屈小轶 王扬伟* 乔宏兴 蒋增海 徐耀辉
(1河南牧业经济学院动物医学院,河南郑州 450046;2河南省猪病防控工程技术研究中心,河南郑州 450046)
猪增生性肠炎(Porcine proliferative enteritis,PPE)是由胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)引起猪的一种传染病,以回肠和结肠的黏膜出现根瘤样病变为特征,回肠、盲肠及结肠的高度增生变厚,主要感染生长育肥猪,临床表现为间歇性下痢、贫血、食欲下降和生长缓慢。自1931年被首次报道以来,PPE已呈世界性流行,可引发重大经济损失[1-8]。
2017年2—6 月,湖北省某规模化养猪场发生以间歇性腹泻、粪便变软变稀而呈糊状或水样、有时混有血液、病猪生长迟缓等症状为特征的猪传染病,经临床综合诊断和猪增生性肠炎FIRSTtest检测确诊为PPE。在加强消毒等综合防控措施的同时,用阿莫西林、泰妙菌素和泰乐菌素防治本病做对比试验,发现泰妙菌素和泰乐菌素对PPE起到很好的防治作用。现将具体诊治过程总结如下。
湖北省某年出栏量为7万头育肥猪的规模化养猪场,每到保育猪群中后期,都会有相当一部分猪只发生间歇性腹泻,粪便变软、变稀而呈糊状或水样,有时混有血液。见图1。病猪生长迟缓,病死率27%左右。病死猪回肠、结肠前部和盲肠肠管胀满变粗,肠黏膜增厚,有的呈脑回样,回肠腔内有血凝块。肠充血或出血,肠系膜水肿,肠系膜淋巴结肿大。根据流行病学、临床症状和病理变化初步诊断为PPE。
猪场存栏总量25 000头(其中母猪3 400头、不同日龄商品猪21 600头),随机采集100头猪的新鲜粪样(保育猪25头、育肥猪25头、后备母猪25头、妊娠母猪25头),每份样品3 g左右,在样品采集后短时间内检测,观察结果。
⑴收集样品:用无菌刮片收集1 g粪样装入玻璃试管,不超过1 mL刻度线;
图1 腹泻的粪便
⑵稀释样品:用移液管吸取5 mL缓冲稀释液加入收集管内,直到6 mL刻度线处,然后充分摇匀,放置在试管架上;
⑶样品沉淀:静置5 min,使样品分级沉淀;
⑷转移样品:用移液管吸取0.5 mL收集管上清液到分析试管中(每个样品都要使用不同的移液管),分析试管中含有包被的胞内劳森菌多克隆抗体。设阳性对照(将阳性对照物摇匀后加入没用过的分析试管中)。完成以上步骤后将各个分析试管摇匀静置于试管架上;
⑸第1次培养:每隔10 min轻轻摇晃2~3次,共静置30 min;
⑹磁头分离:静置完成后将分析试管转移至磁铁试管架上,磁头分离3 min;
⑺第1次冲洗:将磁铁试管架缓慢倾斜,倒掉上清液,然后将试管倒置于吸水纸上,擦掉多余水分。用移液管吸取0.8 mL冲洗液加入每个分析试管中,然后将所有的样品摇匀,使聚集在试管底部的聚集物完全溶解,然后将分析试管重新放回磁铁试管架。静置3 min后,用同样的方法去除上清液并擦干;然后第2次冲洗,重复第1次冲洗步骤;
⑻在磁铁试管架上放置1 min后,重复步骤⑺;
⑼溶解过氧化物酶共轭物:吸取溶解液加入装有冻干共轭物的瓶子内并摇匀,备用;
⑽添加共轭物:用移液管吸取0.5 mL过氧化物酶共轭物溶解液到分析试管内,然后摇匀放在普通试管架上;
⑾第2次培养:在试管架上静置培养20 min,培养期间轻轻摇动2~3次;
⑿第2次磁头分离和冲洗:把分析试管从试管架上取出,放于磁铁试管架上磁头分离1 min,重复步骤⑺;
⒀显色:用移液管吸取0.5 mL显色剂溶液加入每个分析试管内,充分摇匀,静置。设阴性对照(把0.5 mL显色剂直接加入未用过的分析试管内,充分摇匀,静置);
⒁第3次培养:在试管架上静置7 min;
⒂观察结果:把分析试管放在磁铁试管架上,立刻观察结果。阳性的为深蓝色,弱阳性的为浅蓝色,阴性的为透明色。
检测猪场100份粪样,其中保育猪25份,育肥猪25份,后备母猪25份,妊娠母猪25份。共检出阳性样品44份,其中保育育8份,阳性率32%;育肥育15份,阳性率60%;后备母猪10份,阳性率40%;妊娠母猪11份,阳性率44%。
为评价不同药物对PPE的防治效果,在加强饲养管理和消毒等综合防控措施的同时,用泰妙菌素、泰乐菌素和阿莫西林分别拌料防治本病做对比试验,发现泰妙菌素和泰乐菌素对PPE有很好的防治作用。
将品种、日龄相同,体重相似且同栋的确诊为PPE的120头40日龄猪分为4组,每组30头,分别隔离饲养,每组单独1个栏舍。前3组分别用泰妙菌素(100 g/吨料)、泰乐菌素(110 g/吨料)、阿莫西林(350 g/吨)拌料,连用30天,第4组做空白对照,不使用任何药物,30天内各试验组防疫计划、饲喂、环境控制等条件完全一致,试验前和试验结束时分别记录各组的体重、健康状况和成活率等。
表1 药物试验结果
由表1可以看出,在成活率、增重、料肉比、痊愈头数各项指标方面,泰妙菌素组和泰乐菌素组疗效均优于阿莫西林组,泰妙菌素和泰乐菌素两者效果区别不大,空白对照组死淘率高达30%。经治疗后的猪只皮红毛亮,精神和食欲恢复正常,表明泰妙菌素和泰乐菌素对PEE均有较好的治疗效果。
⑴ PPE可以采用PCR、ELISA和IFA等方法检测[9-13]。本研究采用新型的FIRSTtest检测法,相较于以上检测方法更为简单、准确,可现场检查,在2 h内完成检测。
⑵通过对湖北某规模化养猪场的调查,发现LI广泛存在于各个饲养阶段的猪只体内,育肥猪、后备母猪和妊娠母猪感染率较高,猪场管理者应加强对PPE的防治,减少本病对猪场的经济损失。
⑶药物防治试验证明泰妙菌素和泰乐菌素在治疗本病上都有较为理想的效果,药物使用时间最好能在21天以上,且两种药物对于由多杀性巴氏杆菌等引起的呼吸道疾病也有一定的防治效果。