CXCR4和CXCR7在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义

吕栋，滕志刚，周云飞，任选义

（河南省开封市中心医院 泌尿外科，河南 开封 475000）

趋化因子相对分子质量为10×103～12×103，是细胞因子超家族中具有化学趋化作用的小分子蛋白，现发现约50种趋化因子和约20种受体[1]。趋化因子与其相对应的受体结合后，在血管生成、胚胎发育、炎症和肿瘤等生理或病理过程中发挥作用。CHATTERJEE等[2]报道趋化因子受体与肿瘤的转移特性有关以来，更多研究发现趋化因子受体与肿瘤的发展密切相关。过去认为趋化因子受体4（chemokine receptor 4, CXCR4）是趋化因子基质细胞衍生因子1（stromal cell derived factor-1, CXCL12）的唯一受体，然而最近研究发现CXCL12尚存在趋化因子受体7（chemokine receptor 7, CXCR7） 这 一 新 的 受 体[3-4]，CXCL12/CXCR7生物轴同样在肿瘤发展过程中起重要作用。因此本实验检测趋化因子受体CXCR4和CXCR7在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma, ccRCC）组织中的表达，并探讨其相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2010年9月-2015年8月在河南省开封市中心医院泌尿外科行手术切除且临床资料完整的50例肾癌患者，取其ccRCC组织标本。其中，男性28例，女性22例；年龄49～83岁，平均62.4岁。采用2004年世界卫生组织肾癌组织学分级方法：高、中分化32例，低分化18例。按照2010版UICC/AJCC的TNM分期系统进行临床分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期14例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例；其中骨转移3例，淋巴结转移14例；外科切缘阴性46例，阳性4例。所有患者术前未行放、化疗。随机切取20例远离肾癌的正常肾组织作为对照，其中男性12例，女性8例；年龄49～83岁，平均67.4岁。

1.2 方法

使用免疫组织化学SABC三步法。一抗试剂CXCR4和CXCR7为浓缩型羊多克隆抗体，工作液浓度1∶100；二抗试剂为浓缩型兔抗羊多克隆抗体，稀释比例1∶200。兔抗人CXCR4一抗、兔抗人CXCR7一抗、兔抗SABC试剂盒及DAB显色剂由上海哈灵生物科技有限公司提供，所有标本用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，2～4μm连续切片。应用免疫组织化学SABC法检测，组织切片常规脱蜡，水化后经3%过氧化氢处理，加热抗原修复，按试剂盒说明书进行操作。所有实验均设阳性对照及阴性对照，用已知CXCR4、CXCR7表达的阳性图片作阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

免疫组织化学法阳性反应为黄棕色颗粒，阳性表达定位于细胞质或细胞膜。用半定量积分判断结果：①阳性细胞数≤10%为0分，10%～30%为1分，31%～60%为2分，61%～80%为3分，＞80%为4分；②阳性强度：无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。将两者积分相乘，0分阴性（-），1～4分弱阳性（+），5～8分阳性（++），9～12分强阳性（+++）。将ccRCC组织标本及正常肾组织标本中CXCR4和CXCR7蛋白的表达水平进行比较，分析ccRCC组织中CXCR4和CXCR7的表达水平及其与患者临床病理学指标的相关性。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 13.0统计软件，计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验或一致性检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CXCR4、CXCR7在ccRCC和癌旁组织中的表达

免疫组织化学法结果显示，CXCR4和CXCR7蛋白阳性表达于细胞浆和细胞膜，以细胞浆为主。ccRCC组织中，CXCR4和CXCR7蛋白含量升高。CXCR4在ccRCC组织中的阳性表达率为72%（36/50），在正常肾组织为10%（2/20）；CXCR7在ccRCC组织中的阳性表达率为70%（35/50），在正常肾组织为15%（3/20），经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=22.128和0.000，P=17.414和0.000）。见图1～3。

2.2 CXCR4、CXCR7与患者临床病理特征的关系

CXCR4、CXCR7蛋白的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小等无相关性（P＞0.05），与患者TNM分期、组织学分级及有无淋巴结转移关系密切（P＜0.05）。见表1。

2.3 CXCR4、CXCR7在ccRCC组织中表达的相关性

CXCR4与CXCR7蛋白在ccRCC组织中的表达呈正相关（r=0.467，Kappa=0.740，P=0.001）。见表2。

图1 CXCR4在ccRCC组织中阳性表达

图2 CXCR4在正常肾组织中阴性表达

图3 CXCR7在ccRCC组织中阳性表达

表1 ccRCC患者临床病理特征与CXCR4、CXCR7蛋白表达的关系

表2 CXCR4、CXCR7在ccRCC组织中表达的相关性 例

3 讨论

CXCR4是有7个跨膜结构域的GTP-蛋白偶连的跨膜受体之一，在免疫系统和中枢神经系统的细胞中广泛表达[5]。不同的肿瘤高表达特异的趋化因子受体，肿瘤细胞借助趋化因子与受体的特异结合力，最终向这些器官特异性转移。CXCR4作为CXCL12的受体不仅表达于细胞浆，也可在细胞膜中检测到。CXCL12/CXCR4生物轴在多种恶性肿瘤的特定转移中起关键作用，在淋巴结、肺、肝及骨髓肿瘤常见的转移灶中均发现CXCL12/CXCR4高表达[6]，但其在肾肿瘤组织中的研究甚少[7]。最近研究发现，CXCL12尚存在CXCR7受体，CXCL12/CXCR7生物轴同样在肿瘤发展过程中起重要作用[3-4，8]。CXCR7作为膜相关的受体蛋白，在多种肿瘤细胞、内皮细胞及胎肝细胞中高表达，在正常细胞中不表达。CXCR7在乳腺癌、宫颈癌、肺癌等多种肿瘤细胞株中高表达[9-11]，但对肾肿瘤的研究甚少。目前，CXCR4和CXCR7在肾肿瘤发生、发展过程中的作用尚不明确。本研究发现，CXCR4在ccRCC组织中呈高表达，其阳性率为72.0%，相比癌旁肾组织，CXCR4蛋白表达升高。同样CXCR7在ccRCC组织中的阳性表达率为70%，高于正常肾组织的15%。尤其重要的是，本实验结果表明CXCR4、CXCR7的阳性表达与患者TNM分期、组织学分级及有无淋巴结转移关系密切，与患者的性别、年龄及肿瘤大小无关。本组资料显示，随着ccRCC细胞的恶性程度升高和分化变差，CXCR4和CXCR7蛋白的阳性表达水平逐渐升高；同样随着浸润深度增加和淋巴结转移的发生，即进展期ccRCC组织中CXCR4和CXCR7蛋白的阳性表达率升高。据此推测，CXCR4和CXCR7可能作为促癌基因发挥作用，其高表达与肾肿瘤分期、分级及恶性发展进程相关，可用来推断ccRCC的预后。本实验结果表明，CXCR4与CXCR7蛋白在ccRCC组织中表达呈正相关，两者共阳性表达30例（60%，30/50），提示两者可能通过CXCL12/CXCR4/CXCR7生物轴，借助于某种复杂的信号转导机制，协同作用于ccRCC的发生、发展及转移，其具体机制尚需研究。

本研究认为，CXCR4、CXCR7在ccRCC组织中高表达，其与ccRCC TNM分期和组织学分级关系密切，联合检测2种蛋白的表达可作为判断ccRCC预后的生物学指标。