蛋白酪氨酸磷酸酶在非小细胞肺癌组织中的表达及与吸烟指数的关系

程文栋

(青海省人民医院呼吸科，青海 西宁 810007)

非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)约占肺癌的80%[1]，临床诊断一般都到了中晚期，失去了最佳的手术治疗时机，5年的生存率较低[2]。早发现、早诊断、早治疗患者生存率较高，但是由于NSCLC缺乏早期的灵敏检测指标，目前临床主要通过胸部X射线来发现肺部异常，确诊率不高[3]。血清肿瘤标志物检测是现在临床上常用的方法，辅助影像检查可以提高NSCLC患者早期诊断率[4]。本研究分析蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase，PTP)在NSCLC组织中的表达及与吸烟指数的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料2013年4月至2015年7月我院收治的NSCLC患者60例(病例组)，男45例，女15例，年龄35～75岁[(55.25±6.79)岁]，其中鳞癌23例，腺癌20例，大细胞癌17例。肺癌TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期40例(66.7%)，Ⅲ～Ⅳ期20例(33.3%)。纳入标准：①均经临床病理确诊为NSCLC，可收集到完整的检测和治疗资料或病史资料；②分化、分期诊断明确；③研究符合伦理。排除标准：①患有严重的器官衰竭性疾病及对于病情诊断不明确和小细胞性肺癌；②患有严重合并症或并发症或恶性肿瘤。③正在进行放化疗治疗；④不依从、不配合及拒绝参加研究者或研究过程中可能转院治疗者。以同期在我院健康体检者60例为健康对照组，男42例，女18例，年龄30～80岁[(55.67±5.29)岁]，同期我院治疗的肺部良性疾病患者60例(肺部良性疾病组)，男31例，女29例，年龄32～74岁[(53.45±5.28)岁]，其中肺结核34例，肺部感染38例，肺部良性肿瘤8例。三组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P> 0.05)。

1.2研究方法

1.2.1PTP检测 试剂与材料：兔抗人的PTP-1B抗体(美国Cell Signaling Technology公司)、胃酶抑素、苯酸胺、抑肽酶等均购自南京建成生物工程研究所、二步法抗兔/鼠通用型免疫组织化学染色法(EnVision)试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色剂；收取NSCLC患者病理组织，肺部感染组感染区域组织及健康对照组正常肺部组织。步骤(Western 印迹法)：将收集的肺部组织按照常规步骤进行蛋白质提取及测定，100 μg肺组织匀浆置于10%SDS聚丙烯酰胺胶上分离，采用蛋白电子印迹法60 min转移到PVDF膜上，采用5%脱脂牛奶封闭，置于4 ℃冰箱过夜。次日清晨取出用0.1%TBST缓冲液漂洗3次，接着将PTP-1B多克隆抗体加到PVDF膜，室温孵化3 h，再用0.1%TBST缓冲液漂洗3次，再将辣根过氧化物酶标记二抗加到PVDF膜室温孵化2 h，再用0.1%TBST缓冲液漂洗3次，采用ECL系统显影免疫反应蛋白，View smar t软件系统对蛋白显影底片进行灰度扫描半定量分析。

1.2.2吸烟指数[5]采用自行设计的调查表对三组吸烟量进行调查，计算吸烟指数，即每天吸烟支数×吸烟年数，根据吸烟指数将病例组分为三亚组：A组(吸烟指数<150)、B组(150≤吸烟指数<300)、C组(吸烟≥300)。

1.3观察指标比较三组PTP相对表达量及吸烟指数；分析病例组PTP相对表达量与吸烟指数相关性。

1.4统计学方法采用SPSS 13.0软件进行数据分析，计量资料比较采用单因素方差分析及SNK-q检验；计数资料比较采用卡方检验；相关性分析采用Spearman秩相关。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1三组PTP相对表达量及吸烟指数比较三组间PTP相对表达量及吸烟指数比较，差异均有统计学意义(P< 0.05)，见表1。

2.2病例组PTP相对表达量比较及与吸烟指数的关系A、B、C组间PTP相对表达量比较，差异有统计学意义(P< 0.05)，见表2。吸烟指数与PTP相对表达量呈明显的正相关关系(rs=0.786，P< 0.05)。

表2 不同吸烟指数PTP相对表达量比较

3 讨论

癌症是一种渐变性疾病，在早期均会有一定变化，宏观到出现明显症状和体征，微观可能某些分子或细胞发生改变等，但是大部分癌症早期缺乏明显特异指标，从而耽搁病情，目前临床研究较为热门就是寻找和研究早期诊断癌症的特异指标[6]，以提早给予相应的治疗，提高患者生存质量和生存时间等[7～10]。

本研究结果显示，PTP在NSCLC组织中相对表达水平明显高于肺部良性疾病及健康者，说明患者发病或病情加重时PTP水平明显升高，可能是灵敏或特异指标。有研究发现PTP在2型糖尿病初诊患者内脏脂肪组织的表达水平明显升高，与疾病发病密切相关，目前研究PTP较多就是在糖尿病、肥胖中作用，近期逐渐开始研究在肿瘤中作用，具有同样的高表达结果[11]，提示有可能作为癌症提早诊断以及了解患者病情变化的关键指标，目前研究较为明确为PTP1B在胃癌组织和细胞中均过度表达，并且与TNM分期有明显的相关性，具有促进胃癌细胞的增殖和肿瘤发展的作用[12，13]。此外，也有研究显示PTP是NSCLC发生的独立危险因素，并且生存分析显示PTP表达与NSCLC患者总生存率密切相关[14，15]，说明PTP在NSCLC等癌症发展中起着重要作用。

本研究结果显示，随着NSCLC患者吸烟指数提高，PTP相对表达量明显升高，呈明显正相关关系，推测吸烟者可能通过诱导PTP相对表达量诱发NSCLC的发生或者病情加重，分析原因可能为吸烟过多可造成机体自主神经功能亢进，导致患者内环境紊乱，香烟中含有70种成份均具有一定致癌物[16～18]，吸烟能诱发周围气道和肺泡的炎性反应，通过蛋白分解酶的释放，进一步造成肺实质的破坏并刺激气道黏膜过度分泌，其中PTP就是相关蛋白中一种，增加癌症发生风险。

综上所述，PTP在NSCLC中高表法，且与吸烟指数明显正相关，临床可以通过检测PTP了解患者病情，通过控制吸烟量降低发病风险或者减轻病情。