乳腺癌粗针穿刺与术后活检标本病理分级及免疫组化比较

魏颖

医学中所指的恶性肿瘤常被人们称之为癌症，临床实践中，乳腺癌的发病率和致死率较高，是最为常见的也是对女性健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一[1]。最近几年，我国女性乳腺癌患者数量极速增加，据权威机构统计，年平均增长速度高达27.6%[2]。乳腺癌有着比较明显的特点，如病患人群一般在42周岁以上；发病初期症状不易被觉察，大部分病患被确诊时已接近晚期；不宜采取外科手术方法治疗，多采用介入手段，如放化疗等[3]。临床实践中，化疗方法能够有效延缓病患生存时间，提升病患生存质量，是比较有效的治疗手段。但是，因化疗使用细胞毒药物，会给病患带来严重的副作用和并发症，面对副作用和并发症带来的巨大痛苦，相当一部分病患不能坚持进行化疗，延误了治疗时机[4]。这两年随着医学技术逐渐发展，一些疾病的治疗技术不断在更新，乳腺癌的治疗手段也在发展，乳腺粗针穿刺活检逐渐应用于临床乳腺癌的诊断，并且临床数据显示其诊断效果较好，在逐渐取代细针穿刺细胞学，优点比较明显[5]。临床上采取化疗方法后雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER2）状态有误差不宜采取。针对这种问题，本文选取2014年1月-2016年1月本院收治的未经化疗的乳腺浸润性导管癌根治术患者120例，探讨乳腺癌粗针穿刺与术后活检标本病理分级及免疫组化的差异。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年1月-2016年1月本院收治的未经化疗的乳腺浸润性导管癌根治术患者120例，年龄29～73岁，平均（47.5±1.2）岁。纳入标准：经过西医和传统中医诊断，并均已通过病理切片和影像检查手段确诊；年龄≥25岁；对本文治疗无相关禁忌；卡氏功能状态评分（KPS）＞70分；预计生存期＞3个月。排除标准：心脏等脏器严重受损或者患有出血性相关病症的患者；已经采取过手术和放疗手段治疗过的乳腺癌患者；在本研究过程中出现感染，并且没有得到控制的患者；药物性过敏体质的患者。患者均知情同意本研究，并经过医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 病理检查和分级工作 （1）检测方法：手术前对患者进行粗针穿刺，获得病灶组织，将获得的组织放入甲醛溶液中，常规石蜡包埋，制备4 μm切片，对制备好的切片进行HE染色。（2）分级：乳腺癌患者诊断分级采取WH02012乳腺癌分级标准来进行，分级主要从以下三方面进行评估：腺管形成的程度、细胞核的多形性、核分裂计数[6]。

1.2.2 免疫组织化学 （1）检测方法：采用免疫组织化学法测定ER、PR、HER2、Ki67表达水平。取手术过程中的病灶组织，向不同组织中加入蒸馏水与浓度为30.0%的H2O2，常温下加入内源性酶并进行10 min灭活，PBS连续进行3次洗涤。将最终获得的切片放置在0.01 M枸橼酸盐缓冲液中，加入生理盐水控制溶液pH最终为6。电炉加热直到煮沸，间隔5 min后再次进行煮沸，常温下冷却，采用PBS完成2次洗涤，洗涤5 min/次，最后加入5%BSA封闭液并加入ER、PR、HER2、Ki67蛋白（稀释浓度为1∶100）一抗一滴。滴加完毕后进行3次PBS洗涤；在1 mL底物中加入ER、PR、HER2、Ki67蛋白二抗一滴，充分混合后常温下显色，苏木素复染后封片，倒置显微镜下观察细胞数量，每份标本测定三次，取平均值。（2）判断方法。参考奥尔雷德评分标准分别从细胞的阳性数量（1～4分）、染色强度（0～12分）完成免疫组化染色评分，总分16分，总分越高阳性率越高。

1.3 观察指标及判定标准 （1）粗针穿刺标本与手术切除标本病理分级。记录粗针穿刺标本与手术切除标本病理分级情况，分级标本参考WH02012乳腺癌分级标准进行[6]。（2）ER、PR、HER2、Ki67阳性率表达。记录粗针穿刺标本与手术切除标本ER、PR及HER2的阳性表达率。（3）Ki67蛋白表达。记录并统计粗针穿刺标本与手术切除标本Ki67表达情况，由于Ki67在乳腺癌组织中表达水平较低，研究中以20.0%为限进行分析，对于阳性率＞20.0%者视为异常。

1.4 统计学处理 使用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验；一致性采用Kappa检验，0～0.20极低的一致性、0.21～0.40一般的一致性、0.41～0.60中等的一致性、0.61～0.80高度的一致性和0.81～1.00几乎完全一致。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 粗针穿刺标本与手术切除标本病理分级比较 粗针穿刺标本检测病理分级与手术切除标本比较，一致性一般，差异无统计学意义（Kappa=0.38，P=0.04）。见表 1。

表1 粗针穿刺与手术切除标本病理分级的一致性分析 例

2.2 粗针穿刺与手术切除标本ER、PR及HER2的阳性表达率比较 粗针穿刺标本ER、PR及HER2蛋白阳性率与手术切除标本比较差异均无统计学意义（P＞0.05），一致性均较高（Kappa=0.89、0.70、0.69，P=0.00、0.01、0.01）。见表 2。

表2 粗针穿刺与手术切除标本ER、PR及HER2的阳性表达情况比较 例（%）

2.3 粗针穿刺标本与手术切除标本Ki67表达分析比较 120例乳腺癌患者中88例免疫组化检测呈阳性，阳性率为73.33%；两种检测方法的Ki67表达比较差异无统计学意义，一致性中等（Kappa=0.49，P=0.03）。见表 3。

表3 粗针穿刺标本与手术切除标本Ki67表达分析比较 例

3 讨论

随着医疗技术的逐渐发展，临床上对于癌症的治疗方法不断在更新，传统治疗癌症方法为化疗加放疗或者采用手术治疗方法，但这些治疗手段副作用大且治疗效果并不理想[8]。近几年，辅助性全身疗法逐渐应用于临床治疗癌症。特别对于乳腺癌患者，这种方法可以大大降低乳腺癌的复发率与死亡率，临床效果较好。一般乳腺癌患者为ER、PR均阳性患者，最佳治疗方法是调节内分泌，选择内分泌疗法[9]。但是对于HER2阳性患者，内分泌疗法并不适合，最佳治疗方法为曲妥单抗。还有一些ER阴性及HER2阳性患者，最好是采用传统治疗方法[10]。粗针穿刺活检临床诊断时精度相对较高，但是该诊断方法所需时间较长、可重复性较差，并且检查具有较高的风险性、创伤性，导致临床诊断依从性较差[11]。

对于恶性肿瘤的治疗一般是通过以下几个方面，一是能够有效控制肿瘤的产生和增长，进而致使癌细胞死亡[12]；二是能够有效控制癌细胞转移，迟滞肿瘤生成，以此实现阻碍肿瘤生成和扩散的目的；三是提高人体免疫功能，全面提升病患免疫能力；四是减轻化疗副作用，特别对人体造成的骨髓抑制作用，增强细胞功能，提升病患白细胞数量[13]；五是明显改善病患消化道功能，增强胃壁厚度，以此降低病患等不良反应[14-15]。

随着分子生物学的发展，目前对于癌症的治疗已经从原来的细胞水平逐渐发展到分子水平[16]。所以对乳腺癌患者的肿瘤进行分子水平分析是非常必要的，研究患者肿瘤的生物学特性可以作为临床指标进行检验。因为粗针穿刺活检越来越流行成为乳腺癌的首选诊断方法，进而其准确性逐渐在临床上倍加重视。从理论上说，粗针穿刺活检标本和手术标本肿瘤指标的不一致率应该较低。乳腺癌有明显的病理现象，例如泥沙样钙化，这种比例现象一般在X线下即可观察到，但是泥沙样钙化也存在良性肿瘤中[17]。一般情况下，泥沙样钙化具有一定特殊的形态，并且可以应用于诊断。一般的形态有圆圈状、原点状、条状以及片状，这样的形态清晰，一般都是良性肿瘤。而形态不清晰的混合性的肿瘤，就像出现条状、叉状同时具备的患者，几乎可以确诊为恶性肿瘤即乳腺癌[18]。

本文进行粗针穿刺标本与手术病理标本的病理分级及免疫组化分析，结果显示，粗针穿刺标本检测病理分级与手术切除标本比较差异无统计学意义（Kappa=0.38，P=0.04）；粗针穿刺标本ER、PR及HER2蛋白阳性率与手术切除标本比较差异无统计学意义，一致性均较高（Kappa=0.89、0.70、0.69，P=0.00、0.01、0.01）；120例乳腺癌患者中88例免疫组化检测呈阳性，阳性率为73.33%；两种检测方法的Ki67表达比较差异无统计学意义，一致性中等（Kappa=0.49，P=0.03）。该结果与文献[19]相符，而且医学研究显示，肿瘤特别是恶性肿瘤的产生、转移和人体免疫功能特别是细胞的免疫功能联系密切，在人体的诸多细胞中，淋巴系统细胞有着十分重要的作用[20]，是人体的效应细胞和免疫监控的重要参与者。

综上所述，乳腺癌粗针穿刺与术后活检标本ER、PR、HER2检测的一致性均较高，但是乳腺癌粗针穿刺与术后活检标本病理分级和Ki67表达一致性相对较差，均需要进一步研究与探讨，临床应结合实际选择合适的方法。