乙肝五项、病毒前S1抗原、病毒DNA联合检测对乙肝的诊断价值*

金娴 祝玲玲 黄剑 付小义

乙型肝炎是指患者通过血液、母婴或者性传播等方式感染乙肝病毒，临床检测病毒感染阳性、伴有乏力、畏食、肝区疼痛等症状的一种疾病[1]，在我国发病率极高，其病毒携带者占人口总数近10%[2]。临床上对其诊断主要通过乙肝五项即①乙肝表面抗原（HBsAg）、②乙肝表面抗体（HBsAb）、③乙肝e抗原（HBeAg）、④乙肝e抗体（HBeAb）、⑤乙肝核心抗体（HBcAb）的阳性指标组合情况和病毒DNA（HBV-DNA）的基因拷贝数作为诊断病毒感染和繁殖情况的依据。但由于乙肝五项的不同组合方式极易受治疗药物和病毒变异的影响，且核心抗原在临床检测中不易被检测出，因此降低了其判断乙肝病毒感染和复制繁殖情况的准确率[3]。随着研究的推进，前S1抗原（Pre-S1）在临床上对乙肝患者的诊断价值逐步受到人们的重视。前S1抗原是乙肝病毒外膜蛋白的主要成分之一，介导病毒对肝脏细胞表面的附着，其在病毒感染、复制繁殖和刺激免疫反应发生等方面均发挥着重要作用[4]。而HBV-DNA作为病毒感染和复制的金标准，临床上用其作为乙肝诊断和判断疾病情况的有力证据。为此，本研究旨在分析乙肝五项、病毒前S1抗原及病毒DNA的联合检测对诊断乙型肝炎的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取本院2016年3月-2017年10月接诊的301例乙肝患者为研究对象，纳入标准：（1）患者临床症状和实验室检查结果均符合乙肝的诊断；（2）所有患者均自愿参加研究，并签署知情同意书。排除合并肿瘤、心肺等器官功能异常、肝功能障碍和免疫系统缺陷者。其中男174例，女127例，平均年龄（35.6±6.7）岁；乙肝表面抗原阳性者289例，阴性者12例。该研究已经医院伦理学委员会批准。

1.2 方法 患者入院后空腹采集静脉血3 mL，离心5 min后提取上清液于-20 ℃条件下保存。应用酶联免疫分析法（ELISA法），按照试剂盒（上海科华生物科技有限公司和上海阿尔法生物技术有限公司）说明书对各个实验步骤进行严格操作，利用雷杜RT-6000酶标仪测定乙肝五项和病毒前S1抗原水平；按照试剂盒（湖南圣湘生物科技有限公司）说明书，利用美国ABI公司的ViiA7DX实时荧光定量PCR仪测定乙肝病毒DNA载量。

1.3 判断标准 判断标准均严格按照各试剂盒说明书，用酶标仪测定吸光值，先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。病毒前S1抗原的临界值=2.1×阴性对照平均OD值，所有阴性对照、阳性对照和样本的读数值减去空白对照孔读数即为计算值，测试样本的计算值大于或等于临界值则为阳性；测试标本的计算值小于临界值为阴性。乙肝表面抗原的临界值=2×阴性对照平均OD值，样本OD值/临界值≥1者为乙肝表面抗原阳性，＜1者为乙肝表面抗原阴性。乙肝表面抗体的临界值=2.1×阴性对照平均OD值，样本OD值/临界值≥1者为乙肝表面抗体阳性，＜1者为乙肝表面抗体阴性。HBeAg的临界值=2.1×阴性对照平均OD值，样本OD值/临界值≥1者为HBeAg阳性，＜1者为HBeAg阴性。乙肝e抗体临界值=0.2×阴性对照平均OD值，样品OD值/临界值≤1者为乙肝e抗体阳性，＞1者为乙肝e抗体阴性。乙肝核心抗体临界值=0.2×阴性对照平均OD值，样品OD值/临界值≤1者为乙肝核心抗体阳性，＞1者为乙肝核心抗体阴性。病毒DNA载量＜1×102IU/mL，则将其判定为乙肝病毒DNA阴性，≥1×102IU/mL则判定为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 21.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组合下PreS1Ag阳性率与HBV-DNA阳性率比较情况 在所有患者中PreS1Ag阳性率与HBV-DNA阳性率比较，差异有统计学意义（ 字2=29.491，P＜0.05）；①③⑤阳性组和①④⑤阳性组的PreS1Ag阳性率与HBV-DNA阳性率比较，差异均有统计学意义（ 字2=14.994、17.577，P＜0.05）；①⑤阳性组、①②④⑤阳性组、①④阳性组、①阴性组的PreS1Ag阳性率与HBV-DNA阳性率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 不同组合下PreS1Ag阳性率与HBV-DNA阳性率比较情况

2.2 HBsAg阳性及阴性患者的HBeAg、PreS1Ag及HBV-DNA阳性率比较 在HBsAg阳性组，HBeAg、PreS1Ag和HBV-DNA阳性率比较，差异有统计学意义（ 字2=142.187，P＜0.05），两两比较发现，HBeAg阳性率低于PreS1Ag阳性率和乙肝DNA阳性率（ 字2=46.806、141.543，P＜0.05），PreS1Ag阳性率显著低于 HBV-DNA 阳性率（ 字2=29.508，P＜0.05）；在HBsAg阴性组，HBeAg阳性率及PreS1Ag阳性率均为0，HBV-DNA阳性率为16.7%。见表2。

表2 HBeAg、PreS1Ag及HBV-DNA检出率比较

2.3 HBV-DNA阳性组和阴性组中HBeAg和PreS1Ag比较 在HBV-DNA阳性组中，PreS1Ag的阳性率高于HBeAg的阳性率，差异有统计学意义（ 字2=20.090，P＜0.05）；在 HBV-DNA 阴性组中，HBeAg的阴性率高于PreS1Ag的阴性率，差异有统计学意义（ 字2=37.792，P＜0.05），见表 3。

表3 HBV-DNA阳性组和阴性组中HBeAg和PreS1Ag比较

2.4 HBV-DNA不同载量组中HBeAg和PreS1Ag阳性率比较 HBV-DNA病毒载量≥1×102IU/mL则判定为阳性，在HBV-DNA阳性组中，在5×102～1×107随着病毒载量的增高，HBeAg和前S1抗原阳性率均增高，在病毒载量≥108时，HBeAg和PreS1Ag阳性率并未随着病毒载量的增高而增高，而是表现为下降，见表4。

表4 HBV-DNA不同载量组中HBeAg和PreS1Ag阳性率比较

3 讨论

乙肝病毒是一种极小的嗜肝DNA病毒，其入侵人体后在肝细胞内大量繁殖，并通过细胞免疫和体液免疫使机体免疫功能紊乱，进一步加重病情[5]。临床上常用检查的乙肝五项并不是病毒的致病物质或者传染物，即不是活的病毒，因此其并不能量化病毒在肝细胞内的繁殖情况[6-7]。目前临床上诊断乙型肝炎常在乙肝五项基础上配合检查病毒DNA拷贝数情况和病毒前S1抗原情况。病毒DNA 是病毒的遗传物质，其在临床上是判断病毒复制的金标准，其在临床经常用于对慢性乙肝进行诊断和分类、监测治疗情况和判断预后[8]。S1是乙肝病毒外膜蛋白的成分之一，在病毒入侵肝脏细胞中发挥着重要作用，人体在感染乙肝病毒后最早的免疫反映就是针对病毒前S1抗原的，其出现在病毒感染初期[9]。

本研究结果显示，在所有患者中乙肝病毒PreS1Ag阳性率和HBV-DNA阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），①③⑤阳性组和①④⑤阳性组的PreS1Ag阳性率和HBV-DNA阳性率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），乙肝病毒PreS1Ag与HBV-DNA不具有一致性，这与文献[10-12]报道不一致，考虑是由于病例选择及使用高灵敏度的乙肝病毒DNA检测试剂所致，本研究中有43例患者的HBV-DNA载量在（1～5）×102IU/mL，这在检测下限为5×102IU/mL的检测试剂中是不能被检出而被判定为阴性病例，本研究所使用的试剂灵敏度为1×102IU/mL，（1～5）×102IU/mL 的病毒载量也能被检出，因而HBV-DNA阳性率高于PreS1Ag的阳性率，两者不具有一致性。①⑤阳性组、①阴性组的HBV-DNA阳性率和PreS1Ag阳性率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），这与文献[1-2]报道一致，考虑与病例选择有关。①④阳性组、①②④⑤阳性组的HBV-DNA阳性率和PreS1Ag阳性率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），但是这两种模式少见，因样本数较少，HBV-DNA阳性率和PreS1Ag阳性率关系需扩大样本深入研究才能明确。在①②④⑤阳性组中，虽然出现了“保护性抗体”，但仍有HBV-DNA及PreS1Ag检出，说明乙肝表面抗体阳性并不表示没有乙肝病毒复制或者传染性消失，也有可能是处于病毒清除过程中，或者是由于基因突变所致。

在单纯对HBsAg阳性和阴性患者比较中发现，PreS1Ag阳性率和HBV-DNA阳性率均明显高于HBeAg阳性率（P＜0.05），说明了PreS1Ag和HBV-DNA在于乙肝抗原相关性方面高于HBeAg，也进一步证实了国内外关于HBeAg确实是临床上判断病毒在宿主体内复制并具有传染性的重要血清学指标，但又不能单纯以HBeAg阳性与否作为判断HBV感染、传染性及HBV是否在体内复制的指标[13-14]。在以HBV-DNA阳性或阴性作为参照的研究中发现，在HBV-DNA阳性患者中，PreS1Ag阳性率高于HBeAg阳性率（P＜0.05）；在HBV-DNA阴性患者中，HBeAg阴性率高于PreS1Ag阴性率（P＜0.05），进一步说明了在乙肝e抗体阳性患者血清中，PreS1Ag阳性在一定程度上能够代表病毒DNA的复制；另外，临床上对乙肝患者仅进行“乙肝五项”的检查是不够的，对PreS1Ag进行检查能够弥补由于其他原因如病毒变异导致的HBeAg阴性患者的漏诊[15]。同时文献[16]研究指出，PreS1Ag主要存在于患者乙肝病毒表面，提示机体内只要有乙肝病毒就会存在PreS1Ag。国内文献[17]研究认为，病毒PreS1Ag能够加强HBV-DNA和HBeAg临床检查的准确率，并且PreS1Ag出现在病毒感染的最早期，可以用于疾病的早期诊断和传染源的早期隔离，极大地降低乙型肝炎的传染性。

另外，在HBV-DNA阳性患者血清中，病毒载量在5×102～1×107时，HBeAg阳性率及PreS1Ag阳性率随着病毒载量的增高而增高，这与国内文献[14]研究结果一致，提示HBeAg及PreS1Ag是病毒复制的一项重要指标，说明HBeAg与HBV-DNA在一定程度上具有相关性，分析其原因可能是在病毒DNA高度复制，病毒大量繁殖时，其HBeAg相关基因高度表达[18]。HBeAg检查呈阳性说明乙肝病毒在体内的传染性较强，而HBeAg转阴在一定程度上提示乙肝病毒的传染性有下降趋势，但并不代表病毒DNA也转阴，仍需加强治疗和控制，国内文献[15，19]也证实了这一点。病毒载量≥108时，HBeAg阳性率及PreS1Ag阳性率并未随着病毒载量的增高而增高，反而表现为下降的趋势，考虑是抗原抗体反应过程中抗原过剩造成的后带现象，从而表现为假阴性的结果，这也是ELISA检测方法的局限性。

病毒DNA是判断病毒是否复制的金标准，实时荧光定量PCR检测技术能够直接量化病毒载量，其在体内消长情况直接动态反映了病毒复制情况，并能够比较直观地监测治疗过程、判断抗病毒效果并指导治疗方案的制定[16-17]。

综上所述，在当前的检测条件下，乙肝五项、PreS1Ag能够在一定的程度上说明乙肝病毒感染和DNA的复制水平，但是联合测定乙肝五项、PreS1Ag和乙肝病毒DNA水平有利于更早更准确诊断出乙肝病毒的感染，能够为临床判断病情和评估疗效提供参考依据，并对疾病的早期诊断和传染源的早期隔离具有极大的促进作用。

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