渔药的给药方法与技术（4）

孟思妤 孟长明 陈昌福

（1.河南省新乡市康大消毒剂有限公司，453700；2.华中农业大学，430070）

其次，就是药敏片。药敏片材质的好坏，对药物稳定性和活性有很大影响。加工药敏片的滤纸一般是使用加厚型的滤纸，因为这种滤纸杂质少，对药物保存无太大影响。如果使用普通滤纸的话，被水浸润后会呈碱性，并且含有大量无机离子，所以使用普通滤纸加工的药敏片对药物有较大的影响。药敏片的pH一般要求为中性，这样才适合保持药物自身的特性。药敏片的厚度要求大约1.0mm，这样才有利于细菌的生长和药物的扩散速度。药敏片的直径在6.00～6.35mm之间，纸片的厚度和直径大小都会影响药敏试验的结果。

药敏片的片间差和质量好坏是决定药敏试验成败的关键。如果是从商店购买的药敏片，就可能会有抑菌环偏大或偏小的问题，纸片之间又存在很大的片间差。因此，纸片在用前必须检验其片间差和准确度，只有都达到标准要求后才能使用。同时要注意药敏片的保存，因为有些种类的药敏片，如青霉素类，在保存中因为受潮湿环境的影响容易降低其药物的活性。

其三，就是致病菌。由于各种致病菌对药物的敏感性不同，产生的抑菌环大小不同，如果供试致病菌不纯，试验中所产生的抑菌环大小与该菌种在纯培养状态下产生的抑菌环大小存在较大的差异，直接影响到判断结果的准确性。因此，需要对各种致病菌提纯后，分别进行不同的药敏试验。药敏试验时，需要将提纯后的菌种配制成一定浓度的菌液。NCCLS制定的标准是要求菌液浓度在1.5亿/mL左右。若菌液浓度过高，该菌会对所有药物产生耐药；反之，菌液浓度过低，该菌会对所有药物均敏感。最精确的方法是使用分光光度计测定新鲜培养物菌悬液的吸光度，确定菌液浓度。

药敏试验中要将菌液均匀地涂在培养基上，使细菌均匀分布，这样才能使试验结果不会出现较大的偏差。涂菌后15分钟才能贴药敏片。由于涂菌后，细菌要有一段时间的适应过程，但是时间不能过长，否则会使细菌产生耐药。贴药敏片时，每取一种药敏片必须烧一下镊子口，避免药敏片之间相互混淆，以提高药敏试验的准确性。药物杀灭细菌存在一定的量比，药敏试验培养基上细菌层越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。根据一种药物抑菌圈的有无或者大小，只能判断出该药对细菌有没有效果，但是，其敏感性的高低需要通过科学严谨的试验来确定。药物的敏感程度需要根据药敏试验的结果，并结合以上因素做综合分析，才能得出科学的结论，而片面地根据药敏圈的大小来决定敏感与否，结果就会不够准确。

其四，就是培养时间。对于水生动物致病菌一般培养温度和时间为在28℃条件下培养24～48小时为宜，有些抗菌药扩散速度比较慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的培养基平皿，先放置于4℃冰箱内2～4小时，使药敏片中的抗菌药预扩散，然后再放28℃温箱中培养，这样就可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。

表2 水生动物致病菌药敏试验的常用药物及其稀释液

最后，药敏试验后，应选择高敏药物用于疾病的治疗，也可选用两种药物协助使用，以减少耐药菌株的产生。在选择高敏药物时应考虑药物的吸收途径，因为我们药敏试验是药液直接和细菌接触，而在给水生动物用药的时候，必须通过机体的吸收才能使药物达到一定的效果，所以在实际用药时，高敏药物一定要配合适宜的给药方法，这样才会达到理想的治疗效果。

2）液体培养基稀释法

该方法适用于需氧及兼性厌氧的快速生长型致病菌，如肠杆菌科、葡萄球菌属和肠球菌属；嗜血杆菌属、奈瑟菌属、肺炎链球菌及其他链球菌等菌株，还适用于厌氧菌、酵母样真菌及支原体等。

根据每种药物（根据药物的性质不同，按照表2的方法进行稀释）、致病菌种类和感染部位的不同，选择不同的抗生素浓度稀释范围，用M-H肉汤以2n进行倍比稀释抗菌药物（如256、128、64、～0.125……）。