微生物检验技术临床应用现状调查分析

谢 春，杨 颖，杨大干，王翠玲，胡 野

(1.商丘医学高等专科学校，河南 商丘 476100；2.浙江大学医学院附属第一医院，浙江 杭州 310003； 3.泉州医学高等专科学校，福建 泉州 362000；4.全国卫生职教行指委检验专业分委会，浙江 金华 321017)

微生物学检验课程是医学检验技术专业的核心课程，有较强的实践性、操作性与综合性。随着微生物检验技术不断更新和发展，新的知识和实验技术不断在临床中运用，旧的知识和技术逐渐淘汰。为使教学内容更贴近临床，解决课堂教学与临床工作脱节等问题。我们对临床检验科开展的微生物学检验项目进行调查分析，找出课堂教学与临床岗位的差距，为今后修(制)订微生物学检验课程教学标准、教学计划及调整教学内容、创新教学方法提供科学依据，使教育教学更贴近临床岗位工作实际，有利于培养出实践能力强、综合素质高的应用型医学检验技术人才。

一、调查对象、方法与内容

(一)调查对象。

采取抽样调查的方法，根据卫生部医院分级分类标准，从北京、上海、河南等10个省市地区的医院，随机抽取53家(三级医院26家，二级医院27家)医院检验科开展项目进行了问卷调查。

(二)调查方法。

根据高职高专医学检验专业《微生物学检验》教材中涉及的专业知识和技术，结合国家卫计委印发的《医疗机构临床检验项目》目录中与微生物有关的检测项目设计成调查表。把涉及的知识和技术，按照实际工作中应用的频率，分成四个等级，即：常用：每周用到的；少用：每月用到的；偶用：每半年用到1- 2次的；基本不用。其次，检测方法按照手工、半自动仪器和全自动仪器检测三类进行调查。

(三)调查内容。

通过全面地梳理与讨论，归纳为常见致病性细菌常用试验方法81项，细菌的培养和鉴定21项、药敏试验22项，真菌检测20项、其他微生物检测及病毒培养鉴定12项、分子生物学方法检测73项、免疫学方法检测129项，七个方面358项进行问卷调查。

二、调查结果

(一)50%以上医院微生物检测常用项目开展情况及检测方法。

1.细菌常规试验。三级医院开展的有革兰染色、金葡菌检测、氧化酶试验、抗酸染色、肺炎双球菌检测、淋病奈瑟菌检测、触酶试验、血浆凝固酶试验、KIA、硝酸盐还原试验、肥达反应、志贺菌血清学分型鉴定、MIU、脲酶试验、肺炎细菌检测、v- p试验、鸟氨酸脱羧酶试验、柠檬酸盐试验、精氨酸双水解酶试验、沙门菌血清学分型鉴定20项，全自动检测30.75%、半自动检测5.81%、手工操作63.44%；二级医院开展的有革兰染色、触酶试验、抗“O”试验、硝酸盐还原试验、金黄色葡萄球菌检测、O/F试验、v- p试验7项，全自动检测13.86%、半自动检测32.67%、手工操作53.47%。

2.细菌培养与鉴定。三级医院开展的有一般细菌培养、血液培养、菌落观察、菌落计数、肠道菌培养鉴定、淋病奈瑟菌培养、淋病奈瑟菌培养鉴定7项，全自动检测35.03%、半自动检测5.1%、手工操作59.87%；二级医院开展的有一般细菌培养、血液培养、菌落计数3项，全自动检测15.56%、半自动检测17.78%、手工操作66.67%。

3.细菌药敏试验。三级医院开展的有MRS药敏定性试验、普通细菌药敏定性定量试、β- 内酰胺类、碳青霉烯类、耐万古霉素肠球菌检测、大环内酯类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类药物耐药检测、耐万古霉素金黄色葡萄球菌检测、红霉素诱导克林霉素耐药D- 试验、淋病奈瑟菌药敏试验12项，全自动检测58.13%、半自动检测25.26%、手工操作16.61%；二级医院开展的有普通细菌药敏定性定量试验、碳青霉烯类、β- 内酰胺类、大环内酯类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类药敏试验6项，全自动检测18.18%、半自动检测62.34%、手工操作19.48%。

4.真菌检测。三级医院开展的有革兰染色、培养鉴定、直接涂片镜检、D- 葡聚糖检测、培养+鉴定+药敏、药敏定性定量试验、墨汁染色7项，全自动检测16.67%、半自动检测16.03%、手工操作67.31%；二级医院开展的有革兰染色、直接涂片镜检、不染色标本直接检查3项，手工操作100%。

5.四体及病毒检测。三级医院开展的有支原体药敏试验、支原体培养鉴定2项，全自动检测0.44%、半自动检测0.89%、手工操作86.67%；二级医院未开展。

6.分子生物学方法检测。三级医院开展的有HBV脱氧核糖核酸扩增定性与定量检测、HPV基因分型检测2项，全自动检测68.75%、半自动检测31.25%；二级医院未开展。

7.免疫学方法检测。三级医院开展的有HAV抗体、抗- HBc IgG、HCV抗体、HBV抗原、抗体定性和定量、CMV抗体、HIV抗体、风疹病毒抗体、HSV抗体、HEV抗体、快速血浆反应素试验、RSV抗原、抗体、抗- HBcIgM、ASO、EBV抗体测定15项，全自动检测45.85%、半自动检测9.30%、手工操作44.85%；二级医院有HIV抗体、HBV抗原、抗体定量和定性、抗- HBcIgG、HCV抗体、抗- HBcIgM、快速血浆反应素试验7项，全自动检测16.30%、半自动检测21.48%、手工操作62.22%。

(二)三种检测方法调查结果。

三种检测方法的调查结果具体如下(见附表)。

附表 三种检测方法调查结果

三、讨 论

调查中发现，细菌的革兰染色镜检、常用生化试验等；真菌直接涂片镜检、培养鉴定等；支原体培养鉴定等项目临床应用较多。其他特殊染色法、临床上不常见的病原微生物的鉴定及比较复杂繁琐、灵敏度不高的项目(如病毒的培养鉴定、动物试验等)临床应用较少。细菌培养鉴定中一般细菌培养、血液培养、菌落观察等较多，一些较难培养的细菌如艰难梭菌等几乎未开展。这些常用检测项目目前多以手工操作为主。在教学过程中可针对相应内容做适当调整，加强常用检测项目的基础知识学习及技能训练。

细菌药敏试验中，耐甲氧西林葡萄球菌药敏试验等项目应用较多，并逐步走向自动化，级别越高的医院应用自动化检测的项目越多。在教学中应结合致病菌在医院感染率中较高的实际，适当增加不断更新的试验方法、原理及耐药性研究的发展趋势等教学内容，加强细菌对抗菌药物敏感试验的教学，对于指导临床用药及耐药菌株的分析有重要的意义。重点讲解自动化检测仪器原理，可为学生今后更快的使用仪器，控制检验质量、分析检测结果等实际工作奠定基础。

分子生物学检测技术因对检测环境要求比较高，设备较昂贵，检测成本较高，目前在临床中的应用较少，主要项目是乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸扩增检测，人乳头瘤病毒基因分型检测，多为三级医院开展。免疫学检测技术在微生物诊断中的应用不断增多，肝炎病毒抗原抗体的检测等项目临床开展较多，临床不常见的疾病或传染性强的致病微生物临床开展较少。但随着技术的提高，医院条件的改善，免疫学检测技术、分子生物学检测技术将在病原菌诊断、鉴定和耐药基因检测方面越来越广泛地应用于临床。在教学中应注意将新知识、新技术的应用融入到微生物检查的内容中讲解。

不同级别医院开展检验项目、数量及方法差异大。从附表可知，三级医院开展项目数量平均为100.46(2612/26=100.46)，二级医院66.96(1808/27=66.96)。在检测方法应用上，全自动仪器检测：三级医院占33.77%，二级医院占12.83%；半自动仪器检测：三级医院占18.49%，二级医院占47.07%；手工检测：三级医院占59.26%，二级医院占63.55%。从开展项目上看，三级医院明显高于二级医院，在检测方法上，三级医院全自动检测也明显高于二级医院，手工检测中二级医院稍高于三级医院，两者存在很大的差异。高职高专医学检验专业学生毕业后多数是到基层医院，在教学过程中需注重手工检测和自动化检测相结合，前者学习在学校完成，后者可通过见习和实习完成，并且安排在级别高的医院检验科，让学生接触到更多、更先进的检测项目和检验方法，提高感性认识和检测能力，更快的适应工作岗位。

除此之外，实验室生物安全不仅对学校乃至对全社会的安全和稳定都非常重要，要遵循以人为本，预防在先、安全第一的基本原则[1]，在教学过程中要适当增加微生物安全防护知识，提高学生的安全防护意识[2]，确保检验人员的人身安全。在临床上对微生物进行检验分析时，有很多影响检验结果的因素[3]，加强实验室内质量控制能够确保微生物检验的真实性及准确性，对检验质量控制的内容重点讲解，可使在检验分析过程中，更加规范化，保证检测结果的可靠性与准确性。