2017年浙江省兽医系统实验室检测能力比对结果分析

吴贇竑，张红丽，吴雪军，刘 霞，冯肖肖，赵灵燕

(浙江省动物疫病预防控制中心，浙江杭州311199)

兽医系统实验室是指隶属于各级兽医主管部门，承担动物疫病检测、诊断和监测等工作的兽医实验室，作为动物疫病预防控制机构的组成部分，对动物疫病防控发挥着重要支撑工作[1]。其中动物疫病检测是兽医系统实验室职责范围内的一项重要工作，而实验室检测能力和水平则是实验室的核心，是动物疫病防控提供技术支撑的固基之本、源之所在[2]。提升兽医系统实验室检测能力和水平，是做好动物疫病防控工作的关键。

通过参加实验室间的比对试验，可以证明实验室具备持续提供可靠检测结果的技术能力。比对试验的结果是一个实验室技术管理水准和操作水平能力的综合体现，对于实验室管理者来说，也是一个有效的质量控制手段[3]。目前，浙江省已有17个兽医实验室通过了计量认证，实验室认证资格的取得和维持，离不开实验室检测能力比对[4]。自2011年以来，浙江省连续7年举办全省兽医系统实验室检测能力比对，所选比对项目紧密结合当前动物疫病防控形势，切实提高了全省兽医系统实验室检测能力。2017年，依据农业部办公厅和浙江省畜牧兽医局有关2017年兽医系统实验室检测能力比对工作的文件要求[5-6]，浙江省动物疫病预防控制中心组织实施了2017年度全省兽医系统实验室检测能力比对工作。共有55个市、县(市、区)参加了此次比对，在规定时间内完成样品的制备，分发，检测和结果报告。

1 比对材料与方法

1.1 比对项目 依据浙江省畜牧兽医局有关2017年兽医系统实验室检测能力比对工作的文件[6]要求，此次比对共设置5个项目，分别是高致病性禽流感H5亚型Re-8株抗体检测、O型口蹄疫抗体检测、猪繁殖与呼吸综合征病毒型别鉴定检测、非洲猪瘟病毒检测和布鲁菌病抗体检测(采用试管凝集试验方法)。市本级兽医实验室参加全部五个项目，县(市、区)兽医实验室根据实验室检测能力选择参加三个及以上项目。其中，参加全部5个项目的实验室有13个，参加4个项目的有2个，参加3个项目的有40个。

1.2 比对方法及试剂 比对各项目所采用方法，依据标准及所用试剂见表1。

1.3 比对样品 由浙江省疫控中心完成所有比对项目样品的制备、标定、分装和编号，并根据实验室参加的不同比对项目进行分发。

表1 比对试验的标准、方法和试剂

*：根据实验室检测能力选择采用荧光RT-PCR或RT-PCR方法进行检测，其中猪繁殖与呼吸综合征病毒型别鉴定检测项目9个实验室采用荧光RT-PCR方法，9个实验室采用普通RT-PCR方法；非洲猪瘟病毒检测10个实验室采用荧光RT-PCR方法，5个实验室采用普通RT-PCR方法

1.3.1 高致病性禽流感H5亚型Re-8株抗体样品 在参考值为<1、5、7、9的鸡血清中随机抽取5份组成1组样品。

1.3.2 O型口蹄疫病毒抗体样品 在参考值为<1∶8、1∶90、1∶360的牛血清中随机抽取5份组成1组样品。

1.3.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒型别鉴定检测 在参考值为高致病性猪蓝耳病阳性、经典株猪蓝耳病阳性与阴性的病毒样品中随机抽取6份组成1组样品。

1.3.4 布鲁菌病抗体样品 在参考值为<1∶25、1∶50、>1∶200的病毒样品中随机抽取6份组成1组样品。

1.4 评判标准

1.4.1 高致病性禽流感H5亚型Re-8株抗体检测评判标准 全部比对样品检测值效价在参考值效价±1(包括±1)范围内，判为结果正确；有一个及以上样品检测值偏离参考值±2及以上，判为比对结果存在较大偏差。

1.4.2 O型口蹄疫病毒抗体检测评判标准 全部比对样品检测值效价在参考值效价±1(包括±1)范围内，判为结果正确；有一个及以上样品检测值偏离参考值±1以上，判为比对结果存在较大偏差。

1.4.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒型别鉴定检测评判标准 全部比对样品检测结果与参考值完全一致，判为结果正确；与参考值不一致，判为比对结果存在较大偏差。

1.4.4 非洲猪瘟病毒检测评判标准 全部比对样品检测结果与参考值完全一致，判为结果正确；与参考值不一致，判为比对结果存在较大偏差。

1.4.5 布鲁菌病抗体检测评判标准 全部比对样品检测值效价在参考值效价±1(包括±1)范围内并定性结果正确，判为结果正确；有一个及以上样品检测值偏离参考值±2以上或定性结果错误的，判为比对结果存在较大偏差。

2 结果与分析

2.1 总体结果 根据检测结果评判，参加比对的55个兽医实验室中有31个实验室参加的所有比对项目检测结果全部正确。有16个实验室有1个比对项目存在较大偏差，有6个实验室有2个比对项目部分比对检测值存在较大偏差，有2个实验室有3个比对项目存在较大偏差(见表2)。

表2 55个实验室比对结果统计

2.2 高致病性禽流感H5亚型Re-8株抗体比对结果 本项目共有53个实验室参加，有51个实验室对5份样品检测结果全部正确，实验室比对正确率为96.23%。有2个实验室的部分样品检测值与参考值存在较大偏差(见表3)。

表3 高致病性禽流感H5亚型Re-8株抗体比对试验结果

2.3 O型口蹄疫病毒抗体比对结果 本项目共有55个实验室参加，有51个实验室对5份样品检测结果全部正确，实验室比对正确率为92.73%。有4个实验室的部分样品检测值与参考值存在较大偏差(见表4)。

2.4 猪繁殖与呼吸综合征病毒型别鉴定比对结果 本项目共有18个实验室参加，有12个实验室对6份样品检测结果全部正确，实验室比对正确率为66.67%。有6个实验室的部分样品检测值与参考值存在较大偏差(见表5)。

表4 O型口蹄疫病毒抗体比对试验结果

表5 猪繁殖与呼吸综合征病毒型别鉴定比对试验结果

2.5 布鲁菌病抗体比对结果 本项目共有52个实验室参加，有35个实验室对6份样品检测结果全部正确，实验室比对正确率为67.31%。有17个实验室的部分样品检测值与参考值存在较大偏差(见表6)。

表6 布鲁菌病抗体比对试验结果

3 讨论

参加此次兽医系统实验室检测能力比对的各个实验室均在规定时间内完成了比对试验，总体情况看，参加检测能力比对的实验室数量较往年有所减少，常规的禽流感抗体检测和口蹄疫抗体检测两个项目的正确率较高，超过90%，这也与市县日常主要的检测工作相符合。

3.1 本次比对试验设置了参考值一致的平行样品，部分实验室对于该类样品检测结果不一致，存在不同程度的偏差；部分实验室出现检测报告样品号填写错误、所填检测结果未按照结果上报单要求进行表述等现象，需加强实验室规范化建设，建立和完善质量管理体系。

3.2 本次比对针对当前国内外面临的疫情新形势，设置了非洲猪瘟病毒检测，县(市、区)实验室可选择参加，充分体现了贴合实际和自主性，但选择参加该项比对的实验室数量偏少，正确率也仅有66.67%。市县级实验室在日常检测中，接触到较多的为RNA病毒检测项目，当遇到非洲猪瘟检测项目为DNA病毒时，部分实验室对于核酸提取的试验方案的设计发生错误，导致最终结果发生偏差。而猪繁殖与呼吸综合征病毒型别鉴定检测项目中，有实验室对阴性样品检测结果发生定性错误，可能与实验室发生污染有关，还有部分实验室对于阳性样品未检出，可能与样品提取效率及试验方案设计有关。

3.3 本次布鲁菌病抗体检测项目采用试管凝集方法，且增加了抗体效价的判定，部分实验室的试验定性准确，但是在具体效价的判定时却发生了错误。布鲁菌病试管凝集方法检测步骤并不复杂，但是在判定结果时需要凭借检测人员的主观经验，这也暴露出部分实验室在该项目检测中的能力不足。

3.4 从比对结果来看，各兽医实验室检测准确性仍有较大差异。11个市级实验室参加项目多，有8个实验室均有比对项目结果发生较大偏差的情况。这与当前疫病防控形势对于市一级实验室提出的要求不符，相关市级实验室需针对本次比对试验中发生偏差的项目，从人员配置、试验方案、仪器设备等多方面分析查找原因，切实提高实验室检测能力和水平。