不同方法测定复方曲安奈德水杨酸搽剂中曲安奈德含量及与搽剂质量标准的相关性研究

梁蓝月　聂秀霞　王荣侃

【摘要】 目的：分析不同方法测定复方曲安奈德水杨酸搽剂中醋酸曲安奈德含量的效果，以及醋酸曲安奈德含量和搽剂质量标准的相关性。方法：收集3个批次复方曲安奈德水杨酸搽剂样品，分别使用分光光度法及高效液相色谱法对其中的醋酸曲安奈德含量进行测量，并对两种方法测量的醋酸曲安奈德含量进行对比分析。结果：分光光度法的平均测得量、平均回收率、RSD（相对标准偏差）与高效液相色谱法比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。同时两种方法对样品的检测结果均在规定范围内。结论：在对复方曲安奈德水杨酸搽剂中醋酸曲安奈德含量进行测定过程中，通过分光光度法以及高效液相色谱法均能够起到一定效果。分光光度法操作简单快速，但专属性不强，而高效液相色谱法相对关物质测定更加准确可靠，因此有更高使用价值。同时也可作为对复方曲安奈德水杨酸搽剂质量控制的方法。

【关键词】 复方曲安奈德水杨酸搽剂； 分光光度法； 高效液相色谱法

Determination of Triamcinolone Acetonide in Compound Triamcinolone Acetonide Salicylic Acid Liniment by Different Methods and Its Correlation with Liniment Quality Standards/LIANG Lanyue，NIE Xiuxia，WANG Rongkan，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（19）：0-027

【Abstract】 Objective：To analyze the effect of different methods on the determination of triamcinolone acetonide in compound triamcinolone salicylate salicylic acid liniment and the correlation between triamcinolone acetonide and liniment quality standard.Method：A total of 3 batches of compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment samples were collected and their contents of triamcinolone acetonide were measured by spectrophotometry and high performance liquid chromatography respectively.The contents of triamcinolone acetonideof two methods were comparatively analyzed.Result：There were no significant difference in the average measured value，average recovery，RSD between the two methods（P>0.05）.At the same time，the test results of the two methods were within the specified range.Conclusion：In the determination of triamcinolone acetonide in compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment，spectrophotometry and high performance liquid chromatography can all play a certain role.Spectrophotometry is simple and fast， but its specificity is not strong， and high performance liquid chromatography is more accurate and reliable than the relative substance determination， so it has higher use value.At the same time it can also be used as compound triamcinolone salicylic acid liniment quality control methods.

【Key words】 Compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment； Spectrophotometry； High performance liquid chromatography

First-authors address：Zhongshan Second Peoples Hospital，Zhongshan 528447，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.19.007

復方曲安奈德水杨酸搽剂是临床较常见药物，对手癣、体癣、足癣、股癣等皮肤类疾病均可起到较好临床疗效[1]。对于复方曲安奈德水杨酸搽剂而言，其中的主要成分为水杨酸、氯霉素和醋酸曲安奈德。此几种药物分别为单一制剂时，对含量的测定方法主要有永停滴定法及比色法等。但在将两种药物混合后，这些方法已经无法起到较为准确有效的检测效果。因此，更加准确可靠的醋酸曲安奈德测定方法非常重要[2]。有研究显示，分光光度法及高效液相色谱法均为测定药物有效成分的主要手段，但两种检测方法的特性不同，其结果可能也会出现差异[3-4]。为了分析测定醋酸曲安奈德含量的有效方法，本文对此两种测定方进行了对比分析，并且分析了醋酸曲安奈德含量及与搽剂质量标准的相关性，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 研究仪器 本研究中使用美国安捷伦科技有限公司生产的Agilent 1200高效液相色谱仪、日本岛津制作所生产的UV-260紫外分光光度仪、日本日立U3000型紫外分光光度仪、瑞士梅特勒托利AE204十万分之一电子分析天平。

1.1.2 研究试剂 本研究使用复方曲安奈德水杨酸搽剂（本院制剂部自制，批号：20171101、20171115、20171201）作为样品；醋酸曲安奈德工作对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：100125-201404）；对照品为中国食品药品检定研究院提供的醋酸曲安奈德（批号：100125-201404）和曲安奈德（批号：100055）。其中醋酸曲安奈德含量为97.8%。将甲醇作为色谱纯，将10%的氢氧化四甲基铵溶液作为分析纯，实验用水为双蒸水。

1.2 研究方法

1.2.1 溶液制备方法 （1）曲安奈德对照溶液。首先需精密称取曲安奈德对照品，剂量50 mg，放入50 mL的量瓶中，加入甲醇定容。将此溶液精密量取1 mL，放入到50 mL的量瓶中，并加入流动相动容，得到曲安奈德对照品溶液。（2）醋酸曲安奈德对照溶液。在制备醋酸曲安奈德对照溶液过程中，首先可精密称取曲安奈德对照品50 mg，放入50 mL量瓶中，加入甲醇定容。将此溶液精密量取1 mL，放入到50 mL的量瓶中，加入流动相定容，得到醋酸曲安奈德对照品溶液。（3）供试品溶液。首先精密量取1 mL复方曲安奈德水杨酸搽剂，转入到50 mL量瓶中，加入流动相，将其稀释到刻度位置，摇匀。（4）阴性样品溶液。按照相应处方，配置出不加入醋酸曲安奈德的空白对照溶液。（5）系统适用性溶液。首先精密量取对照品储备液A和对照品储备液B，均为0.5 mL，放置在50 mL的量瓶中。并加入流动相定容，得到混合对照品溶液。

1.2.2 测定方法 （1）分光光度法。①含量测定：需精密吸取供试品及对照品溶液，剂量1 mL。将其分别放置在具塞刻度管中，并加入无水乙醇调整剂量为10 mL。另需取10 mL无水乙醇作为空白对照，加入1 mL氯化三苯四氮唑溶液摇匀，再加入1 mL氢氧化四甲基铵溶液摇匀。在25 ℃位置放置45 min，按照分光光度法要求，在485 nm波长位置对吸收度进行测定和计算，得出本研究中3批次样品含量。②线性关系试验：首先需吸取醋酸曲安奈德对照溶液，剂量为0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mL。分别将其放置在具塞刻度管中，分别加入无水乙醇，稀释到剂量为10 mL后摇匀。使用和含量测定相同的方法，取10 mL无水乙醇作为空白对照，对其吸收度进行测量。将浓度作为横坐标，将吸收度设定为纵坐标，进行回归处理分析。③回收率试验：本研究中使用添加法进行回收率试验。使用6只50 mL量瓶，一次对其进行编号。精密吸取已经进行过含量测定的样品溶液，剂量5 mL，并分别放置进入量瓶中。在1号和2号量瓶中加入对照溶液2 mL，在3号和4号量瓶中加入对照溶液5 mL，在5号和6号量瓶中加入对照溶液10 mL。使用和含量测定相同的方法对回收率进行测定。④稳定性试验：通过测定RSD的方法对稳定性进行分析。将醋酸曲安奈德对照溶液进行吸取，并在室温条件下放置。在放置到0、10、20、30、40 min时对吸收度进行测量，并计算出RSD值。（2）高效液相色谱法。本研究中，高效液相色谱法的色谱条件如下：色谱柱为5 μm，250×

4.6 mm的Welch Materials Ultimate XB-C8。流动相为6：4的甲醇-水溶液，检测波长240 nm，进样量设定为20 μL，流速1 mL/min。①含量测定：称取适量样品，通过流动相将其稀释成0.02 mg/mL溶液，称取20 μL，加入到液相色谱仪中，对色谱图实施全面记录。另需精密称取对照品，加入甲醇溶解，使用流动相稀释成为0.02 mg/mL溶液，精密称取1 mL，加入50 mL量瓶中，使用流动相稀释到刻度位置摇匀。在测定完成后，需使用外标法计算峰面积，得出含量。②线性关系试验：精密称取对照品0.6、0.8、1.0、1.2、1.6 mL，放置在50 mL的量瓶中，使用流动相稀释到刻度位置并摇匀。将此溶液20 μL注入到液相色谱仪中，对色谱进行记录。将浓度作为横坐标，将峰面积作为纵坐标，对其实施线性回归分析。③回收率试验：需精密量取对照品3、5、7 mL，各2份，将其放置在50 mL的量瓶中，每份需精密加入到5 mL的样品中，使用流动相稀释到刻度并摇匀。按照色谱条件分别量取20 μL对其进行进样测定，计算出回收率。④稳定性试验：仍需使用测定RSD的方法对稳定性进行分析。需取得对照品溶液，剂量为0.3、0.5、0.7 mL各2份，将其分别放置在50 mL的量瓶中，每份样品均需要加入已经准确测量过的样品，剂量为0.5 mL，使用流动相将其稀释到刻度并摇匀。

1.3 观察指标 本研究完成后，需对两种方法检测后的平均测得量、平均回收率、RSD进行收集，并且对两种方法的结果进行统计学分析。

1.4 统计学处理 采用SPSS 20.0软件对所得數据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 分光光度法检测后的回收率、样品含量及RSD，见表1、2。

2.2 高效液相色谱法检测后的回收率、样品含量及RSD，见表3、4。

2.3 两种方法检测效果比较 本研究显示，分光光度法的平均测得量、平均回收率、RSD与高效液相色谱法比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表5。

2.4 醋酸曲安奈德含量和搽剂质量标准的相关性 通过分光光度法检查后显示，得出醋酸曲安奈德的回归方程为A=26.375C-0.002 801，r=0.999 9。而在实施高效液相色谱法检查后显示，醋酸曲安奈德的线性方程为：A=3.651 8×104C+20.824，r=0.999。通过分析显示，在试验过程中醋酸曲安奈德和峰面积呈现出较好的线性关系。其结果说明醋酸曲安奈德含量和搽剂质量标准有着显著相关性。

3 讨论

复方曲安奈德水杨酸搽剂是临床较常见的药物类型，其中的主要成分为水杨酸、氯霉素、醋酸曲安奈德等。通过使用复方曲安奈德水杨酸搽剂，可对各类皮肤疾病起到较好治疗效果，例如手癣、足癣、股癣或是体癣等[5-6]。复方曲安奈德水杨酸搽剂中的水杨酸为胶质溶解软化剂，有抗菌、去除角质层的作用，可改善患者临床症状。而醋酸曲安奈德属于皮质类固醇，又被称为醋酸曲安缩松。在临床治疗时，能够起到抗炎、抗瘙痒及收缩血管等效果[7]。尤其是抗炎作用强而持久。对于常见的皮炎等皮肤类疾病，通过涂抹的方式即能够被皮肤吸收[8]。由此可见，保证到复方曲安奈德水杨酸搽剂中的有效成分醋酸曲安奈德含量满足要求非常重要。

当前在对复方曲安奈德水杨酸搽剂中的醋酸曲安奈德进行测定过程中，其主要方法有两种，即分光光度法和高效液相色谱法。

分光光度法的主要原理为对被测物质在特定波长，或是一定波长范围内对光的吸收度，从而对这一物质进行定量和定性分析的方法[9]。而在对复方曲安奈德水杨酸搽剂中的醋酸曲安奈德含量测定时，通过分光光度法也能够取得较好效果[10]。

高效液相色谱法又被称为高压液相色谱、高分力度液相色谱和高速液相色谱。在实际的检测中，需以液体作为流动相，使用高压输液系统将溶液等流动相装入到固定相的色谱柱中，在色谱柱中，各类成分被分离后可进入到检测器中接受检测，从而完成对各种物质的检测[11-13]。由于其特点，也可对各类化学物质起到更准确的检测效果，因而在对复方曲安奈德水杨酸搽剂中的醋酸曲安奈德进行检测时，通过高效液相色谱法可取得较好效果[14-17]。

本研究即分析了测定复方曲安奈德水杨酸搽剂中，醋酸曲安奈德含量的有效方法。通过本研究显示，使用分光光度法及高效液相色谱法，均能够较好测量醋酸曲安奈德的含量。两种方法检测后的平均测得量、平均回收率、RSD，差异均无统计学意义（P>0.05）。而在以往的研究中也对检测醋酸曲安奈德含量的方法进行了分析。在Navin等[18]研究中，分析了使用高效液相色谱法测定紫杉醇、地塞米松等物质在基质中的含量。通过其研究显示，使用高效液相色谱法，能够较好地对这些物质的含量进行测定。而在曾建亭[19]研究中，则分析了使用高效液相色谱法对醋酸曲安奈德硫软膏中的醋酸曲安奈德含量的测定效果。在其研究中显示，通过使用高效液相色谱法能够对醋酸曲安奈德含量起到较好的检测效果。在张咏梅等[20]研究中，分析了高效液相色谱法测量复方曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德含量的效果。通过其研究显示，高效液相色谱法有着灵敏度高和专属性强等特点，可对复方曲安奈德乳膏中曲安奈德含量进行有效测量。对这些研究结果进行分析后发现，其均能够说明使用高效液相色谱法可对醋酸曲安奈德的测量起到较好效果，其结果也和本研究类似。

综上所述，虽然高效液相色谱法和分光光度法均可对醋酸曲安奈德含量进行测定，相比高效液相色谱法，分光光度法的操作虽然简便，其检测时间也更短，但容易在实际的检测中出现偏差。由此可见，若条件允许，应尽可能使用高效液相色谱法对醋酸曲安奈德含量进行测定。

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（收稿日期：2018-04-18） （本文编辑：张帅）