保健酒中酞酸酯污染物的气相色谱-三重四极杆质谱法测定

马春艳,路惬楠,段 琼,胡伟杰,封淑华，刘雪莉

(河北省药品检验研究院，河北 石家庄 050011)

酞酸酯类化合物(Phthalate esters, PAEs，即邻苯二甲酸酯)，又被称为塑化剂、增塑剂，是一种增加材料柔软性或使材料液化的添加剂，这类塑化剂不得添加在食品里[1]. PAEs及其代谢产物和降解产物不但会损伤人体肝肾等器官，还会影响体内荷尔蒙含量，长期在体内积累还可能会导致畸形、癌变和细胞突变[2-4].

保健酒是以白酒或黄酒为主要原料，加入各种中药材(海马、鹿茸、人参、海参、玛咖等)，长时间浸泡、提取、过滤制得. 酞酸酯类化合物具有脂溶性,易溶于乙醇,在保健酒的储、运、销过程中与塑料制品(塑料接酒桶、塑料输酒管、酒泵进出处的乳胶管、塑料内盖等)接触，不可避免地产生塑化剂的迁移. 由于酞酸酯类化合物在乙醇中的迁移率与时间有关，随着时间的推移，产品中的酞酸酯类化合物含量会逐渐增高，对人身体健康造成的危害风险上升. 目前对食品中酞酸酯类化合物的检测方法大都采用国家标准[5-7]. 而针对保健酒类样品，由于乙醇的浓度及中药长时间浸泡产生的各种成分基质都会影响到提取的效果，目前还没有针对检测保健酒中塑化剂的相关研究报道. 本文建立了保健酒中酞酸酯的气相色谱-三重四极杆质谱测定方法，为保健酒中酞酸酯污染物的风险监测提供技术支撑.

1 试验部分

1.1 仪器和试剂

TSQ8000evo三重四极杆气相色谱质谱联用仪(Thermo，美国)；旋转蒸发仪(BUCHI，瑞士)；加热板(Thermo，美国)；恒温水浴锅(Memmert，德国).

正己烷(色谱纯)、乙酸乙酯(色谱纯)、二氯甲烷(色谱纯)； 16种邻苯二甲酸酯混合标准溶液(MANHAGE，1 000 μg/mL)，纯度均高于或等于98.0%. 样品：6批保健酒，购于市场.

1.2 仪器条件

1.2.1 气相色谱条件

色谱柱：TR-5 MS (30 m× 0.25 mm×0.25 μm)毛细管色谱柱；柱温箱：60 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升至220 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min的速率升至280 ℃，保持4 min；进样口温度：250 ℃；载气：氦气，纯度大于99.999%；流速：1.0 mL/min；进样方式：不分流进样；进样量：1 μL.

1.2.2 质谱条件

电离方式：电子轰击电离源(EI)；电离能量：70 eV；传输线温度：280 ℃；离子源温度：300 ℃，监测方式：采用时间选择反应扫描模式(T-SRM)，具体检测离子对及其参数如表1所列.

表1 定量分析的具体参数Table 1 Parameters of quantitative analysis by GC-MS

1.3 样品前处理方法

精密称取5 g保健酒样品于具塞比色管中，在沸水浴中加热除去样品中的乙醇，冷却至室温，精密加入2 mL正己烷，剧烈振摇2 min，静置分层，取上清液进行GC-MS/MS检测.

2 结果与讨论

2.1 样品提取条件的选择

2.1.1 提取方式的考察

由于保健酒中含有20%～50%的乙醇，而酞酸酯类化合物溶于乙醇，所以乙醇浓度对邻苯二甲酸酯的提取效率会造成一定的影响，因此本试验考察了0%、20%、30%、40%、50%不同乙醇浓度对提取效率的影响，试验结果表明，不含乙醇的加标样品提取效果最好. 对保健酒类样品去除乙醇的方式进行了考察，分别采用沸水浴加热、减压旋蒸、氮吹和电热板直接加热4种方式进行了比较，结果表明，沸水浴加热去除乙醇效果较好.

2.1.2 提取溶剂的考察

因酞酸酯难溶于水，较易溶于有机溶剂，国家标准[5-7]中的提取溶剂均为正己烷，而多数文献中对酞酸酯类化合物均采用有机溶剂提取[8-10]. 由于保健酒中含有中药类成分，含糖量较高，不同基质干扰不同，本试验在文献的基础上，采用加标回收的方法用正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷不同有机溶剂对保健酒样品进行了提取效果的考察. 通过对比回收率结果发现，正己烷提取效果显著. 结果如图1所示.

图1 不同溶剂提取效果图Fig.1 Extraction effect of different solvents

2.2 质谱条件的优化

国家标准[5-7]中监测方式均采用选择离子扫描(SIM). 本文利用时间选择反应扫描模式(T-SRM)，确立了母离子和子离子，更好的屏蔽了假阳性的干扰，并且针对性地优化采集，只在出峰时间为1.0 min时，窗口进行采集，减少了驻留时间，避免了对质谱检测器的污染. 试验结果如图2所示.

图2 时间选择反应扫描模式下的色谱图Fig.2 TIC chromatogram of PAEs in T-SRM

2.3 线性关系、检出限、回收率和精密度考察

用正己烷配制系列质量浓度为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L 的标准溶液，以标准溶液的质量浓度为横坐标,以相应的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线，得线性方程，如表2所列. 对于溶剂中存在干扰的化合物，需要将本底减去再计算标准曲线，以使标准曲线更加准确. 结果表明，在0.5～8.0 mg/L范围内，16种酞酸酯类物质显良好线性关系，相关系数R2均大于0.995. 采用样品加标的方法，依据色谱峰信噪比S/N=3 计算方法检出限，结果如表2所列.

取适量的保健酒阴性样品，添加 0.5 、2.0、8.0 mg/L 3个浓度水平的标准品，平行测定 6 次. 结果表明，平均回收率为84.0% ～112.8% ，相对标准偏差 (RSD，n= 6 ) 均低于7% . 平均回收率和精密度数据如表2所列.

表2 PAEs的线性方程、相关系数、检出限、回收率及精密度Table 2 Linear equations, correlation coefficients, recoveries and precisions of PAEs

2.5 样品测定

应用所建立的方法, 对6批市售保健酒样品(具体信息如表3所列)进行了16种酞酸酯测定, 结果6批样品中有3批检出，检出率达到了50%. 其中编号4的保健酒检出DBP，质量分数为0.1 mg/kg；编号5检出DBP、DEEP和DPhP，质量分数分别为1.4、1.7、1.1 mg/kg；编号6检出DIBP、DBP和DPP，质量分数分别为2.2、2.4、0.8 mg/kg. 编号为5和6的保健酒中，DBP残留量已超过了GB 9685-2008[11]规定的0.3 mg/kg限量值.

表3 市售6批保健酒样品信息Table 3 Information of 6 health care wines samples

3 结论

本文建立了沸水浴加热去除乙醇，用正己烷提取，气相色谱-三重四极杆质谱测定保健酒中16种酞酸酯的方法. 方法简单、快速、灵敏度高、检出限低、回收率和精密度好，可满足保健酒中邻苯二甲酸酯含量测定的要求. 该方法的建立对于保健酒中邻苯二甲酸酯的风险监测和评估具有重要的意义.

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