前列腺液体中各指标对早期癌性诊断标志物筛选的临床研究

贺 凯 王耀东 胡海燕 任碧华 袁光亚

目前，前列腺癌的早期筛查手段较为单一、筛查效果并不理想、临床应用还有一定不足[1]。因此，研究前列腺癌早期诊断的标志物很有必要，目前国内许多研究选取了血液为样本，也有部分学者利用一些蛋白质分析技术进行研究，但这些研究都存在成本过高、成分复杂、难以推广、特异性低等缺点[2]。因此一种新的更为高效、便捷、特异性强、成本较低的前列腺癌早期诊断的标志物筛选研究方式亟待提出。前列腺液是一种大量含有前列腺和精囊的细胞、蛋白的分泌物[3-4]，取材方便，成本较低，便于临床研究[5]，因其成分来源只有前列腺和精囊，很容易识别标志物，而精囊的恶性肿瘤发病率非常低，可以视为肿瘤标志物来源基本都是前列腺[6-7]。只要从前列腺液中筛选到合适的肿瘤标志物，不仅应用前景十分广，还有利于临床进一步研究推广。因此本研究选取了前列腺液各指标中4种较有研究前景的蛋白质(α-甲酰辅酶A消旋酶、核基质蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白)进行检测，进一步筛选出最合适的标志物，旨在提高前列腺癌早期诊断率，为临床提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

A组为前列腺癌患者组：2015年12月至2016年12月期间在本院治疗，经检查明确诊断为前列腺癌的患者77例，平均年龄(51.52±2.74)岁，BMI(21.2±1.6) kg/m2。B组为同期在医院体检的非前列腺癌患者，平均年龄(48.26±2.14)岁，BMI(23.1±1.7) kg/m2，无过往病史且未服用影响体检的药物，共28例。所有入选B组的患者排除前列腺方面的隐患以及不可抗因素所引起的前列腺损害。2组患者在平均年龄、BMI上差异没有统计学意义(P>0.05)。

1.2 纳入标准及排除标准

前列腺癌组纳入标准[8]：经检查确诊为前列腺癌患者；无器官移植、其他恶性肿瘤、自身免疫性疾病；无免疫功能缺陷；HIV抗体均阴性；患者同意参与此次研究。前列腺癌组排除标准[9]：除前列腺癌外患者患有其它较为严重的疾病；患者患有自身免疫病或免疫失调；HIV抗体为阳性；患者不愿意配合术后随访；患者不同意参与此次研究。

1.3 研究方法

获取前列腺液：通过按摩的方式分别获取2组患者的前列腺液，约1 ml，制作为标本存放。使用夹心法酶联免疫吸附测定(ELISA)检测标本[10]。

A组根据病理结果分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个级别；按照骨扫描结果将A组分为骨转移组和无骨转移组。

1.4 实验步骤

将A、B组前列腺液标本用离心机处理后按一定顺序分别置100 μl于酶标板空白孔，标记编号。分别在2组孔中加入50 μl酶标记液，在36 ℃条件下进行60 min左右的反应。稀释洗涤后，加入呈色剂，避光反应15 min左右。各组均加入50 μl终止液，轻微震荡至变色，将标本置于标仪上读取OD值，并计算出各个蛋白的浓度[11]。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 2组各蛋白平均浓度、阳性率对比

核基质蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白的平均浓度2组差异有统计学意义，α-甲酰辅酶A消旋酶的阳性率2组差异有统计学意义(P<0.05)；其余指标差异均没有统计学意义(P>0.05)。可以认为α-甲酰辅酶A消旋酶具有最高的阳性率和敏感度。见表1。

表1 2组各蛋白平均浓度、阳性率对比

2.2 前列腺癌各组别之间α-甲酰辅酶A消旋酶、核基质蛋白、胸腺素B15、Survivim蛋白平均浓度对比

不同级别组别之间α-甲酰辅酶A消旋酶、核基质蛋白、Survivim蛋白平均浓度对比，差异没有统计学意义(P>0.05)；骨转移组与无骨转移组之间α-甲酰辅酶A消旋酶、核基质蛋白、Survivim蛋白平均浓度对比，差异没有统计学意义(P>0.05)。胸腺素B15在不同级别及骨转移与否中的平均浓度均有统计学差异(P<0.05)。见表2。

3 讨论

前列腺癌是当前威胁中老年男性健康最大的恶性肿瘤之一。据国外报道，死亡率约为12%[12]。近年来，随着人口的发展和社会的整体老龄化，我国前列腺癌发病率不断提高。由于肿瘤的特点，早期癌性难以及时发现治疗，导致了患者死亡率大大增加[13-14]。为了解决这一问题，许多学者提出了标志物诊断想法。近年来针对基因、抗原、染色体标记的研究层出不穷，但这些研究或多或少都存在着成本较高、取材不易、操作复杂、难以推广等缺点[15-16]。因此本次研究选取了取材方便、成本较低、操作比较简便的前列腺液作为研究材料。

表2 前列腺癌各组别之间α-甲酰辅酶A消旋酶、核基质蛋白、胸腺素B15、Survivim蛋白平均浓度对比

注：a表示与Ⅰ～Ⅱ组对比，P<0.05；b表示与Ⅱ～Ⅲ组对比，P<0.05；c表示与Ⅲ～Ⅳ组对比，P<0.05。t、P为骨转移与否间的比较。

本研究选取了前列腺液各指标中4种较有研究前景的蛋白质(α-甲酰辅酶A消旋酶、核基质蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白)进行检测，进一步筛选出最合适的标志物。通过A组(前列腺癌患者)和B组(前列腺正常体检人群)各蛋白平均浓度、阳性率对比，在阳性率上，α-甲酰辅酶A消旋酶差异明显具有统计学意义(P<0.05)；核基质蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白差异均没有统计学意义(P>0.05)；可以认为α-甲酰辅酶A消旋酶具有最高的阳性率和敏感度。根据病理结果、骨扫描结果将A组分为Ⅰ～Ⅱ组、Ⅱ～Ⅲ组、Ⅲ～Ⅳ组、Ⅳ及以上组；骨转移组、无骨转移组。在各组别之间对比了4种蛋白的平均浓度，发现在不同级别及有无骨转移之间平均浓度对比上，α-甲酰辅酶A消旋酶、核基质蛋白、Survivin蛋白平均浓度对比差异没有统计学意义(P>0.05)；胸腺素β15平均浓度对比差异明显有统计学意义(P<0.05)。出现这一结果的原因可能是：α-甲酰辅酶A消旋酶在癌细胞过氧化物酶和线粒体中活性较强，而胸腺素β15与肌动细胞息息相关，能够体现不同病情之间的变化。

综上所述，α-甲酰辅酶A消旋酶具有最高的阳性率和敏感度，胸腺素β15浓度随着病情的分级升高或骨转移进程而增高，能够一定程度上体现出患者病情程度。2种蛋白可结合应用于临床前列腺早期癌性诊断。

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