UPLC法测定金果饮咽喉片中两种成分含量

牛小花 陈洪源

（重庆三峡医药高等专科学校，重庆 404020）

金果饮咽喉片是由西青果、陈皮、胖大海等10味组成，具有清热利咽，宽胸润喉功效；急慢性咽炎、扁桃体炎见上述证候者，常用有保护声带作用。金果饮咽喉片质量标准收载于2015年版《中国药典》一部[1]，将橙皮苷作为质量控制指标，同时超高效液相色谱（UPLC）相比传统高效液相色谱（HPLC）法具有柱效高、分析时间短等优点[2-3]，为更好地控制该药品质量，本文采用UPLC建立同时测定金果饮咽喉片中没食子酸、橙皮苷含量的方法，以期为该药品质量控制提供一定参考。

1 材料

1.1 仪器

Waters ACQUITY UPLC H-CLASS 超高效液相色谱（美国Waters公司，QSM四元溶剂管理器，PDA eλ二极管阵列检测器，SM-FTN样品管理器，CH-A型柱温箱，Empower3色谱工作站）；BP211D电子天平（d=0.01 mg，德国Sartorius公司）。

1.2 药品与试剂

金果饮咽喉片（购自当地药店），没食子酸（上海金穗生物科技有限公司，纯度≥98.0%）、橙皮苷（成都曼斯特生物科技有限公司，纯度≥98.0%）；乙腈、磷酸均为色谱纯，甲醇为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流动相：A为乙腈，B为0.1%磷酸水；流速：0.40 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：30℃；进样量：1 μL；梯度洗脱程序，见表1。

表1 梯度洗脱程序

2.2 溶液的制备

（1）混合对照品溶液 取没食子酸、橙皮苷对照品适量[4-6]，置于50 mL量瓶中，用适量甲醇溶解后定容至刻度，摇匀后得每1 mL含没食子酸240 μg、橙皮苷80 μg的混合物对照品溶液。

（2）供试品溶液 取金果饮咽喉片约0.5 g，精密称定，置于25 mL量瓶中，加入20 mL甲醇溶液，超声处理30 min，放冷后用甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45 μm滤膜，取续滤液即得。

图1 超高效液相色谱图A.混合对照；B.供试品；C.阴性对照；1.没食子酸；3.橙皮苷

2.3 系统适用性和专属性试验

精密量取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，见图1。在该色谱条件下，各成分均能达到基线分离，分离度＞1.0，理论板数以橙皮苷峰计为不低于20 000，保留时间为7.154 min。结果表明，其他成分对测定无干扰。

2.4 线性关系考察

精密量取混合对照品溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到系列浓度的对照品工作溶液，依照“2.1”项色谱条件进样分析，以各对照品的峰面积积分值（y）对进样量（x，μg）进行线性回归，求得回归方程，结果表明2种成分在各自浓度范围内线性关系良好，见表2。

表2 回归方程和线性范围

2.5 定量限和检测限考察

取“（1）”项下混合对照品溶液适量，等倍逐步稀释，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。当信噪比为10∶1时，得定量限（LOQ）；当信噪比为3∶1时，得检测限（LOD）结果，见表3。

表3 定量限和检测限测定结果

2.6 精密度试验

取混合对照品适量，依照“2.1”项色谱条件进样分析，分别记录两种成分峰面积，计算RSD，结果没食子酸、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷RSD分别为1.81%、1.34%。结果表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取金果饮咽喉片6份，每份约0.50 g，分别置于25 mL量瓶中，加入20 mL甲醇溶液，超声溶解，用甲醇定容至刻度，摇匀后过0.45 μm滤膜，取续滤液，分别照“2.1”项色谱条件进样分析，分别记录两种成分峰面积，计算两种成分平均含量，计算RSD，结果没食子酸、橙皮苷平均含量分别为 11.22、2.93 mg/g，RSD 依次为 2.41%、1.94%，表明该方法重复性良好。

3 讨论与结论

本文考察了甲醇-水、乙腈-水及不同浓度磷酸水对两种成分分离度影响，结果乙腈-0.1%磷酸水作为流动相，两种成分分离效果最佳，峰型较好。同时本文考察了等度洗脱和梯度洗脱对两种成分分离影响，采用梯度洗脱，分析时间短，且两种成分均能与相邻色谱峰完全分离。

综上所述，本方法简便、准确、可靠，可用于金果饮咽喉片中没食子酸、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和黄芩苷的含量测定。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国中医药科技出版社，2015：1562.

[2] 单玲玲，靳光乾，刘善新.UPLC、RRLC及UFLC在中药质量控制中的研究进展[J].中华中医药杂志，2011，26（10）：2340-2344.

[3] 赵明霞，胡基埂，吴方千，等.超高压液相色谱系统的研究进展[J]. 分析试验室，2009，28（B12）：137-140.

[4] 赵建平.西青果中没食子酸的含量测定[J].广西中医学院学报，2003，6（4）：53-55.

[5] 林冬杰.HPLC法测定金果饮咽喉片中柚皮苷、橙皮苷、黄芩苷的含量 [J]. 亚太传统医药，2010，6（7）：25-27.

[6] 陈江涛，林冬杰.HPLC法测定金果饮咽喉片中柚皮苷、橙皮苷的含量 [J]. 中国药师，2010，13（9）：1275-1276.