VEGF在子宫肌瘤发生发展中的表达及其意义

陈芳芬 杨泽妹 许爱玲 吴海莉

子宫肌瘤属于一种性激素依赖性肿瘤，孕激素和雌激素与子宫肌瘤的发生和发展有密切的关联性[1]。一般情况下成人血管生成是正常症状，病理情况下异常血管生成导致一系列疾病的发生，包括肿瘤病理过程、肿瘤发生和转移等等[2]。VEGF作为人体重要的血管生长因子在各种肿瘤发生和发展中有重要的作用，目前有关研究显示VEGF在子宫肌瘤发病中作用较明显[3]。本文主要通过正常肌层组织和子宫肌瘤发病的对比，研究VEGF在子宫肌瘤中的作用，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

随机选取2015年5月至2016年10月期间在我院接受治疗的60例子宫肌瘤患者，年龄35～56岁，平均年龄(45.36±3.45)岁；病史15天到12年，平均病程(5.78±2.63)年；病灶直径3.8～10.5 mm，平均直径(5.02±0.45)mm；单发32例，多发患者28例；40例肌壁间肌瘤,20例其他肌瘤。所有入选患者均没有接受过药物治疗，患者没有严重的肝肾疾病、慢性疾病、传染性疾病等，术后根据患者子宫内膜病理情况分析患者月经周期的发生情况。

1.2 方法

1.2.1 收集标本 对患者行子宫肌瘤手术后，从患者病理组织中取3 cm3左右新鲜肌瘤组织，取正常肌层组织做对比分析，而后利用生理盐水清洗标本，并将清洗后的标本放入液氮中做冰冻储存。

1.2.2 仪器和试剂 选购Santa-Cruz公司生产的鼠抗人VEGF和VEGFR1、VEGFR2单抗；电泳、显影及转膜等常规配套设备选自Bio-Rad公司；PVDF膜选自Dupont公司；BCA蛋白定量试剂盒和HRP标记二抗购自上海康成生物有限公司；酶标仪可以选择购买Themo公司的仪器，而低温高速离心机可以从Beckman公司选购。

1.2.3 Westem blot检测 对患者标本实施检测之前，首先取事先准备好的100 mg液氮冻存的组织标本，并对标本实施剪碎处理，而后将其放入1×PBS缓冲液中实施洗涤处理，标本的洗涤次数一般为2次，洗涤完毕后可以加入1 ml总蛋白质提取液，将液体摇匀后可以放入冰浴中实施30 min的振摇处理。而后对溶液实施离心处理。离心处理需要在低温高速离心机下实施，离心处理环境为：4 ℃，离心速率：15 000 r/min，离心时间：20 min。而后可以将离心处理后的上清液稀释出来，将其放入-30 ℃环境中保存；取50 μg总蛋白样品液实施DSD-PAGE电泳处理，电镀处理完毕后对溶液实施转膜处理，而后做封闭处理，封闭后可以实施一抗、二抗处理。对PVDF膜实施处理的过程中采用KCTM显色处理，而后将检测的结果曝光在X胶片上，同时可以对样本实施显影、定影处理。处理完以上的步骤后可以对内参照鼠抗GAPDH单抗(1∶5000)。

1.3 统计学分析

本次研究所有数据分析均采用SPSS 20.0软件进行分析，计量资料用卡方值表示，t检验，如果P<0.05，表示2组数据之间的差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肌瘤组织和肌层组织中VEGF及其受体蛋白量表达

经过一系列的分析，发现子宫肌瘤组织中的VEGF及其受体蛋白均较正常子宫肌层高，差异有统计学意义，见表1。

2.2 VEGF、VEGFR1、VEGFR2与月经周期的关系分析

在子宫肌瘤组织中不管是分泌期还是增生期，患者的VEGF、VEGFR1、VEGFR2表达水平与正常肌层组织之间比较，均有明显的差异性(P<0.05)，见表2。

2.3 VEGF VEGFR1、VEGFR2蛋白表达关系

经过分析，发现患者子宫肌瘤组织中的VEGF、VEGFR1、VEGFR2表达水平和子宫肌瘤数量之间的关系呈现正比例关系，P<0.05；与子宫肌瘤体积、最大肌瘤直径没有明显的关系，P>0.05；而VEGFR1与VEGF、VEGFR2没有显著的关系，P>0.05，见表3。

表1 肌瘤组织和肌层组织中VEGF及其受体蛋白量表达比较(±s)

表1 肌瘤组织和肌层组织中VEGF及其受体蛋白量表达比较(±s)

组织例数VEGFVEGFR1VEGFR2肌瘤组织600．75±0．300．45±0．130．75±0．40肌层组织600．15±0．060．36±0．150．31±0．21t值/15．1913．5127．544P值/0．0000．0010．000

表2 VEGF及其受体蛋白表达与月经周期的关系(±s)

表2 VEGF及其受体蛋白表达与月经周期的关系(±s)

组织增生期VEGFVEGFR1VEGFR2增生期VEGFVEGFR1VEGFR2肌瘤组织0．78±0．260．44±0．130．66±0．360．67±0．360．46±0．110．85±0．48肌层组织0．15±0．170．35±0．150．29±0．140．13±0．070．38±0．130．33±0．28t值15．7093．5127．42011．4053．6397．248P值0．0000．0010．0000．0000．0000．000

3 讨论

子宫肌瘤是女性生殖系统比较常见的一种良性肿瘤，多发于30岁以上的妇女，发病机制尚不清晰[4]。临床上一般采用手术切除治疗，缺乏有效的非手术治疗方法。所以临床上子宫肌瘤的治疗一般采用手术治疗，但是手术创伤比较大，容易产生并发症。有关研究发现子宫肌瘤的发生与饮食有一定的关系，而且患者可能存在免疫功能改变，比如NK细胞活动比较低[5]。从遗传性的角度分析，7号染色体长壁的缺失与子宫肌瘤系统发生有明显的关系。也有些学者认为子宫肌瘤疾病与卵巢性激素依赖性表现，而且疾病与血管生成有重要的关联性[6]。

表3 VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表达关系(±s)

表3 VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表达关系(±s)

项目VEGFtPVEGFR1tPVEGFR2tP肿瘤数量/个 ≥24．21±0．502．4000．0262．37±0．540．5570．2513．63±0．536．2840．036 <21．22±0．512．28±0．551．04±0．52体积/mm3 ≥300130．53±10．321．3090．315126．89±10．46-0．3660．542128．45±10．310．1230．525 <300120．64±10．63123．50±10．57125．56±10．20直径/mm ≥57．35±1．541．0580．3557．11±1．380．1350．5416．97±1．50．0320．305 <56．86±1．556．42±1．596．58±1．29

VEGF是人体内的一种比较特殊的血管内皮生产因子，这种因子在人体内可以分为多种类型结构，而且能够促进血管生成。VEGFR在通常情况下属于膜蛋白受体，在人体结构组织中可以将VEGFR可以分为3种亚型，这3种亚型分别为VEGFR1、VEGFR2和VEGF,其中VEGFR1和VEGFR2相互结合发展相当于EGF-A特异性结合，能够发挥很多功能作用，比如他们联合应用能够促进人体内皮细胞分裂增长，另外还能够有效促进新生血管的形成，从而促进人体血管通透性的提高[7]。一般情况下血管生长是肿瘤发展的一个重要条件，同时也是促进肿瘤发展的一个重要环节。沈杨等[8]研究发现，没有人体血液的供养，人体内的实体血液供养仅仅只能限制在1～2 mm范围内。可见VEGF属于人体比较重要的一个促进因子，而且这种因子在肿瘤发生、发展中也有重要的作用，从这个方面进行分析发现VEGF在很多肿瘤组织血管生成中都有重要的表达作用[9]。VEGF在肿瘤细胞中的分泌形式也不同，包含2种分泌形式，分布为自分泌和旁分泌，子宫肌瘤的生长和发展也能够促进血液供应，同时也能够促进局部血管的生长和发展。

我国临床中研究VEGF及其受体在子宫疾病中作用报道并不多，有关专家研究发现[10]，人体血管内皮细胞增殖指数在正常人体组织和子宫肌瘤患者的病理组织中有更高的表达。另外，有关研究也发现20例子宫肌瘤组织中有16例患者肌瘤组织中VEGF表达明显升高，而身体其他部位的正常组织VEGF表达并不明显。Dai等[11]研究发现，与其他零星发病家族比较肌瘤组织中的VEGF的表达率比发病率较高的子宫肌瘤家庭患者中的表达率要高很多，前者表达率是28.0%，后者表达率为64.0%。本次研究结果显示VEGF蛋白表达水平在肌瘤中的基层值中表达高很多，而且不会受患者月经周期变化的影响。这个结果说明VEGF高表达在人体中的变化具有持续性特点，而且这种高表达和月经周期并没有太大的关联性。这个研究结果还说明VEGF表达量和肌瘤数量之间的关系为正比例关系，说明VEGF与子宫肌瘤病变程度之间有内在联系性。Scharpfeneeker等[12]在子宫肌瘤组织中检测出VEGFR1、 VEGFR2 的表达率分别为80%、33.3%。

本次研究结果显示VEGFR1、VEGFR2在正常组织中的表达比较低，而在肌瘤组织中的表达比较高，说明VEGFR在肌瘤组织中受到机制调控的影响比较大，同时也说明了VEGFR与VEGF的表达增强是相对应的关系，所以说VEGFR同样对肌瘤的发病有重要的参与作用[13]。在月经周期中VEGF受体不管是在增生期还是在分泌期表达水平明显高于正常肌层组织。在研究的过程中我们看到VEGF受体在肌瘤组织中表达比较高，而且VEGFR2表达水平明显高于VEGFR1，说明VEGFR2在肌瘤组织中的表达比较活跃，从这个方面来看VEGFR2表达水平与子宫肌瘤病变之间联系更加紧密。

综上所述，VEGF及其受体对子宫肌瘤血管生成均发挥着重要的作用，表现为VEGF及其受体在子宫肌瘤组织中有明显的高表达。所以，在子宫肌瘤的治疗中如果能够研制出VEGF及其受体蛋白拮抗剂，就能够很好地起到干扰子宫肌瘤的作用，促使子宫肌瘤逐渐萎缩和消亡，有效提高子宫肌瘤治疗效果。

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