CD117在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

韩 志，申 晟，秦晓飞，王庆丰

(河南省洛阳正骨医院脊柱科 河南省骨科医院，河南 洛阳 471002)

骨肉瘤是最常见的非造血性原发性恶性骨肿瘤，好发于青少年，25岁以下患者居多[1]。骨肉瘤恶性程度高，多数患者确诊时已出现肺部转移，预后差。单纯手术治疗患者的5 a生存率仅10%～20%，手术联合术前、术后化学治疗患者的5 a生存率可达到50%[2-3]，但仍有很大一部分患者由于耐药等原因治疗效果差。CD117是由人类原癌基因c-KIT编码的一种跨膜酪氨酸激酶受体，属于免疫球蛋白超家族成员。c-KIT基因调节多种生物反应，包括细胞趋化性、细胞增殖、细胞凋亡和黏附。CD117在多种恶性肿瘤中异常表达，与多种肿瘤的发生和发展密切相关[4-6]。本研究通过观察CD117在骨肉瘤组织中的表达，并分析CD117表达与骨肉瘤临床病理特征的关系，探讨CD117在骨肉瘤发生和发展中的作用，旨在为骨肉瘤的治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料2009年1月至2016年12月洛阳正骨医院收治骨肉瘤患者45例，男27例，女18例；年龄10～64(26.1±13.2)岁；病程15 d至18个月，平均(7.2±4.3)个月；有肺部转移灶10例，无肺部转移灶35例；TNM分期：Ⅰ期7例，Ⅱ～Ⅲ期28例，Ⅳ期10例；低级别骨肉瘤7例(髓内高分化骨肉瘤5例，皮质旁骨肉瘤2例)，高级别骨肉瘤(普通型骨肉瘤)38例。所有患者经术前穿刺病理检查确诊为骨肉瘤，且未行放射治疗、化学治疗及其他药物治疗，并排除并发有其他恶性肿瘤及严重疾病者。选取骨肉瘤组织及肿瘤周围正常骨组织石蜡包埋标本各45例。

1.2试剂与仪器兔抗人单克隆抗体CD117、Envision法检测试剂盒、磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)、抗原修复液、二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)显色液及过氧化物酶阻断剂(福州迈新生物技术开发有限公司)，EC350石蜡包埋机、HM360切片机(德国Microm公司)，BX41光学显微镜(日本Olympus公司)。

1.3免疫组织化学法检测骨肉瘤组织及正常骨组织中CD117的表达取石蜡标本，连续切片，厚度约4 μm，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水；浸入 30 g·L-1过氧化氢溶液中，37 ℃孵育10 min，阻断内源性过氧化物酶；PBS冲洗3次，每次5 min；置于乙二胺四乙酸溶液中，微波加热至98 ℃持续 15 min，冷却后PBS冲洗3次，每次5 min；加入山羊血清，室温下孵育10 min；滴加一抗，4 ℃过夜孵育，PBS冲洗3次，每次5 min；滴加二抗，室温下孵育 30 min；PBS冲洗3次，每次5 min；二氨基联苯胺染色，自来水冲洗，苏木精复染，脱水、透明、中性树脂封片；以PBS替代一抗作为阴性对照，光学显微镜下观察。

1.4结果判断CD117主要表达于细胞膜和细胞质，呈淡黄色至棕褐色。结果判读采用染色强度结合阳性细胞百分比进行综合评分。染色强度评分标准：无着色记0分，弱着色记1分，即阳性染色在200倍或400倍视野下可见，但在100倍或40倍视野下不能清晰可见；中度着色记2分，即阳性染色在100倍视野下清晰可见；强着色记3分，即阳性染色在40倍视野下清晰可见。阳性细胞百分比评分标准：阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。以2项得分的乘积对结果进行判定：0分为不表达，1～2分为弱表达，3～6分为中度表达，7～9分为强表达。将不表达和弱表达定义为阴性，中度表达和强表达定义为阳性。

1.5统计学处理应用SPSS 22.0软件进行数据统计分析。计数资料以百分率表示，差异性比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1骨肉瘤组织及正常骨组织中CD117的表达结果见图1。骨肉瘤组织和正常骨组织中CD117阳性表达率分别为53.3%(24/45)、0.0%(0/45)，骨肉瘤组织中CD117阳性表达率显著高于正常骨组织，差异有统计学意义(χ2=32.727，P<0.05)。

A：骨肉瘤组织；B：正常骨组织。

2.2CD117表达与骨肉瘤患者临床病理特征的关系结果见表1。骨肉瘤组织中CD117表达与患者的年龄、性别及肿瘤直径无相关性(P>0.05)，而与肿瘤组织学类型、肿瘤转移及TNM分期有相关性(P<0.05)。

表1 CD117表达与骨肉瘤患者临床病理特征的关系

3 讨论

C-KIT基因突变是肿瘤生长和进展的一部分，c-KIT基因表达异常可刺激肿瘤细胞的持续增殖和抗凋亡信号失控，有利于肿瘤的恶性增殖，并与肿瘤进展密切相关[7-8]。

研究显示，CD117参与多种肿瘤的发生和发展，在多种肿瘤中存在异常表达，其表达对恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌患者的预后有重要的预测价值[4-6]。YANG等[9]通过研究发现，CD117过表达与卵巢上皮癌的进展相关，可作为卵巢上皮癌患者预后不良的预测因子。CD117在胃肠道间质瘤、肝癌等的发生、发展中亦发挥重要作用，且针对CD117的靶向治疗取得了显著的效果[6，10-11]。甲磺酸伊马替尼是酪氨酸激酶受体的特异性抑制剂，可通过阻断酪氨酸激酶受体通路，抑制肿瘤细胞的增殖、分化，从而促进肿瘤细胞凋亡，目前已应用于临床[12-14]。

本研究结果显示，正常骨组织中未见CD117阳性表达，骨肉瘤组织中CD117阳性表达率为53.3%，低于WEI等[15]报道的阳性表达率(62.5%)，但略高于林金銮等[16]报道的阳性表达率(49.1%)；提示骨肉瘤组织中CD117表达上调。本研究结果显示，骨肉瘤组织中CD117表达与肿瘤组织学类型、肿瘤转移及TNM分期有相关性，CD117在高级别骨肉瘤组织中的阳性表达率显著高于低级别骨肉瘤组织，TNM分期Ⅱ～Ⅲ期、Ⅳ期骨肉瘤组织中CD117阳性表达率显著高于TNM分期Ⅰ期患者，有肿瘤转移患者骨肉瘤组织中CD117阳性表达率显著高于无转移者；表明CD117参与了骨肉瘤肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等过程，CD117表达可以作为骨肉瘤恶性程度的判断指标。

综上所述，CD117在骨肉瘤组织中表达上调，且与肿瘤组织分化程度、肿瘤转移及TNM分期有相关性，CD117可以作为骨肉瘤恶性程度的判断指标，对深入研究酪氨酸激酶抑制剂在骨肉瘤靶向治疗中的应用有重要参考价值。