抗病毒颗粒药理作用研究

武晋孝，侯丽丽，刘春龙，张 丽，晏永新

(1.山西省饲料兽药监察所，山西太原030027 ； 2.江西出入境检验检疫局综合技术中心，江西南昌330002 ； 3.江西新世纪民星动物保健品有限公司，江西南昌330096)

随着社会经济发展和人民生活水平的提高，人们对食品安全问题越来越重视。因此，开发安全有效的中兽药显得非常有必要。中兽药在我国有几千年的应用历史，具有价格低廉、不易产生耐药性，药物残留少等特点，将中兽药特别是复方制剂应用于畜禽的疾病防治已经成为一种趋势[1-2]。抗病毒颗粒处方出自张仲景的《伤寒论》，由板蓝根、连翘等9味中药组成，具有清热祛湿，凉血解毒之功效，用于感冒风热，温病发热，肺卫热盛证，症见发热头痛，咳嗽，咽干，咽喉肿痛。抗病毒颗粒作为中药制剂，主要用于防止畜禽感染性疾病。本试验研究了抗病毒颗粒的抗菌、抗病毒、解热及抗炎作用，为其临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 KM小鼠，SPF级，60只，雄性，体重16～18 g；SD大鼠，SPF级，65只，雄性，体重160～180 g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK(湘)2013-0004。

1.2 菌株和病毒株 金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和溶血性链球菌均来源于江西省临床检检中心试剂站；甲型流感病毒FMI株，由中国药品生物检定所提供，经小鼠增强毒力后，于鸡胚尿囊腔传代2次，并测定其半数致死量LD50=4.2。

1.3 药品、试剂与仪器 抗病毒颗粒，亳州市乾元动物药业有限责任公司提供，批号：20150304；利巴韦林颗粒，四川百利药业有限公司，批号：140367；复方乙酰水杨酸片，远大医药(中国)有限公司，批号：140409；吲哚美辛肠溶片，山西云鹏制药有限公司，批号：A140402；牛肉膏，北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20140202；蛋白胨，北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20141208；琼脂(Agar Powder)，Sigma公司，Cat# A8190；无菌脱纤维羊血，上海永辉羊业有限公司，批号：20150214；二甲苯，天津市福晨化学试剂厂，批号：201312；高活性干酵母，13 g/袋，安琪酵母股份有限公司，批号：20140818。DT-1TB型电子体温计(上海华辰医用仪表有限公司)；电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；MIR-162型多功能培养箱(日本SANYO公司)；MCO-17AIC型CO2培养箱(日本SANYO公司)。

1.4 抗病毒颗粒体外抑菌试验[3-5]取灭菌试管10支，分别制备药物的10个梯度浓度(2倍稀释法)分别为：100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.781，0.391、0.195 mg生药/mL，将金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和溶血性链球菌接种于对应平皿中，培养24 h 取出，观察不同细菌在不同浓度的药物平皿上生长情况，确定最低抑菌浓度(MIC)。

1.5 抗病毒颗粒对甲型流感病毒FMI株引起小鼠死亡的保护作用[3-5]取KM小鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为：空白组、模型组、阳性药利巴韦林组、抗病毒颗粒高、中、低剂量组。动物乙醚麻醉后，除空白组外，其他各组分别滴鼻接种已滴定的病毒液50 μL/只,空白组滴鼻等容量的生理盐水。在接种2 h后，各组动物灌胃给予相应药物，给药容量20 mL/kg·bw，共给药5 d，每日观察动物存活情况，共观察14 d，记录动物的死亡数量和死亡率。

1.6 抗病毒颗粒对干酵母所致大鼠发热模型的影响[3-5]大鼠适应环境后，于试验前1天用电子体温计对各试验动物正常体温进行测量，测量肛温时，宜先将其直肠内粪便挤出，再将蘸有少量液体石蜡的电子体温计从肛门轻轻插入，进行体温测量，选择56只体温正常及范围波动小的动物供试验使用。将56只SD大鼠随机分为6组，即空白组、模型组、阳性药复方乙酰水杨酸组、抗病毒颗粒高、中、低剂量组，除空白组6只外，其他每组10只，并按10 mL/kg·bw的容积灌胃相应药物，连续3 d。于第3天试验前禁食10 h，末次给药前测量各组动物体温作为造模前的体温，于给药后1 h，每只大鼠背部皮下注射20%干酵母悬液10 mL/kg·bw复制大鼠发热模型，分别测量造模后第3、5、7 小时动物体温。以每只动物造模后体温值减去造模前体温值，计算各时间点体温变化值进行统计分析。

1.7 抗病毒颗粒对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响[3-5]取KM小鼠50只随机分5组，即对照组，阳性药吲哚美辛组、抗病毒颗粒高、中、低剂量组，每组10只，除对照组外，其他各给药组按剂量灌胃给药，给药容量为20 mL/kg·bw，对照组给予等容量蒸馏水，每天给药1次，连续给药3 d，末次给药后1 h，将50 μL二甲苯涂于小鼠左耳前后两面造成耳肿胀模型，右耳不作处理，造模后1 h将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8 mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，用电子天平精确称重，以左耳重减右耳重为小鼠的耳肿胀度，并求出抑制率。

抑制率(%)=(模型组耳肿胀平均值-给药组耳肿胀平均值)/模型组耳肿胀平均值×100%

1.8 统计方法 采用SPSS 20.0软件进行统计分析。数据经过方差齐性检验后，用均数±标准差表示，组间差异比较用独立样本t检验和卡方检验。

2 试验结果

2.1 抗病毒颗粒体外抑菌试验 抗病毒颗粒对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC)均为3.125 mg/mL，对溶血性链球菌的最低抑菌浓度(MIC)为6.25 mg/mL，以上结果表明，本品对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌均有一定的抑制作用，结果见表1。

表1 抗病毒颗粒体外抑菌(平皿法)结果

2.2 抗病毒颗粒对甲型流感病毒FMI株引起小鼠死亡的保护作用 与空白组比较，接种病毒组动物表现耸毛、活动减少等现象。模型对照组动物死亡率最高，其次为抗病毒颗粒低剂量和中剂量组，然后为抗病毒颗粒高剂量组，死亡率最低的为利巴韦林组，与模型组比较，各组均能显著降低小鼠的死亡率(P<0.01或P<0.05)，结果见表2。

表2 抗病毒颗粒对接种流感病毒小鼠死亡保护的影响

注：与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01

2.3 抗病毒颗粒对干酵母所致大鼠发热模型的影响 模型组在造模后的3个时间点，动物体温均明显上升，与空白组比较有显著性差异，而空白组各时间点体温无明显变化；阳性药复方乙酰水杨酸在造模后各时间点体温明显降低；高剂量组动物在造模后第7 小时体温明显降低，与模型组比较有显著性差异，以上结果表明，抗病毒颗粒具有一定的解热作用，结果见表3。

表3 抗病毒颗粒对干酵母致发热大鼠模型体温的影响 (Mean±SD)

注：与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01

2.4 抗病毒颗粒对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响 与对照组比较，抗病毒颗粒各剂量组及阳性药吲哚美辛组，均可明显减轻小鼠的耳肿胀度，抑制率分别达38.08%、26.14%、25.23%、42.52%。以上结果表明，抗病毒颗粒具有较强的抗炎作用，呈现一定的剂量依赖关系，结果见表4。

表4 抗病毒颗粒对小鼠耳肿胀度的影响 (Mean ± SD)

注：与对照组比较，*：P<0.05，**：P<0.01

3 讨论

抗病毒颗粒处方出自张仲景的《伤寒论》，其中处方中板蓝根为君药，板蓝根具有清热解毒、凉血消斑、润肺利咽之功效，研究表明，板蓝根的水提液或板蓝根制剂具有较强的抗流感病毒作用，对流感病毒、甲型流感病毒、乙型脑炎病毒、腮腺炎病毒、肝炎病毒、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒和肾出血热病毒均有良好的抑制作用[1,6]；连翘具有清热解毒、疏风散热、消肿散结等功效，具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用，其对流感病毒、腮腺炎病毒、呼吸道病毒及畜禽感染的主要病毒具有很强的干扰和抑制作用；芦根清热生津；石膏外解肌热，内清肺火，地黄滋阴凉血，广藿香则消暑湿寒热。抗病毒颗粒具有清热祛湿，凉血解毒之功效，具有解热、抗病毒、抗炎等药理作用，常用于病毒和细菌感染引起的流感、手足口病、上呼吸道感染、病毒性感冒及红眼病等[7]。

现代药理研究发现，抗病毒各种制剂均表现出较强的抗病毒、抗炎、解热等药理作用。卢华等[8]研究发现，抗病毒颗粒对流感病毒性肺炎小鼠有明显的保护作用，可对2,4-二硝基苯酚所致大鼠体温升高有明显的抑制作用，能明显对抗二甲苯所致的小鼠耳肿胀，对小鼠皮下棉球肉芽组织的增生有一定的抑制作用。张诚光[9]等研究发现，抗病毒颗粒能明显延长甲型流感病毒FM1株感染小鼠的平均存活时间和存活率，对甲型流感病毒FM1株感染小鼠的肺指数也有显著抑制作用，同时它对2,4一二硝基苯酚所致大鼠发热有显著抑制作用，它还能使蛋清所致大鼠足肿胀明显缩小。苗明三[10]采用2,4-二硝基苯酚大鼠发热模型和内毒素家兔发热模型研究发现，抗病毒口服液对两种模型都具有较好的解热作用。刘晓帆等[11]报道，抗病毒口服液对3种病毒株在鸡胚体外有明显的抑制作用或杀灭作用，在鸡胚内对鸡胚尿囊液 HA 效价有明显抑制趋势，但统计学分析无差异显著性。

本试验研究结果显示，抗病毒颗粒对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌均有一定的抑制作用，其最低抑菌浓度(MIC)分别为：3.125、3.125、6.25 mg/mL生药；对甲型流感病毒FM1引起的小鼠死亡有较好的保护作用；能明显降低酵母所

致大鼠发热模型动物体温；能明显抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀的程度。本试验研究结果与文献报道基本一致，这说明抗病毒颗粒具有较好的抑菌、抗病毒、解热、抗炎作用，可为临床应用提供较好的理论依据。抗病毒颗粒作为畜禽用中药，属于绿色天然药物，不仅能预防治疗由于病毒和细菌感染引起的各类畜禽疾病，还能防止由于抗生素、激素滥用引起的各种药物残留问题，这为畜禽的疾病防治提供了一种新的模式。