多指标综合评分法对理气复胃口服液的澄清工艺优化及比较

白 兰，李晋奇，童荣生，师健友

(四川省医学科学院·四川省人民医院，个体化药物治疗四川省重点实验室，四川 成都 610072)

理气复胃口服液为我院生产的医院制剂，由木香、枳实、陈皮、大黄等七味中药组成，临床使用近三十余年，具有行气宽胀、消积导滞、燥湿健脾的功效，用于腹胀、嗳气、早饱、上腹痛、反酸、烧心等消化不良症的治疗及手术后胃肠功能的恢复[1]，临床观察有效率达96.05%。理气复胃口服液现有提取精制工艺为水提醇沉，操作方便，但成品外观质量较差，短期放置即出现沉淀，不符合现行药典标准。为提高口服液的澄明度的同时保留有效成分，在课题组将含测指标由测定大黄素提高到测定大黄总蒽醌(大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚)，并重新考察提取工艺的基础上，以干膏率和大黄总蒽醌为综合评分法考察指标，比较醇沉法、离心法、ZTC1+1Ⅲ型天然澄清剂法三种澄清方法，为理气复胃口服液澄清工艺的改进提供实验依据。

1 材料与方法

1.1仪器与试药Waters2690 高效液相色谱仪，包括2996二极管阵列检测器，Empower Chromatography Manager 色谱数据工作站(美国waters公司)；BP 211D型十万分之一电子分析天平( 德国Sartorius 公司)；蒸发皿、离心机、水浴锅、恒温鼓风干燥箱等。木香(141119)、枳实(141030)、陈皮(141104)、白术(141029)、大黄、莱菔子(141110)、法半夏(141114)七味药材购于四川省中药饮片有限责任公司；ZTC1+1Ⅲ(150623，天津振天成科技有限公司)；大黄素对照品(110756-200210)，大黄酚对照品(110796-200208)，大黄酸对照品(110757-200206)，芦荟大黄素对照品(110795-200806)，大黄素甲醚(110758-200611)，均购于中国药品生物制品检定所，乙醇为分析纯。

1.2方法

1.2.1理气复胃口服液提取液的制备 根据课题组前期实验基础，提取工艺为[2]：按处方量称取木香、枳实、陈皮、白术四味药，加10倍量水，提取芳香水，滤过，滤液收集备用。残渣与大黄、莱菔子、法半夏合并加10倍水量，煎煮2 次，每次1小时，过滤。合并三份滤液，减压浓缩至相应体积(药液浓度为1：1，即1 ml药液相当于1 g原药材)。

1.2.2干膏收率的测定 精密量取一定量的药液，置干燥恒重的蒸发皿中，105 ℃干燥至恒重，取出放入干燥器中冷却至室温，迅速称重，计算干膏收率(%)。干膏率(%)=提取液的干膏重量/相当的药材重量×100%

1.2.3大黄总蒽醌含量测定 色谱条件根据课题组已有报道，大黄总蒽醌含量测定条件为[3]：色谱柱Phenomenex Gemini C18( 250 mm×4.6 mm，5 μm，110 A)，保护柱Security Guard Cartridges Gemini C18( 4 mm×3.0 mm)，柱温35 ℃，流动相：甲醇-乙腈-0.01 mol/L，NaHP2O4(pH1.5) (2∶5∶3.5)，流速1.0 ml/min，检测波长435 nm。

1.2.4综合评分 对各个指标进行综合考虑和权衡，以综合指标( overall desirability，OD) 进行直观分析和方差分析。根据干膏率和大黄总蒽醌所做贡献比重大小，分别赋予加权值0.2和0.8。OD=干膏率(%)×0.2 + 大黄总蒽醌(μg/ml)×0.8

1.2.5醇沉法醇沉法 为现有工艺[4]，取1.2.1项下制备的提取液9份，分成3组，浓缩至相对密度1.20～1.25(20 ℃)，每组分别加乙醇至含醇65%、75%、85%，4 ℃静置24 h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水定溶至相应体积，测定干膏率和大黄总蒽醌含量，平行试验3次。

1.2.6离心法正交实验 选取药水比、离心转速、离心时间三个影响离心效果的主要因素，进行正交试验，因水平表见表1。实验方法：取50 ml提取液，分别按要求稀释，离心，合并上清液，浓缩至50 ml，测定。

表1 离心法工艺正交试验因素水平

1.2.7澄清剂法[5～7]①ZTC 1 + 1 Ⅲ型天然澄清剂的配制。A组分的配制：精密称取A组分2 g，加入适量去离子水超声溶解，再加入去离子水至200 ml，搅拌，溶胀24 h，双层纱布滤过，即得到1% A组分溶液。B组份的配制：精密称取B组分2 g，加入适量1% 醋酸超声溶解，再加1%醋酸至200 ml，搅拌，溶胀24 h，双层纱布滤过，即得到1% B组分溶液。②ZTC 1 + 1 Ⅲ型天然澄清剂的加入顺序及方法。加入顺序：根据澄清剂使用原则，当溶液pH<4.8，按照先A后B的顺序添加澄清剂；在pH值>4.8溶液中，按照先B后A的顺序添加澄清剂。经测定，提取液分别稀释1、4、8倍，溶液的pH值均小于4.8，因此按照先A后B的顺序添加澄清剂。实验方法：取1.3.1项下理气复胃口服液提取液100 ml，按比例加入一定量水稀释，温度平衡后加入A组分溶液，在相应温度下搅拌2 h，加入B组份溶液，再恒温搅拌一定时间，取出冷却至室温，4 ℃放置24 h，滤过，滤液浓缩至100 ml，测定。③正交实验设计。选取药：水、ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清剂加入总量、温度、加入B组分后搅拌时间四个影响澄清效果的主要因素，进行正交试验，因水平表见表2。

表2 ZTC1+1Ⅲ澄清剂法正交试验因素水平

2 结果

2.1醇沉法实验结果由醇沉实验结果可知，原醇沉方案综合评分最高为85%乙醇组，与75%乙醇组相差不大。见表3。

2.2离心法实验结果根据综合评分结果以及方差分析可知，离心法各因素对除杂效果影响优劣：离心转速>离心时间>药水比。由直观分析可知最佳方案为药∶水为1∶3，转速16000 r/min，离心时间60 min。方差分析显示三个因素对离心法除杂效果均有显著性影响。见表4、表5。

表3 醇沉法实验结果(n= 3)

表4 离心法正交试验安排及结果

表5 离心法实验结果分析及方差分析

2.3ZTC1+1Ⅲ型澄清剂法实验结果根据综合评分结果以及表7极差分析可知，使用ZTC 1 + 1 Ⅲ型天然澄清剂澄清除杂各因素对除杂效果影响优劣：药水比>ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清剂加入总量>温度>加入B组分后搅拌时间。因素A、B对使用ZTC1 + 1 Ⅲ型天然澄清剂澄清除杂效果有显著性影响，因素C对实验结果无统计学意义，综合以上结果，从节约成本和时间出发，最佳实验方案定为药水比按1∶1，澄清剂加入总量2%，温度70 ℃，搅拌时间为15 min。见表6、表7。

表6 ZTC1 + 1Ⅲ型澄清剂法正交试验安排及结果

表7 ZTC 1 + 1 Ⅲ澄清剂法实验结果分析及方差分析

3 讨论

3.1澄清方法比较中药水提液中含有大量杂质如淀粉、树胶、果胶、粘液质、蛋白质、鞣质、色素等，本次实验三种澄清方法均可达到一定程度的除杂目的。醇沉法是常见的除杂方法，但就理气复胃口服液而言，经放置后很快出现沉淀；离心法是借助互不相溶组分间不同的离心力而达到分离的物理方法，在其分离的过程中，不会引起溶液中有效成份发生相变，实验中药液放置一段时间后仍会有较多沉淀出现，推测可能多次离心或提高离心转速能够提高澄清效果，但不适合于现有设备的大生产；ZTC1+1澄清剂主要用于去除鞣质、蛋白质、蜡质等胶体不稳定成分，对中草药有效成分如黄酮、生物碱、皂苷类、萜类、多肽、维生素、矿物质等不影响，作用原理是第一种组分加入后，在不同的可溶性大分子之间架桥连接，使分子迅速增大，第二种组分在第一种组分形成的复合物的基础上再架桥，使絮体尽快形成沉淀而除去，达到除杂的目的[8]。本次实验中，用ZTC1 + 1Ⅲ型澄清剂法所得样品能够保持较长时间不产生沉淀。

3.2评价指标的选择和综合评分的建立由于理气复胃口服液方中君药木香主要成分木香内酯和二氢木香内酯等，属于挥发性物质，课题组发现样品在放置过程中几天内挥发至无法测定，因此选择大黄中大黄总蒽醌作为考察对象。为保证ZTC1+1Ⅲ型天然澄清剂除杂效果，选取干膏率与大黄总蒽醌作为评价指标进行综合评分。

综上所述，乙醇沉淀法、离心法、ZTC1+1Ⅲ型澄清剂法三种方法的最佳工艺OD分别为217.63、214.06、213.80，综合评分结果相近，初步说明改变工艺对制剂干膏率和大黄总蒽醌影响较小。与长期常温放置观察样品性状结合，乙醇沉淀法3～5天出现沉淀，离心法5个月开始出现沉淀，ZTC1+1Ⅲ型澄清剂法放置6个月不出现沉淀。此外，ZTC1+1Ⅲ型澄清剂法与其他方法相比不仅简便易行，成本可控，不需要特殊设备，可实现大生产等优点。