河南口岸2例输入性登革热病例鉴定分析

王永亮 李 帅 高志华 张 勤

(河南出入境检验检疫局， 450003)

登革热是一种以急性发热为主要症状的蚊媒传染病，由登革病毒引起，该病毒为黄病毒属，单链RNA病毒。登革病毒(Dengue virus,DV)由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型血清型构成(Srikiatkhachornetal.，2011)，传播媒介为白纹伊蚊Aedesalbopictus和埃及伊蚊Aedesaegypti，传播方式为“人—蚊—人”，人群普遍易感。该病广泛流行于东南亚、中南美洲和非洲100多个国家及地区,是导致疫源地国家疾病负担最为严重的全球性公共卫生问题(Bhattetal.，2013)，引起了国际社会高度关注。河南境内存在白纹伊蚊，该省口岸入境国际航班中，90﹪来自东南亚登革热流行疫区，因此存在登革热传入风险。为实施口岸输入性疫情的精准防控，对2例入境发热归国人员的血清样本进行实验室实时荧光RT-PCR鉴定，结果如下。

1 材料与方法

1.1 病例溯源

病例1：贾某，男，29岁，河南省许昌市人， 2017年1月22日经由香港过境，最后在河南口岸入境，因发热接受检验检疫医学巡诊，体温检测发现，腋下温度39.2℃。询问和审核护照确认旅行史：染疫嫌疑贾某出境前健康检查未见异常，于2017年1月10日赴斯里兰卡做12日短期旅游。自述旅游期间无任何不适反应，承认有在观光旅游中被“花腿”蚊虫多次叮咬的事实。贾某于1月22日自斯里兰卡出境，经由香港转机在河南口岸入境，现场采取染疫嫌疑人血清样本，并于1月23日进行实验室鉴定。

病例2：史某，男，26岁，河南省商丘市人，为某旅行社领队，出境前无任何身体不适，于2017年12月8日带领旅行团赴泰国做6日短期旅游。于2017年12月13日结束旅游由泰国出境，在河南口岸入境。其本人有旅游经验知识，因自身发热、咽喉肿痛等不适感，主动向机场口岸检验检疫人员申报病史，自述景区旅游过程中多次被“花蚊子”叮咬。经医学巡诊，查体：腋温39.5℃，双侧扁桃体1度肿大，现场采取血清样本， 12月15日进行实验室鉴定。

对上述两例患者均进行后续医疗管理，追踪直至其疾病康复，无传染性为止。

1.2 鉴定方法

1.2.1主要试剂和仪器：病毒RNA/DNA提取试剂盒(天隆科技)，登革病毒Ⅱ型核酸检测试剂盒(上海之江生物)，Agilent Technologies Stratagene Mx3005P实时荧光定量PCR仪。

1.2.2核酸提取：按照病毒RNA/DNA提取试剂盒(天隆科技)中的说明书提取血清病毒RNA,-20℃冰箱保存。

1.2.3实时荧光RT-PCR： RT-PCR反应体系25 μL：包括登革热病毒Ⅱ型核酸检测试剂盒内的18 μL混合液、1 μL RT-PCR酶、1 μL内部对照品(对每个待测样本的基因扩增进行监控)，5 μL待测样本RNA；同时使用登革热病毒Ⅱ型核酸检测试剂盒内自带的阴对照品(监测整个实验是否有污染)、阳性对照品(监测试剂盒是否有效)各5 μL。反应程序如下：45℃×10 min；95℃×15 min；循环1次，95℃× 15 s，60℃× 60 s，循环40次。单点荧光检测在60℃。在阴性对照和阳性对照品成立的条件下，根据扩增曲线和Ct值进行结果判定。

2 结果

根据登革病毒Ⅱ型核酸测定试剂盒说明书实验结果判定阳性对照Ct≤35时，根据实验扩增曲线图可知1号阳性对照Ct值为17，2号阳性对照Ct值为15(证明检测试剂盒有效)；1号病例血清样本有典型的扩增曲线Ct值为19；2号病例血清样本有典型的扩增曲线Ct值为19(图1)，均判定为阳性。

图1 RT-PCR荧光定量检测Fig.1 RT-PCR fluorescence quantitative chart of cases1：1号阳性对照；2：2号病例核酸；3：2号阳性对照； 4： 1号病例核酸。1: Positive control of case 1; 2: DNA of case 2; 3: Positive control of case 2; 4: DNA of case 1.

3 讨论

登革热及其媒介伊蚊主要遍布于全球热带和亚热带地区，气候变暖、全球化、国际旅行、人居环境改变和病毒变异等，是导致全球登革热疫情不断扩张的主要因素(Lederetal., 2013)。现在，登革热已经流行于全球六大世界卫生组织区域，125个国家成为登革热地方性流行疫区(Bradyetal., 2014)。迄今为止，全球每年登革热的发病率估计波动在0.5～2.0亿之间，制图法评估发病率则接近4.0亿(Bradyetal., 2012)。

河南是内陆口岸，本地历史上没有登革热流行记载。2005年9月份，郝宗宇等(2006)报道，一起在新加坡留学的女性大学生归国后因发热被检出感染登革热。此后至2013年9月份，河南禹州发生首起输入性登革热暴发流行(王全新，2015)，确诊病例73人，杜燕华等(2015)进行病理溯源鉴定显示为：登革热病毒Ⅰ型WW2014病毒株，属于第Ⅴ基因亚型，与印度2008—2011年分离的病毒株亲缘关系最近，核酸同源性在98.2%～99.4%之间，未发生重组，推测可能此前已有印度登革热Ⅰ型毒株输入广东佛山，又输入河南境内。本次2例登革热患者均来自东南亚地区的斯里兰卡和泰国，进行短期旅游后归国，分别于2017年元月和12月份入境，实验室鉴定2例染疫者感染病毒均为Ⅱ型登革病毒，鉴于河南省从未发现Ⅱ型登革病毒，结合流行病学调查，确认均为输入性登革热病例，染疫地分别推测为斯里兰卡和泰国。

河南地处温带，存在登革热传播的重要蚊媒——白纹伊蚊(孙正，1982)，夏秋两季是白纹伊蚊活动的高峰期，加之河南口岸是出入境人员货物的重要内陆口岸，因此存在着输入性登革热传入的极大风险(Guzmanetal., 2010)。由此提示，检验检疫部门应加强输入性传染病疫情的预警监测(张亮等，2017)，对输入性传染病实施精准防控。