制、净化该病是十分重要的。本次进行调查的山羊养殖场是一个建场两年左右的新场，所饲养的山羊多从外地购进，未进行相关疾病的检测和疫苗的接种，进行此次布病的调查对于该场安全性的评估、日后免疫程序的设置以及相关疾病的防治提供一定的指导意见，同时也对于该场日后建成为无规定疫病的规范性合格性养殖场有一定的帮助。

1 材料与方法

1.1 血清样品 赣西某规模化黑山羊养殖场随机选取345只黑山羊进行颈静脉采血，采血管静置数分钟，3 000 r/min离心15 min后用移液枪将上层清亮液体吸出至灭菌EP管，并用记号笔写上对应羊的耳标号，4 ℃冰箱保存待检。

1.2 主要试剂 虎红平板凝集诊断专用抗原、布鲁菌诊断专用阳性血清和阴性血清(批号为201709)、试管凝集试验诊断抗原、标准阳性血清、标准阴性血清，以上试剂，均购自中国兽医药品监察所；灭菌蒸馏水、灭菌生理盐水和无水乙醇等由宜春学院肉牛(羊)疾病控制实验室提供。

1.3 检测方法 虎红平板法和试管凝集法参照国标进行检测，为保证虎红平板法检测的可靠度将检测为阳性的血清按此方法再检测一遍。试管凝集法检测对象为虎红平板法检测结果为阳性的血清，依据说明书上的评判标准进行结果的判读并记录，当待测血清的4号管出现“++”以上凝集现象时记检测结果为阳性，若3号管出现“++”以上凝集现象时应进行重复检测，若出现相同结果则判定为阳性。

2 结果

2.1 虎红平板凝集试验 将诊断抗原加入标准阳性血清和标准阴性血清4 min后，标准阳性血清出现明显肉眼可见的凝集小颗粒，而阴性血清未出现凝集颗粒，延长观察时间也未出现凝集反应；待检300余份血清中有的出现凝集现象和阳性对照相似。统计发现在345份血清中，第1次检测出155份阳性血清，为排除假阳性再对这155份阳性血清进行二次虎红平板凝集试验，二次检测出136份阳性血清，经过两次虎红平板凝集试验后，筛查出136份阳性血清，阳性率为39.4%，见表1。

表1 虎红平板凝集试验结果

2.2 试管凝集试验 采用试管凝集法对虎红平板凝集试验筛查出的136份阳性血清重新检测，阳性血清在试管底部可见有明显的白色沉淀上部液体清亮，阴性血清试管内部液体浑浊，静置后无沉淀物析出，检测结果发现有28份阴性血清。结合两次检测方法，最终检测血清数总计345份，其中阳性血清108份，阳性率31.3%，详见表2。

表2 试管凝集试验检测结果

3 讨论

临床上对于布病检测的方法目前有血清学技术如采用 ELISA方法检测蛋白Omp25[1]，采用分子生物学方法如PCR、RT-PCR等方法对布鲁菌Omp31、ClpX 等基因进行检测，虽然检测的灵敏度高但是由于其成本高技术难度较大，不适于临床和生产中大规模的使用[2-3]。虎红平板凝集试验是一种半定量的凝集反应试验，是一种经典的布病检测方法，此检测方法具有敏感度较高、能快速大批量进行检测和筛选工作、价格较为低廉、技术难度较低以及作用效果明显等优点，十分适用于临床和生产上大规模的检疫[4]，但同时也存在一些缺点，容易出现非特异性凝集而造成的假阳性，以及对检测时间把握不准使得在结果的判断上存在着一定的主观性。试管凝集试验其原理是试管凝集试验诊断抗原对IgM类抗体敏感性高，发生凝集反应[5]，相较于虎红平板凝集试验来说其发生非特异性凝集较低，准确度更高，但其操作繁琐耗时长，需要较长的时间才能得出结果。本试验采取平板法和试管法相结合对样品进行检测，先用虎红平板凝集试验(RPBT)对检测血样进行初步的筛选，再用试管凝集试验(SAT)对阳性血清进行二次检测，这样既能够在较短的时间内对大量样品进行检测，同时又可以保证检测结果的准确性。这两种方法的联合使用适用于临床实践大范围的检疫及流行病学调查。

本次试验从山羊养殖场随机抽取了345份血样，采用平板法和试管法相结合检出含有布鲁菌抗体的阳性血清108份，阳性率高达31.3%，通过对相关饲养人员的询问得知该场成立至今还未进行相关疫苗的接种工作，表明该场所饲养的黑山羊存在着较为严重的布鲁菌感染的情况。笔者分析该养殖场布病感染率高的原因主要有以下几点：(1)羊场饲养的黑山羊来源复杂，该场羊只主要是从周边县市或者外地收购，没有做到自繁自养，这样有利于疫病的传播；(2)外购的羊只未进行布病等相关疾病的检疫与隔离观察，就和原厂所饲养的羊只混养，同时该场自建场以来还没有进行相关疫病的检测和疫苗的接种，这很可能导致一些易感动物和健康动物被感染；(3)羊圈的卫生条件较差，虽然有漏粪板但是粪便未及时清理，极易滋生细菌；(4)该场生产管理方式有待改善，饲养员的防疫意识不强，存在串栏现象，各栋羊舍没有单独的消毒池。

通过这次检测发现，该场存在较为严重的布鲁菌感染，建议及早对全场羊只进行布病及其他疫病的检测，按相关规定无害化处理感染羊，对检测阴性的羊单独饲养并进行疫苗的接种；定期进行检测和接种后抗体水平的监测，对于检测出阳性者要及时淘汰，对于抗体水平低的要及时补种，采取综合防治措施做到彻底净化该病；坚持自繁自养，外地引种时一定要做好隔离观察与检测工作，未携带特定病原体方可混养；改善优化管理措施，通过采取培训等方法提升饲养员的相关专业知识和防范意识，定期对场区进行消毒工作，搞好卫生环境。