尼莫地平磷脂/胆盐复合胶束的制备

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(1 济南大学 山东省医学科学院 医学与生命科学学院，山东 济南 250200；2 山东省医学科学院药物研究所)

磷脂/胆盐混合胶束体系中的胆酸盐在制剂学中常用作促透剂[1-3]，可增加肠壁通透性，提高药物的跨膜能力；磷脂作为药物载体，在体内易降解，无毒性和免疫原性，且其与生物膜结构一致，可增加药物的附着力，从而促进药物吸收[4-5]。故其作为新型的给药系统为改善药物的生物利用度和溶解度提供了有效的途径[6]。近年来，尼莫地平为治疗高血压的首选药物，但其溶解度差，生物利用度低，严重限制了其临床应用与研发[7]。为此，研究者们采取多种科学试验，其中磷脂/胆盐混合胶束体系具有显著的成效。此实验主要通过高效液相色谱法(High performance liquid chromatography，HPLC)考察尼莫地平磷脂/胆盐混合胶束在不同情况下的包封率，以便筛选出最佳制备工艺。

1 仪器与试药

1.1仪器 UltiMate 3000型高效液相色谱系统，Chromeleon 7色谱工作站[赛黙飞世尔科技(中国)有限公司]；SQP电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；VORTEX-5漩涡混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；KQ3200DE数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；D3024R台式高速(冷冻型)微量离心机[大龙兴创实验仪器(北京)有限公司]。

1.2试药 脱氧胆酸钠、尼莫地平(>98.5%，大连美仑生物技术有限公司)；蛋黄卵磷脂(德国Lipoid GmbH公司)；无水乙醇(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)；氯化钠注射液(0.9%，山东华鲁制药有限公司)；乙腈、甲醇(色谱纯，美国赛默飞世尔公司)；水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1含量测定方法

2.1.1色谱条件 色谱柱：Hypersil GOLD (4.6 mm×150 mm, 5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-水(30∶30∶40)；流速：1.0 mL/min；检测波长：238 nm；柱温：27 ℃；进样量：10 L。在选定的色谱条件下，空白胶束对测定无干扰，尼莫地平的保留时间为8.04 min。尼莫地平特征色谱图见9。

2.1.2标准曲线的制备 精密称取尼莫地平对照品适量，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，配制成为1.0 mg/mL的尼莫地平工作储备液。再依次稀释成750、500、250、100 g/mL的标准溶液，按照2.1.1色谱条件进样测定，记录5个浓度标准溶液对应色谱峰的峰面积。以浓度X(g/mL)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线(见图2)，得线性回归方程：

Y=0.3065X+1.5465，r=0.9999

A.空白胶束

B.标准溶液

C.含药胶束图1 典型特征图谱

图2 尼莫地平标准曲线

2.1.3精密度 取500 g/mL的尼莫地平标准溶液按照2.1.1色谱条件分别进样6次，记录色谱图，计算精密度为：RSD=0.55%。

2.1.4重复性 取同一体系下制备的尼莫地平磷脂/胆盐复合胶束6份，按照2.1.1色谱条件连续进样，记录色谱图，计算重复性为RSD=0.60%。

2.2混合胶束的制备 采用共沉淀法制备混合胶束，操作方法：精密称取尼莫地平原料药50 mg，按比例加入胆盐、磷脂，用无水乙醇溶解，在一定温度下旋转蒸发除去有机溶剂，加入生理盐水溶解，定容至50 mL，采用0.22 m的微孔滤膜过滤，即得药物的混合胶束溶液。

2.3胶束制备工艺优选 按L9(34)正交表安排试验，以所得混合胶束中尼莫地平的包封率为指标，考察磷脂与胆盐的质量比(A)、辅料总量(B)和超声时间(C)3个因素不同水平对制备工艺的影响，按2.2项下方法制备尼莫地平混合胶束，测定尼莫地平的包封率，优选最佳制备工艺。因素水平安排及结果分布见表1和表2。极差分析表明，因素A、B、C对尼莫地平混合胶束增溶效果影响的先后顺序是B>A>C，最佳制备工艺为A1、B3、C1。

表1 尼莫地平混合胶束制备的因素水平

表2 尼莫地平混合胶束正交试验结果

3 讨论

尼莫地平具有很好的降压作用，但由于水溶相差，临床应用受到限制。胆盐和磷脂分别为阴离子和两性表面活性剂，二者在水中能相互结合形成核壳结构的胶束[8]。将难溶性药物包裹在胆盐/磷脂混合胶束的疏水核中，可提高药物在水性环境中的溶解度、稳定性和在机体中的生物利用度[9]。

预试验中考察了单用胆盐或卵磷脂对尼莫地平的影响，其中二者对尼莫地平的HPLC测定无影响，单用胆盐增溶效果不佳，单用卵磷脂虽有一定的增溶效果，但胶束溶液不够澄清。以上研究结果表明，在制备尼莫地平混合胶束的过程中，影响混合胶束增溶能力的因素主要有胆盐和磷脂的比例、辅料总量、超声时间等，胆盐/磷脂混合胶束的应用极大地改善了尼莫地平在水溶液中的溶解度。正交试验极差分析的结果确定尼莫地平混合胶束的最佳制备工艺为A1、B3、C1 ，此组合不在所做的9个试验中，但是这表明优化结果不仅反映了试验信息，而且反映了全面试验信息。磷脂和胆盐按照一定的比例混合后不但增溶效果增强，且胶束溶液澄清透明度好，为使增溶后的尼莫地平可广泛应用，故采用胆盐/磷脂混合胶束作为增溶手段。

通常难溶性药物成分的纯度越高，其溶解度越低[10]。此次试验使用的尼莫地平纯度大于98.5%，测得其溶解度极低。在正交试验中，所有的混合胶束中尼莫地平的溶解度都比原料药高，说明胆盐/磷脂混合胶束可显著提高尼莫地平的溶解度。

本试验采用HPLC技术建立了尼莫地平的含量测定方法，并采用混合胶束制备技术提高了尼莫地平在水中的溶解度。在今后试验中，若能证明混合胶束可以提高尼莫地平的生物利用度，则可为其进一步开发成口服制剂奠定基础；若能证明混合胶束可以减轻尼莫地平静脉注射时的不良反应，则亦可用于注射剂的改良。本研究对于尼莫地平应用的安全性和有效性具有重要意义。