灰树花多糖联合顺铂对H22小鼠腹水瘤的抑制作用

吕冬霞 张 涛 范晓艳 刘 爽

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

灰树花多糖(PGF)具有抗肿瘤作用〔1〕。本课题组以往的研究表明，PGF和顺铂联合使用具有协同作用〔2，3〕。本研究旨在观察PGE联合顺铂对H22腹水瘤小鼠腹水的抑制作用。

1 材料与方法

1.1材料 H22肝癌细胞(哈尔滨医科大学附属肿瘤医院)，昆明种近交系小鼠(佳木斯大学实验动物中心，许可证号：黑动字第99101001)，雄性，体重18～20 g，SPF环境下饲养。顺铂(齐鲁制药)，PGF(浙江方格药业)，细胞凋亡检测试剂盒(南京凯基)，倒置显微镜(日本 OLYMPUS)，流氏细胞仪(美国BD公司)。

1.2方法

1.2.1实验分组及给药方式 处死H22腹水瘤小鼠，取腹水6 ml，离心并用生理盐水稀释肿瘤细胞，细胞悬液终浓度为1×107/ml。取雄性小鼠80只，每只小鼠腹腔注射0.5 ml。接种在1 h内完成。24 h后，将小鼠随机分4组，每组20只。每只每天腹腔注射(0.2 ml)给药1次，连续给药8 d。分组(药物)如下：PGF组(220 mg/kg PGF)、顺铂组( 2 mg/kg顺铂)、联合组(2 mg/kg顺铂+220 mg/kg PGF )、对照组(生理盐水)。

1.2.2小鼠日常状态 观察各组小鼠日常表现，如活跃程度、饮食、毛色、腹水等变化。

1.2.3记录小鼠腹水量 用药结束24 h后，每组随机取小鼠5只以脱颈法处死，70%酒精消毒，超净台上用无菌注射器吸取腹水，移入刻度离心管，记录腹水体积。留存腹水用于以下实验。

1.2.4观察腹水细胞形态变化 取以上每组小鼠腹水制作涂片，观察H22小鼠腹水细胞的形态。

1.2.5小鼠肿瘤细胞凋亡率检测 取以上各组处死的小鼠腹水5 ml于离心管中，以红细胞裂解液裂解红细胞，10 min后离心，弃上清，结合缓冲液稀释细胞，后续操作按说明书进行。

1.2.6小鼠腹膜渗透性的检测 用药结束24 h后，每组随机取小鼠5只，尾静脉注射伊文思蓝0.2 ml，2 h后处死小鼠。腹水离心后留取上层腹水，酶标仪检测吸光值(波长540 nm)。

1.2.7腹水瘤抑制实验 记录各组剩余10只小鼠的死亡时间。统计各组小鼠平均生存天数。生命延长率=〔(T-C)/ C〕×100%。

1.3统计学方法 采用SPSS10.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1各组小鼠生存状态比较 约4 d对照组小鼠出现腹水，约6 d用药组小鼠出现腹水。对照组与顺铂组小鼠表现为毛发疏散易掉、色暗无光，活动迟缓。PGF组和联合组小鼠表现为毛亮牢固，活动敏锐。

2.2各组腹水量比较 各给药组腹水量均显著少于对照组(均P<0.05)；联合组腹水量显著少于PGF组及顺铂组(P<0.01)。见表1。

2.3各组腹水细胞形态变化比较 3组给药组细胞体积小，深染而固缩的核，浓缩的染色质，呈凋亡形态。联合组凋亡细胞较PGF组和顺铂组增多。

2.4各组肿瘤细胞凋亡率比较 各给药组细胞凋亡率均显著高于对照组(均P<0.05)；联合组凋亡率显著高于PGF组及顺铂组(均P<0.05)。见表1。

2.5各组腹膜渗透性比较 PGF组、顺铂组、联合组和对照组渗透性吸光度值分别为(2.65±0.13)、(3.44±0.27)、(2.54±0.12)和(3.27±0.24)。PGF组、联合组与对照组及顺铂组比较渗透性吸光度值显著降低(P<0.01)；顺铂组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；联合组与PGF组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.6各组生存期及生命延长率比较 各给药组生存期均显著长于对照组(P<0.05)，联合组生存期显著长于PGF组及顺铂组；联合组生命延长率显著高于PGF组及顺铂组(P<0.05)。见表1。

表1 各组腹水量、凋亡率、生存期及生命延长率比较

与对照组比较:1)P<0.05，2)P<0.01;与联合组比较:3)P<0.05，4)P<0.01

3 讨 论

恶性腹水是原发性肝癌常见并发症之一，严重影响患者生存质量。目前恶性腹水的治疗手段均缺少高级别的循证医学依据〔4〕。寻找新的有效的治疗药物及改善治疗策略，提高患者生存质量，延长患者生命期，具有重要临床应用价值。本研究结果显示，与对照组比较PGF组、顺铂组和联合组均能减少H22小鼠腹水量、延长小鼠的生存时间。本研究结果表明PGF可降低小鼠腹膜的渗透性，而顺铂对小鼠的渗透性没有影响。本研究结果提示联合用药对H22小鼠腹水瘤有更好地抑制作用，其机制可能是PGF诱导肿瘤细胞凋亡，降低小鼠腹膜渗透性，增加顺铂敏感性，从而抑制腹水生成。