MMP-2与NF-KB在肺癌侵袭转移中的作用

刘 敏

恶性肿瘤的侵袭转移是一个很复杂的过程，研究表明，癌细胞脱落后，首先需要突破细胞外基质与基底膜所结合而成的屏障，然后才能向周围扩散，进入血液系统进行转移[1]。由此可见，从分子水平上了解肺癌侵袭转移的机理，是获取治疗肺癌新手段的关键所在[2]。有研究表明，由于基质金属蛋白酶可降解细胞外基质，而核因子信号传导通路激活可促进MMP的分泌，因此可以推测在肿瘤的侵袭转移过程中基质金属蛋白酶MMP-2和NF-KB(核因子KB(nuelearafctor-KB)的表达起到了很重要的作用[3]。本研究就是通过对80例肺癌患者和40例肺癌旁正常组织的MMP-2和NF-KB的表达水平比较，分析 MMP-2与NF-KB在肺癌侵袭转移中的作用。现将相关结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

随机选取2014年10月至2015年10月，我院80例肺癌组织为观察组及40例肺癌旁正常组织为对照组。80例肺癌患者中45例男性，35例女性，年龄范围32～74岁，平均年龄52.8岁，术前均无化疗或放疗患者。40例肺癌旁正常组织患者中男性26例，女性患者14例，年龄范围33～72岁，平均年龄50.5岁。80例肺癌根据1997年公布修订的分期标准35例鳞癌，45例腺癌；低分化31例，中分化30例，高分化19例；36例Ⅰ+Ⅱ期，44例Ⅲ+Ⅳ期；44例淋巴结阳性转移，36例阴性转移。完整随访78例，随访时间2015年11月至2016年5月，以手术日期到随访结束日期记为生存时间，或者因复发、转移死亡的日期为生存时间。本研究征得患者同意并与患者签订知情同意书。

1.2 免疫组织化学法

用二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化2组的石蜡切片[4]，浸泡3%甲醇-过氧化氢溶液20 min，抗原袖12 min[5-6]，用购自北京中杉公司的免疫组化SP试剂盒和DAB显色试剂，10～15 min室温用H2O2氧化物进行染色[7-8]。

1.3 结果判定

胞膜或胞质染成棕色为阳性反应，NF-KB以细胞质和(或)细胞核出现棕黄色颗粒为阳性[9-10]。以200个细胞作为每张切片的计数基数，统计不同级别阳性细胞所占的百分比。0分：胞膜或胞质无染色患者；1分：胞膜或胞质染色浅棕患者；2分：胞膜或胞质染色深棕患者[11]。不同级别阳性细胞所占的百分比：0分为0%～5%；1分为6%～25%；2分为26%～50%；超过50%为3分[12]。胞膜或胞质染色分数不同级别阳性细胞所占的百分比分数的得分作为阳性表达的标准[13-14]，强阳性大于6分、中等阳性4～6分、弱阳性2～3分、阴性0～1分，其中阴性或弱阳性为低表达、中等阳性或强阳性为高表达。

1.4 统计学处理

采用SPSS20.0数据处理软件对所得数据资料进行统计学分析。所有计量资料数据采用均数标准差表示，免疫组织化学染色结果与临床病理参数计数资料采用卡方检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基质金属蛋白酶MMP-2、NF-KB在肺癌和正常肺组织中的表达比较

80例肺癌患者基质金属蛋白酶 MMP-2呈阴性或少数微弱阳性表达64例，高表达16例，阳性表达为20.0%；40例癌旁正常组织呈阴性或少数微弱阳性11例，阳性表达28例(71.6%)。2组MMP-2阳性表达率差异有统计学意义(χ2=28.773，P=0.000)。 80例肺癌患者NF-KB呈阴性或少数微弱阳性表达28例，高表达52例，阳性表达率为65.0%，在高倍显微镜下肿瘤细胞的胞质或胞核成棕黄色；40例正常肺组织中阴性或少数微弱阳性表达26例，高表达14例(35.8%)，2组差异有统计学意义(χ2=18.021，P=0.000)。

由此可以看出MMP-2与NF-KB蛋白的表达呈负相关。

2.2 MMP-2与NF-KB蛋白表达与临床病理特征关系

MMP-2、NF-KB蛋白的阳性表达与性别、肿瘤大小、病例分型以及吸烟史无明显关系，P>0.05；与分化程度、TNM分期、淋巴结转移、生存期有关。见表1。

2.3 MMP-2和NF-KB蛋白表达与肺癌患者术后生存时间的关系

80例肺癌患者中78例完整随访，随访发现MMP-2低表达患者的术后生存时间低于高表达患者生存时间，NF-KB高表达患者的术后生存时间低于低表达患者生存时间，总之患者的生存时间受MMP-2低表达和NF-KB高表达影响。见表2。

3 讨论

MMP-2可以降解如基底膜及其结缔组织等细胞外间质，为肿瘤浸润和转移打开了第一道缺口。研究发现肿瘤组织中的MMP-2表达低于正常组织[15]。核因子KB及NF-KB是真核细胞转录因子，NF-KB信号通路可以调控细胞增殖、分化和凋亡等重要生理功能，同时与肿瘤发生联系密切。

本研究结果显示：实验组和对照组MMP-2的表达率分别为20.0%(16/80)、71.6%(28/40)；实验组和对照组NF-KB蛋白的表达率分别为68.7%(55/80)、35.8%(14/40)，数据对比显示，实验组肺癌患者在MMP-2表达方面弱于对照组，分析其原因，MMP-2是一组锌离子依赖性内肤酶，几乎能降解细胞外基质的所有成分，在病理情况下，MMP-2通过降解基质膜和包绕肿瘤的基质，突破基质屏障，促进肿瘤侵袭转移。在此过程，癌细胞通过细胞与细胞间粘附的松解而脱离出来，通过溶蛋白过程而进入周围的细胞外基质，再进入血管和淋巴管。NF-KB是一种作用十分广泛的真核细胞转录因子，由结果分析，其阳性表达随肺癌分化变高而降低，且MMP-2与NF-KB蛋白的表达呈负相关。探究其机理，在典型NF-KB活化途径中，细胞受到外界信号或致癌因素刺激时，它能够诱导激活特定位点上的丝氨酸残基磷酸化，随后释放出大量NF-KB，进而转入细胞核与特定序列DNA结合，由此可见，NF-KB信号通路不仅具有调控细胞增殖、分化和凋亡等重要生理功能，而且其异常活化与肿瘤发生发展密切相关。另外，随访发现MMP-2低表达患者的术后生存时间低于高表达患者生存时间，NF-KB高表达患者的术后生存时间低于低表达患者生存时间。

表1 MMP-2与NF-KB蛋白表达与临床病理特征关系 (例，%)

表2 MMP-2和NF-KB蛋白表达与术后生存时间的关系

综上所述，MMP-2的低表达以及NF-KB蛋白的高表达对肺癌侵袭转移有直接影响，且MMP-2与NF-KB蛋白的表达呈负相关，MMP-2低表达可促使NF-KB蛋白信号激活，促进肺癌侵袭转移。