鸡群H7N9禽流感疫苗免疫抗体检测

朱旭东，王　敏,朱宇华

(1.西安市高陵区动物疫病预防控制中心, 陕西西安 710200；2.西安市第三中学,陕西西安 710048)

H7N9亚型禽流感是一种新型流感，于2013年3月底在我国长三角地区首次出现后，来势汹汹，在10个月内，造成12个省市148人感染，其中46人死亡[1]。近几年来发病数逐年上升，国家卫计委公布的疫情统计，仅2017年1月-8月全国就有643人感染，死亡268人，已蔓延到我国17个省、区、直辖市(不包括港、澳、台地区)，H7N9亚型禽流感是全球首次发现的新亚型流感病毒，尚未证实此类病毒是否具有人传染人的特性[2]。现阶段研究发现，人感染禽流感病毒的传染源为携带病毒的禽类，H7N9禽流感病人是通过直接接触禽类或其排泄物污染的物品、环境而感染[3]。所以，预防人感染H7N9亚型禽流感病毒，必须从源头上做好家禽亚型H7N9禽流感的预防工作[4]。

家禽方面，2016年之前我国只是在家禽上和活禽交易市场环境中检测到H7N9亚型禽流感病毒，无相关家禽发病报道。2017年我国开始出现家禽感染发病和大批死亡，根据国家农业部公布的疫情统计,截止2017年8月我国发生9起家禽H7N9亚型流感疫情，发病家禽185 684只，死亡115 259只，因病扑杀958 696只。因此，国家农业部自2017年秋季在家禽上紧急启动H7N9流感强制免疫计划，要求统一使用重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)，对全国家禽(包括水禽)实施免疫。

西安罗曼实业有限公司是陕西省最大的种禽企业，常年存栏种禽15万只，公司按照《农业部关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》(农医发﹝2017﹞24号)要求，第一时间采购疫苗，及时对公司全部家禽进行了H7N9禽流感免疫预防。由于是首次使用H7N9禽流感疫苗，目前尚无家禽H7N9禽流感免疫效果田间试验报道。为及时了解家禽H7N9疫苗免疫后的抗体水平、评价H7N9流感疫苗的免疫效果，为家禽H7N9禽流感防控提供科学的依据，对西安罗曼实业有限公司的鸡群进行了H7N9流感疫苗免疫接种及H7免疫抗体检测。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1疫苗重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)，青岛易邦生物工程有限公司生产，批号171374503。

1.1.2试剂及器具0.01 mol/L pH7.2的PBS液;10 mL/L鸡红细胞悬液；禽流感病毒H7亚型抗原，哈尔滨维科生物技术开发公司产品，批号2017003；禽流感病毒H7亚型阳性血清，哈尔滨维科生物技术开发公司产品，批号2017003；96孔V型微量反应板，微量移液器。

1.2　方法

1.2.1疫苗接种用重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对西安罗曼实业有限公司的萨索种鸡进行免疫，每只鸡胸部肌肉注射0.5 mL，首次免疫后间隔1个月进行二次免疫，剂量同为0.5 mL，共计免疫接种146 800只。

1.2.2样品采集在西安罗曼实业有限公司萨索种鸡用重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗首免和二免后21 d,分别对鸡群进行翅静脉抽血。每次选5个鸡舍，每个鸡舍随机抽样20份，两次共采集血样200份，在实验室用离心机分离血清。

1.2.3检测方法按照国家标准(GB/T18936-2003)采用血凝和血凝抑制试验(HI试验)对血清样品进行H7流感抗体的检测[5]。

1.2.4判定标准

1.2.4.1免疫合格个体按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2003)，经过血凝抑制试验(HI)检测，对H7N9疫苗免疫的家禽，免疫21 d后HI抗体效价≥4 log2为免疫合格[5]。

1.2.4.2免疫合格群体对H7N9疫苗免疫的家禽，免疫合格个体数量占群体总数的70%(含)以上[5]。

2　结果

利用血凝和血凝抑制试验对西安罗曼有限公司5栋鸡舍200份样品进行了禽流感H7亚型抗体测，结果见表1和表2。

表1　鸡群首免H7N9流感疫苗后抗体检测结果

表2　鸡群二免H7N9流感疫苗后抗体检测结果

由表1可见，鸡群用H7N9疫苗第一次免疫后，其免疫抗体水平就达到7 log2～10 log2，平均为8.3 log2，合格率为100%。远远高于国家标准个体HI抗体效价≥4 log2、群体免疫合格个体数量占群体总数的70%(含)以上的标准。由表2中可见，鸡群用H7N9疫苗第2免疫后，其免疫抗体水平能达到7 log2～13 log2，平均为11.2 log2,合格率为100%。

二次免疫后抗体均比首次免疫后抗体有不同程度提高，提高幅度在1.5～4.1个滴度之间，平均提高2.9个滴度(图1)。

图1　不同鸡舍鸡群首免和二免后抗体水平比较

3　讨论

鸡群用重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗按标准剂量免疫一次，其H7N9流感抗体平均达到8.3 log2，合格率为100%。远远高于个体抗体效价≥4 log2，群体合格率≥70%的国家标准，说明用重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗对鸡群H7N9禽流感免疫效果确实有效。

同一个鸡场不同鸡舍种鸡在免疫接种同一种疫苗以后产生的抗体水平却不同，说明鸡群的日龄、健康情况、整齐度、生物安全措施等对鸡只产生免疫抗体有一定的影响[6]。

鸡群二免后抗体均比首免后抗体有不同程度提高，但不同鸡群提高幅度差异较大，首免后抗体较低的鸡群在二免后抗体水平提高幅度比首免抗体较高的鸡群提高的幅度大，这可能与抗体对疫苗抗原中和有关。也说明如果鸡群首免后抗体如果不理想，可以重新加强免疫一次，以达到提高抗体的效果。

对一般商品鸡群，用重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗免疫一次即可达到理想的抗体水平，但对种鸡而言，因为要考虑的后代的母源抗体水平，最好连续进行两次免疫，以使后代雏鸡也达到较高抗体水平，提高后代雏鸡对H7N9流感病毒的抵抗力。