益气养阴活血方对2型糖尿病肾病大鼠肾功能的影响*

顾 超 王 磊 杜月光 柴可夫

浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

本实验拟通过观察益气养阴活血方对自发性2型糖尿病肾病(diabetic kidney disease，DKD)大鼠空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、总胆固醇（CHOL）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）、24h尿蛋白定量（UP）以及TNF-α（肿瘤坏死因子-α）、TGF-β1（转化生长因子-β 1）指标变化的影响，并运用动物实验的方法对其疗效进行验证。

1 材料与方法

1.1 药物：益气养阴活血方主要组成药物为生黄芪、灵芝、女贞子、葛根、丹参、制大黄6味中药，由浙江中医药大学滨江中医门诊部提供。

1.2 动物模型的建立及分组：健康雄性Zucker糖尿病肥胖(zucker diabetic fatty，ZDF)大鼠 40只，体重250±10g，健康雄性ZL大鼠8只，体重180±10g，均购自北京维通利华生物公司，实验动物生产许可号：SCXK(京)2002-0003，由浙江中医药大学动物实验中心饲养及管理。将40只ZDF大鼠适应性喂养1周后，改用高脂高糖饲料喂养3周。尾静脉取血，血糖高于16.7mmo1/L的为模型成功。称重，按随机数字表分为：模型组、中西医结合治疗早期干预组（简称早期干预组）、益气养阴活血方治疗组（简称中药组）、西药治疗组（简称西药组）以及中西医结合治疗组（简称中西医组）。8只ZL大鼠为正常对照组。以上各组大鼠均分笼饲养，自由饮水及进食。实验期间除正常对照组大鼠以普通饲料喂养，其余各组均以高糖高脂饲料喂养，实验期间大鼠饲养环境为温度22±1℃、湿度59%～61%，12h交替照明，大鼠自由饮水，摄食。分组后，各组大鼠进行相对应干预治疗：正常对照组不加以任何处理因素；糖尿病模型组每日灌2ml生理盐水；中药组予以益气养阴活血方灌胃给药，按体表面积换算，以等效剂量计算大鼠用药量，每天灌胃1次；西药组予以长效胰岛素(鱼精蛋白锌胰岛素)每日皮下注射，15U/kg，使空腹血糖接近正常(6～8mmo1/L)；中西医组在益气养阴活血方灌胃给药同时，予以长效胰岛素(鱼精蛋白锌胰岛素)每日皮下注射。早期干预组处理同中西医组，时间早于其他各组3周进行。实验期间每周测量每组实验大鼠血糖并予以记录；用代谢笼每周收集各组大鼠尿液进行24h尿蛋白定量检测并记录。实验大鼠从糖尿病肾病的发生到实验结束，经历了早、中、晚3期的过程。

1.3 标本收集与处理：整个实验共连续进行11周，其中早期干预组为干预11周，其余各组干预8周。处死前24h用大鼠代谢笼收集24h尿标本，禁食8h后用10%水合氯醛3.5mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉后腹主动脉取血，颈椎脱臼处死大鼠。

1.4 生化指标检测及方法：FBG、Scr、BUN、CHOL、HDL-C、LDL-C、TG用全自动生化分析仪测定，UP用放免法测定；TNF-α、TGF-β1用ELISA检测，试剂盒由上海博谷科技有限公司提供，操作按说明书。

1.5 统计学方法：选择SPSS22.0统计软件，计量资料采用均数±标准差（-x±s）表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 实验结果

2.1 各组大鼠的一般情况：正常组大鼠饮食正常，反应敏捷，被毛有光泽，肌肉丰满，身无伤痕，尾不弯曲，天然孔无分泌物，粪便成麦粒状，尿量正常。模型组、早期干预组、中药组、西药组以及中西医组适应性喂养时状态与正常组大鼠基本相同。高脂高糖饲料喂养3周后，均出现明显的多饮多食多尿症状，并逐渐出现粪便溏泻，被毛偏枯，精神萎靡，反应迟钝，懒倦少动。实验最后1周，与正常组相比，模型组大鼠体型明显肥胖，皮下脂肪偏多，肌肉偏少，活动减少，被毛干枯无光泽，灌胃时几乎不挣扎，粪便稀溏；各治疗组大鼠较对照组情况均有改善，精神较好，灌胃治疗时偶有挣扎现象，被毛稍有光泽，粪便时有成型。

2.2 益气养阴活血方对DKD大鼠FBG的影响：结果如表1所示，治疗处理前，模型组及各治疗组与对照组比较，FBG均显著偏高（P＜0.05）。治疗处理后，与模型组比较，除中药组FBG水平差异无统计学意义（P＞0.05）外，其余各组FBG水平均显著降低（P＜0.05）。

2.3 益气养阴活血方对DKD大鼠尿蛋白的影响：结果如表2所示，治疗处理前，模型组与对照组比较，UP水平显著偏低（P＜0.05）；各治疗组与对照组比较，UP水平差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗处理后，模型组与对照组比较，UP水平显著上升（P＜0.05）；与模型组比较，各治疗组UP水平显著上升（P＜0.05）。

表1 各组大鼠空腹血糖变化（-x±s，mmol/L）

表2 各组大鼠尿蛋白含量变化（-x±s，mg/L）

2.4 益气养阴活血方对DKD大鼠TG、CHOL、HDL-C、LDLC的影响：结果如表3所示，与对照组比较，模型组TG、CHOL、HDL-C、LDL-C水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，各治疗组TG水平显著升高（P＜0.05）；各治疗组CHOL、LDL-C水平差异无统计学意义（P＞0.05）；除中药组HDL-C水平差异无统计学意义（P＞0.05）外，其余各组HDL-C水平均显著降低（P＜0.05）。

表3 各组大鼠血脂变化（-x±s，mmol/L）

2.5 益气养阴活血方对DKD大鼠肾功能的影响：结果如表4所示，与对照组比较，模型组BUN、Scr水平差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组比较，除西药组BUN水平显著降低（P＜0.05）外，其余各组BUN水平差异无统计学意义（P＞0.05）；除中药组Scr水平差异无统计学意义（P＞0.05）外，其余各个治疗组Scr水平均显著降低（P＜0.05）。

表4 各组大鼠肾功能变化（-x±s，mmol/L）

2.6 益气养阴活血方对DKD大鼠TNF-α、TGF-β1的影响：结果如表5所示，与对照组比较，模型组TNF-α、TGF-β1水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，中药组TNF-α、TGF-β1水平显著升高（P＜0.05），其余治疗组TNF-α、TGF-β1显著降低（P＜0.05）。

表5 各组大鼠TNF-α、TGF-β1水平变化（-x±s，pg/ml）

3 讨论

糖尿病肾病是糖尿病最常见且难治的慢性微血管并发症，是糖尿病患者死亡的主要原因之一。发病之初以微量白蛋白尿为主，随着病情的进展，终将导致大量蛋白尿、肾功能衰竭、尿毒症[1]。祖国医学并无糖尿病肾病的病名，根据其临床表现及病情发展，现代医家将其归属于“消渴”“水肿”“尿浊”“关格”等范畴。多数医家认为，糖尿病肾病最基本的病机是本虚标实，虚、痰、瘀贯穿本病的始终，总属于本虚标实之证，主要与禀赋不足、情志不遂、素体阴虚、劳欲过度等有着密切的关系。目前，众多学者认为DKD的病位在肾，肾元受损、脉络瘀阻贯穿始终，即认为肾虚血瘀是DKD的主要病机[2]。DKD患者由于长期处于高糖高渗利尿状态，血液浓缩，血流缓慢，血液黏稠度增加，加之代谢紊乱，存在高脂血症，使血液流变学异常，微循环障碍，血液呈浓、凝、黏聚状态，符合中医学中“瘀血”的临床特征；而DKD的重要病理变化即不同程度的肾小球、肾小管硬化、肾间质纤维化，此亦属中医学中“瘀血”范畴[2]。因此，治疗当以益气养阴、活血化瘀通络为法。

益气养阴活血方主要由黄芪、女贞子、葛根、丹参、制大黄组成。黄芪补中益气；女贞子擅补肝肾之阴；葛根生津，又能升发清阳。三药合用，益气养阴，补而不滞。丹参凉血祛瘀；制大黄活血化瘀，推陈出新。两者均清热凉血，以除燥热之标。全方针对糖尿病气阴两虚之本以及逐渐加重的瘀血之标，标本兼治，攻补兼施。采用Zucker糖尿病肥胖大鼠模型，能够更好地模拟人类2型糖尿病肾病疾病的特征和病程进展。

本实验结果显示，在DKD发生时存在糖脂代谢异常、肾功能损伤、TGF-β1和TNF-α异常，且后二者之间及与糖脂代谢水平、肾脏损伤密切相关。两者共同参与引起了糖脂代谢失常及早期肾脏损伤，且加剧并最终导致DKD的发生。本实验同时显示，益气养阴活血方、胰岛素可在不同程度上改善DKD大鼠的血糖血脂、BUN、Scr以及TNF-α、TGF-β1水平，其中以中西医组和早期干预组在其中多个项目水平统计学差异明显，说明益气养阴活血方可以改善DKD大鼠糖脂代谢水平且对肾纤维化的发展具有一定的延缓作用。其机制可能为服用益气养阴活血方后TNF-α、TGF-β1下降，减少了高毒性自由基的形成，阻碍了脂质的过氧化及细胞损伤，血脂水平下降；阻碍TGF-β1/Smad通路，减少肾系膜细胞、肾小管上皮等间质细胞中Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白及层黏连蛋白等合成，从而延缓肾纤维化的进程。综上所述，益气养阴活血方具有一定的改善TNF-α、TGF-β1水平进而改善糖脂代谢的功效；改善TNF-α、TGF-β1水平，进而调整糖脂代谢水平，有可能成为治疗DKD、改善肾功能、延缓肾纤维化的新途径。

[1]张晓明,贾素庆.益气固本汤为主治疗糖尿病肾病63例[J].浙江中医杂志,2016,51(8)：582.

[2]吕仁和,赵进喜.糖尿病及其并发症中西医诊治学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2009：261,590-616.

[3]傅珍春,徐刚,黄妙珍.三七总苷对不同阶段糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究[J].浙江中医杂志,2016,51(5)：335-337.