非小细胞肺癌组织中EMA表达水平与疾病预后的关系

宁 宇

(解放军第251医院，河北 张家口 075000)

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常见的临床类型，癌细胞的侵袭能力较强，手术后极易复发或转移，导致预后差，因而目前肺癌研究的重点是了解NSCLC临床侵袭及转移的机制，探寻与NSCLC预后密切相关的标志物，探索新的临床治疗靶向，以改善预后[1-2]。上皮膜抗原(EMA)是一种表达在人体正常上皮组织或者上皮组织肿瘤中的多态性跨膜糖蛋白(P-gp)，其形态分为胞内区域、胞外区域以及跨膜区域，其中胞外区域为高度糖基化。EMA参与调节机体内多种信号通路，高水平的EMA可能促进癌细胞的发生发展、转移以及耐药等[3-5]。目前，EMA在国内外上皮源性肿瘤的临床鉴别诊断中发挥着重要作用，但是NSCLC组织中EMA水平与疾病预后的关联性以及EMA在不同肺癌分期的表达意义还没有明确。本研究拟通过检测不同类型NSCLC肺癌术后肿瘤组织中的EMA水平，分析EMA水平与肺癌的病理因素以及疾病预后的临床关系，以探寻NSCLC预后评估的可靠指标。

1 临床资料

1.1一般资料 选择2010年1月—2015年1月在解放军第251医院行肿瘤根治术的NSCLC患者84例(肿瘤组织标本84个)。患者均为本地区常住人口；根治手术之前均没有进行任何方式的抗肿瘤治疗；术后均在院接受了规范化的辅助性治疗；预估生存期超过3个月；临床资料以及随访资料详细、完整、可靠。排除合并其他类型的恶性肿瘤患者，随访期间非因肺癌而死亡的患者。入组的84例患者中，男55例，女29例；年龄34～75(58.3±7.2)岁。通过病理检查确诊，其中肺腺癌40例，肺鳞癌44例。根据国际抗癌联盟在2009年发布的TNM分期标准进行临床分期，其中Ⅰ～ⅡA期48例，ⅡB～Ⅲ期36例。

1.2方法 采用免疫组化法测定EMA在84个肿瘤组织中的表达情况。切除的肺癌组织样本采用甲醛固定，并石蜡包埋，连续性切片，厚度2.5 μm；全部切片均置入62 ℃的烤箱中烘烤2 h后，将切片在二甲苯中进行脱蜡以及在梯度乙醇中脱水，再用过氧化氢(浓度为3%)浸泡15 min，接着在柠檬酸缓冲液(pH 6.0)中修复30 min，再予血清封闭60 min，最后滴入上皮膜抗体，放置于4 ℃环境中8～12 h。在37 ℃中培育生物素标记的二抗试剂30 min，二氨基联苯胺显色，苏木素染色细胞核。细胞质或细胞膜中观察到棕褐色染色为EMA阳性表达。

1.3观察项目 ①读片。组织切片的染色结果经2位病理科医生以双盲方式进行判定。每一个组织切片须随机选择5个使用高倍镜进行细胞染色观察。根据细胞染色的程度进行评分：没有染色，为0分；呈弱阳性，为1分；呈阳性，为2分；呈强阳性，为3分。根据细胞染色的范围进行评分：染色范围≤5%，计0分；>5%～25%计1分；>25%～50%，计2分；>50%～75%，计3分；>75%，计4分。以综合分(染色的强度与范围之积)来判定EMA表达[6]：综合分0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为中强度阳性()，9～12分为强阳性()。综合分超过1.5分为EMA表达阳性，其是4分及以下为EMA低表达，4分以上为EMA高表达[7]。②随访。84例患者均以电话、上门或者门诊方式进行随访，患者总体生存随访的终止是死亡或者随访的截止日期(2017年1月31日)。无复发生存时间为从术后至有明确的临床证据表明发生肺癌复发或者转移。若直至随访的截止日期，患者仍然没有出现复发或者转移，随访的终点就是随访的截止时期。

1.4统计学方法 应用SPSS 19.0统计学软件处理所得数据。计数资料比较用2检验；EMA与甲状腺转录因子(TTF-1)表达之间关联性运用肯德尔等级相关系数(Kendall)进行分析；患者生存状况运用非参数的Kaplan-meier法进行分析，以Log-rank方法检验生存的差异性。检验水准均为α=0.05。

2 结 果

2.1NSCLC组织中EMA的表达水平 84例NSCLC组织中，EMA阳性表达66例(78.6%)，阴性表达18例(21.4%)；EMA高表达44例(52.4%)，低表达40例(47.6%)。40例肺腺癌患者中EMA高表达28例(70.0%)，44例肺鳞癌患者中EMA高表达15例(34.1%)，肺腺癌EMA高表达比率明显高于肺鳞癌(P<0.05)。

2.284例NSCLC组织中EMA的表达水平与临床参数间的关系 肿瘤组织中EMA表达水平与肺癌的临床分型、周围淋巴细胞浸润程度、分化程度以及2年内复发或转移密切相关，EMA在肺腺癌、中大量周围淋巴细胞浸润、肿瘤细胞中低分化以及2年内复发或转移患者中高表达比率显著高于肺鳞癌、少量淋巴细胞浸润、高分化及2年内无复发或转移者(P均<0.05)。见表1。

2.3EMA表达水平与疾病预后的关联 在84例NSCLC组织中，检测TTF-1的有51例，将这51例NSCLC组织中所测得的TTF-1水平与EMA表达水平运用Kendall系数进行分析，结果显示，EMA高表达30例，低表达21例，其中TTF-1阴性18例，阳性33例。EMA低表达同时TTF-1阴性13例，EMA高表达同时TTF-1阳性24例。EMA表达水平与TTF-1表达呈正相关(r=0.439，P<0.05)。

表1 84例NSCLC组织EMA表达水平与临床参数关系 例(%)

84例患者均成功随访，中位随访时间为50个月，共死亡34例，均由肺癌导致。84例患者根治切除术后，50例出现复发或转移，其中肺腺癌34例，肺鳞癌16例。肺腺癌患者中EMA高表达与低表达者总体生存期分别为46个月(95%CI[0.498，2.591])、61个月(95%CI[0.388，2.004])；肺鳞癌中EMA高表达与低表达者总体生存期分别为50个月(95%CI[0.460，3.081])、58个月(95%CI[0.355，2.116])。运用非参数的Kaplan-meier法分析显示，ⅡB～Ⅲ期肺鳞癌、肺腺癌组织中EMA表达水平与疾病预后没有明显的相关性；而Ⅰ～ⅡA期肺鳞癌组织中EMA高表达，预后相对于中晚期明显较差(P=0.025)，预示着早期的肺鳞癌预后与肿瘤组织中EMA表达水平可能存在关联。

3 讨 论

EMA属于黏蛋白家族，其在基因转录之后会产生不同的互补脱氧核糖核酸产物，而其编码可形成相应同种型的蛋白产物，包括分泌型以及膜结合型等。目前临床已经证实，EMA水平表达与多种类人体恶性肿瘤的预后密切相关，其也成为免疫学治疗以及靶向治疗研究的新方向[8]。但EMA在NSCLC组织中的表达以及EMA与临床病理类型、肿瘤分期、复发转移以及疾病预后之间的关系研究较少。本研究结果提示，无论是肺鳞癌还是肺腺癌，EMA表达水平与肿瘤细胞的侵袭、转移有着密切关系，且对不同肿瘤细胞分化、不同肿瘤分期的肺鳞癌预后很有意义。

核转录因子TTF-1可以参与及调解人体内多种基因的表达，并且对机体的甲状腺功能发挥着重要的调节作用，同时TTF-1在肺组织上皮的形成、发育以及分化等过程中也发挥着主要作用。甲状腺转录因子阳性表达主要表现在腺癌以及小细胞癌等，其与NSCLC的预后也相关，Anagnostou等[9]研究提示，TTF-1在Ⅰ期NSCLC中低表达预示着疾病可能有更佳的预后。本研究结果显示，NSCLC组织中的EMA表达水平与TTF-1表达水平呈正相关。通过综合性分析，可能是EMA通过对肺癌细胞的生长分化、黏附及迁移产生一定的影响，从而促使NSCLC特别是肺鳞癌2年内的复发或者转移，最终影响疾病的预后，这其中也离不开TTF-1的作用。

EMA表达水平与临床多种癌症预后有相关，EMA呈阳性表达的恶性肿瘤患者，其预后也相对较差。Nagai等[10]研究显示，Ⅰ期NSCLC组织中EMA低表达，相对于高表达者预后要差。但Situ等[11]认为ⅠB期NSCLC组织中EMA高表达提示具有较差的预后。这两项研究结果明确EMA在临床NSCLC中的预后判断。本研究结果显示，ⅡB～ⅢA期肺鳞癌、不同分期的肺腺癌组织中EMA表达水平与疾病预后无明显相关，但是EMA在Ⅰ～ⅡA期肺鳞癌组织中的高表达提示患者具有较差的预后，可以认为在早期肺鳞癌中，EMA有可能对肿瘤进展起着一定的促进作用，EMA表达水平在早期肺鳞癌预后评价中具有重要的指导作用。但是由于本研究选择的Ⅰ～ⅡA期肺鳞癌仅有21例，样本数量较小，还需要今后大样本、多因素研究进行探讨。

总之，EMA表达水平与肺癌的临床分型、肿瘤细胞侵袭、分化以及2年复发或转移密切相关，尤其是EMA表达水平对Ⅰ～ⅡA肺鳞癌预后有着较高的预示作用，可能是以后临床研究早期肺鳞癌疾病预后的新焦点。